Bu protokol, yanık ağrısının ve tedavisinin çeşitli yönleri ve sonuçları üzerine araştırmalar için uygundur ve bu araştırma alanına önemli bilgiler getirmesi beklenmektedir. Bu protokol, sıcak suya bağlı bir yanık hayvan modeli oluşturur ve ilgili ağrıyı, yürüme bozukluklarını ve depresyon benzeri davranışsal tepkileri ölçmek için bir yöntem önerir. Prosedürü gösteren, Dr. Kim'in laboratuvarında yüksek lisans öğrencisi olan Jaehyuk Kim olacak.
Başlamak için, 20 ila 25 gram ağırlığındaki erkek ICR farelerini hafif ve sıcaklık kontrollü bir odada barındırın. Farelerin yiyecek ve suya serbestçe erişmesine izin verin ve deneyin başlamasından en az bir hafta önce iklimlendirin. Bir hafta sonra, fareleri rastgele deney veya kontrol grubuna atayın ve kör deneyler yapmak için hayvan numaralarını kod olarak kullanın.
Yanık indüksiyonunu gerçekleştirmeden önce, cerrahi bir elbise, eldiven ve maske giyin. Daha sonra, fareyi derinlemesine anestezi altına aldıktan sonra,% 70 etanol ile sağ arka pençenin etrafını dezenfekte edin ve kornea kurumasını önlemek için gözlere oftalmik bir merhem uygulayın, ardından her farenin ayak bileğinde bir iz bırakın ve sağ arka pençeyi üç saniye boyunca 65 santigrat derecede sıcak suya batırın. Yanık yaralanmasından sonra, fareyi anesteziden kurtulana kadar temiz bir ev kafesinde bir ısıtma yastığına yerleştirin.
Fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten en az 30 dakika önce iklimlendirmelerine izin verin. Fareler iklimlendirilirken, cerrahi bir elbise, eldiven ve maske giyin. Daha sonra, fareleri metal bir ağ zemindeki kare bir kutuya yerleştirin ve 30 dakika daha iklimlendirmelerine izin verin.
Daha sonra, yükselen uyaran yöntemini kullanarak arka pençenin mekanik eşiğini değerlendirmek için, arka plantarı uyarmak için pençeyi beş ila sekiz saniyelik aralıklarla bir dizi Von Frey filamentiyle hafifçe dürtün. Her ipsilateral arka pençe için mekanik eşikleri değerlendirmek üzere beş deneme yapın. Yürüyüş analizi için, yanık yaralanmasından beş gün önce başlayarak 10 ila 15 dakika boyunca yürüyüş analiz sistemindeki fareleri günlük olarak iklimlendirin.
Test gününde, cerrahi önlük, eldiven ve maske giydikten sonra, fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten önce 30 dakika boyunca iklimlendirmelerine izin verin, ardından yürüyüş analizi programını başlatın ve verileri kaydedecek klasörü belirlemek için yeni deney oluştur menüsüne tıklayın. Atamadan sonra, maksimum çalışma süresini beş saniyeye ve izin verilen maksimum hız değişimlerini% 50'ye ayarlayınDaha sonra, programın kurulum sekmesinde, kayıtlı bir kamera seçin ve yürüyüş yolu uzunluğunu 30 santimetreye ayarlayın. Ardından, program menüsünün edinilen sekmesinde, alımı aç'ı seçin ve durum mesajlarına dayanarak, boş bir yürüyüş yolunun arka plan görüntüsünü almak için arka planı tutturun düğmesine tıklayın.
Ardından, edinimi başlat düğmesine tıklayın ve fareyi sol / sağ enine geçitin girişine yerleştirin. Kayıt, farenin serbest hareketini takiben otomatik olarak başlayacaktır. Başarılı bir kayıttan sonra, program menüsünün edinilen sekmesinden çalıştırmaları sınıflandır'ı seçin, ardından analiz edilecek çalıştırmayı seçin ve otomatik sınıflandırın düğmesine tıklayın.
Otomatik sınıflandırma tamamlandıktan sonra, her çalıştırmada burun, genital tanıma ve pençelerin önemsiz verilere yanlış tanınmasını kaldırın, ardından verileri analiz edin. Davranışsal test odasında 30 dakikalık bir iklimlendirme süresinden sonra, fareyi 15 dakika boyunca 15 santimetre su içeren berrak bir Pleksiglas silindire yerleştirin. Ertesi gün, fareyi aynı koşullar altında tekrar silindire yerleştirin ve hareketsizlik süresini ölçün, yani fare tırmanmayı veya yüzmeyi bıraktığında ve sadece başını su yüzeyinin üzerinde tutarak yüzdüğü zaman.
Daha sonra, normal motor fonksiyonunu ölçmek için, hayvanı aparatın tabanından 16 santimetre yukarıda asılı duran silindirik bir platforma yerleştirin. Yanık yaralanmasına neden olmadan önce, farelerin rotarodda günde bir kez en az beş gün boyunca antrenman yapmasına izin verin. İlaç uygulamasından sonra, iki dakika kesme süresi ile iki saat boyunca her 20 dakikada bir rotarod testi yapın.
Farenin dönen bir çubuk üzerinde düşmeden dakikada 15 devir sabit hızda çalıştığı süreyi ölçün. Yanık yaralanmasına bağlı farelerin pençe çekilme eşiği ilk günden sonra azaldı ve kontrol grubuna kıyasla yedi gün boyunca sürdürüldü. Asetaminofen uygulaması, pençe çekilme eşiğinde yanık kaynaklı azalmayı önemli ölçüde azaltmıştır.
Ek olarak, eğri analizi altındaki alan, asetaminofen uygulamasının yanık yaralanmasına bağlı mekanik allodiniyi önemli ölçüde azalttığını göstermiştir. Arka pençe baskı alanı da yanık yaralanmasının indüksiyonundan sonra önemli ölçüde azaldı ve yedi gün boyunca devam etti. Asetaminofen uygulaması, araç tedavisine kıyasla arka pençe baskı alanını önemli ölçüde iyileştirdi.
Ayrıca, yanık yaralanması ilk günden sonra ipsilateral arka pençenin tek duruşunu azalttı ve bu azalma yedi gün boyunca korundu. Arka pençe tek duruşu asetaminofen uygulaması ile iyileştirildi. Zorla yüzme testinde, yanık yaralanmasına bağlı farelerin hareketsizlik süreleri, kontrol grubununkilere kıyasla yaralanmadan yedi gün sonra artmıştır.
Asetaminofen uygulaması, hareketsizlik süresinde yanık yaralanmasına bağlı artışı önemli ölçüde azaltmıştır. Rotarod testinde, yanık yaralanmasına bağlı farelerin çalışma süreleri, yanık indüksiyonundan yedi gün sonra kontrol grubununkilere benzerdi. Buna karşılık, alfaksolon ile tedavi edilen farelerin çalışma süreleri, bu yanık yaralanması yönteminin motor bozulmaya neden olmadığını gösteren yaklaşık 60 dakika azalmıştır.
Doğru sonuçlar elde etmek için her hayvana uygulanan yanığın derecesi sabit tutulmalıdır. Bu çalışmada önerilen çeşitli davranışsal deneysel analiz yöntemleri, ağrı, yürüme bozukluğu ve depresyon benzeri davranışlarla ilgili diğer hayvan modellerine de uygulanabilir. Önerilen analiz yöntemleri, yanık yaralanmasının indüklenmesinden sonra çeşitli semptomları ölçebilir ve bu da gelecekte yanıkla ilgili araştırma ve tedavi yöntemlerinin geliştirilmesine yardımcı olacaktır.
