이 프로토콜은 화상 통증 및 그 치료의 다양한 측면과 결과에 대한 연구에 적합하며이 연구 분야에 중요한 정보를 제공 할 것으로 예상됩니다. 이 프로토콜은 온수 유도 화상 동물 모델을 수립하고 관련 통증, 보행 장애 및 우울증과 같은 행동 반응을 측정하는 방법을 제안합니다. 이 절차를 시연하는 것은 김재혁 박사의 연구실의 석대생이다.
시작하려면 무게가 20 ~ 25 그램 인 수컷 ICR 마우스를 가볍고 온도가 조절 된 방에 보관하십시오. 마우스가 음식과 물에 자유롭게 접근 할 수있게하고 실험 시작 전에 적어도 일주일 동안 순응하십시오. 일주일 후, 마우스를 실험 또는 대조군에 무작위로 할당하고 맹검 실험을 수행하기위한 코드로 동물 번호를 사용하십시오.
화상 유도를 수행하기 전에 수술 가운, 장갑 및 마스크를 착용하십시오. 다음으로, 마우스를 깊이 마취 한 후 오른쪽 뒷발을 70 % 에탄올로 소독하고 각막 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 용 연고를 바른 다음 각 마우스의 발목에 자국을 만들고 오른쪽 뒷발을 섭씨 65도의 뜨거운 물에 3 초 동안 담그십시오. 화상 부상 후, 마우스를 마취에서 회복 될 때까지 깨끗한 가정 케이지의 가열 패드에 놓습니다.
쥐를 행동 시험실로 데려와 시험 전에 적어도 30 분 동안 순응하게하십시오. 생쥐가 순응하는 동안 수술 가운, 장갑 및 마스크를 착용하십시오. 다음으로, 마우스를 금속 메쉬 바닥의 사각형 상자에 넣고 30 분 동안 순응하게하십시오.
그런 다음 오름차순 자극 방법을 사용하여 뒷발의 기계적 역치를 평가하려면 뒷다리 발바닥을 자극하기 위해 다섯 초에서 여덟 초 간격으로 일련의 Von Frey 필라멘트로 발을 부드럽게 찌릅니다. 다섯 번의 시험을 수행하여 각 동측성 뒷발에 대한 기계적 역치를 평가하십시오. 보행 분석을 위해, 화상 손상 5일 전부터 시작하여 10 내지 15분 동안 매일 보행 분석 시스템에서 마우스를 순응시킨다.
시험 당일, 수술 가운, 장갑 및 마스크를 착용 한 후 마우스를 행동 시험실로 가져 와서 시험 전에 30 분 동안 순응하게 한 다음 보행 분석 프로그램을 시작하고 새 실험 만들기 메뉴를 클릭하여 데이터를 저장할 폴더를 지정하십시오. 지정 후 최대 실행 시간을 5 초로 설정하고 최대 허용 속도 변화를 50 %로 설정 한 다음 프로그램의 설정 탭에서 등록 된 카메라를 선택하고 보도 길이를 30 센티미터로 설정하십시오. 그런 다음 프로그램 메뉴의 획득 한 탭에서 열린 획득을 선택하고 상태 메시지에 따라 스냅 배경 버튼을 클릭하여 빈 보도의 배경 이미지를 얻습니다.
그런 다음 시작 획득 버튼을 클릭하고 마우스를 왼쪽 / 오른쪽 횡단 보도의 입구에 놓습니다. 마우스의 자유로운 움직임에 따라 녹음이 자동으로 시작됩니다. 성공적으로 녹음 한 후 프로그램 메뉴의 획득 한 탭에서 실행 분류를 선택한 다음 분석 할 실행을 선택하고 자동 분류 버튼을 클릭하십시오.
자동 분류가 완료되면 각 실행에서 코, 생식기 인식 및 발을 정크 데이터에 대한 잘못된 인식을 제거한 다음 데이터를 분석하십시오. 행동 시험실에서 30 분의 순응 기간 후, 마우스를 15 센티미터의 물이 들어있는 투명한 플렉시글라스 실린더에 넣고 15 분 동안 놓습니다. 다음날 마우스를 동일한 조건에서 실린더에 다시 넣고 움직이지 않는 시간, 즉 마우스가 등반이나 수영을 멈추고 물 표면 위에 머리로 떠있는 경우입니다.
다음으로, 정상적인 운동 기능을 측정하기 위해, 동물을 장치의 바닥 위 16 센티미터 위에 매달린 롤링 원통형 플랫폼 위에 놓는다. 화상 부상을 유발하기 전에 마우스가 적어도 닷새 동안 로타로드에서 하루에 한 번 훈련하도록하십시오. 약물 투여 후, 2 분의 컷오프 시간으로 2 시간 동안 20 분마다 로타로드 테스트를 수행하십시오.
마우스가 회전하는 막대에서 떨어지지 않고 분당 15회전의 일정한 속도로 달리는 시간을 측정합니다. 화상 손상-유발 마우스의 발 금단 역치는 첫날 이후에 감소하였고, 대조군에 비해 칠일 동안 지속되었다. 아세트아미노펜 투여는 발 금단 역치의 화상 유발 감소를 유의하게 감소시켰다.
추가적으로, 곡선 분석하의 면적은 아세트아미노펜 투여가 화상 손상-유도된 기계적 동종을 유의하게 감소시킨다는 것을 보여주었다. 뒷발 인쇄 부위도 화상 부상을 유발 한 후 크게 감소하고 칠일 동안 지속되었습니다. 아세트아미노펜 투여는 비히클 치료에 비해 뒷발 인쇄 면적을 유의하게 개선시켰다.
또한, 화상 손상은 첫날 이후 동측성 뒷발의 단일 자세를 감소시키고이 감소는 칠일 동안 유지되었다. 뒷발 단일 자세는 아세트아미노펜 투여에 의해 개선되었다. 강제 수영 시험에서, 화상 부상-유도된 마우스의 부동성 시간은 대조군의 것과 비교하여 부상 후 칠일 후에 증가하였다.
아세트아미노펜 투여는 화상 손상-유도된 부동성 시간의 증가를 유의하게 감소시켰다. 로타로드 시험에서, 화상 손상-유도된 마우스의 실행 시간은 화상 유도 후 칠일 후에 대조군의 달리기 시간과 유사하였다. 대조적으로, 알파크솔론 처리된 마우스의 실행 시간은 약 60분 정도 유의하게 감소하였으며, 이는 이러한 화상 손상 방법이 운동 장애를 일으키지 않는다는 것을 나타낸다.
정확한 결과를 얻기 위해 각 동물에게 적용되는 화상의 정도는 일정하게 유지되어야합니다. 이 연구에서 제안 된 다양한 행동 실험 분석 방법은 통증, 보행 장애 및 우울증과 같은 행동과 관련된 다른 동물 모델에도 적용될 수 있습니다. 제안 된 분석 방법은 화상 손상 유도 후 다양한 증상을 정량화 할 수 있으며, 이는 향후 화상 관련 연구 및 치료 방법의 개발에 도움이 될 것입니다.
