烧伤诱导的疼痛和小鼠抑郁样行为

该方案适用于烧伤疼痛及其治疗的各个方面和结果的研究，有望为该研究领域带来重要信息。该协议建立了热水诱导的烧伤动物模型，并提出了一种测量相关疼痛，步态障碍和抑郁样行为反应的方法。演示该程序的将是Kim博士实验室的硕士生Jaehyuk Kim。

首先，将体重20至25克的雄性ICR小鼠安置在光照和温度受控的房间里。让小鼠在实验开始前自由获得食物和水，并适应环境至少一周。一周后，将小鼠随机分配到实验组或对照组，并使用动物编号作为进行盲实验的代码。

在进行烧伤诱导之前，请穿戴手术服，手套和口罩。接下来，在深度麻醉小鼠后，用70%乙醇消毒右后爪周围，并在眼睛上涂抹眼药膏以防止角膜干燥，然后在每只小鼠的脚踝上做一个标记，并将右后爪浸入65摄氏度的热水中三秒钟。烧伤后，将鼠标放在干净的家庭笼子中的加热垫上，直到它从麻醉中恢复。

将小鼠带到行为测试室，让它们在测试前至少适应30分钟。当老鼠适应环境时，穿上手术服，手套和口罩。接下来，将小鼠放入金属网地板上的方形盒子中，让它们再适应30分钟。

然后使用上升刺激法评估后爪的机械阈值，以五到八秒的间隔用一系列Von Frey细丝轻轻戳爪子，以刺激后足。进行五次试验以评估每个同侧后爪的机械阈值。对于步态分析，每天在步态分析系统中适应小鼠，从烧伤前五天开始，持续10至15分钟。

在测试当天，戴上手术服、手套和口罩后，将小鼠带到行为测试室，让它们在测试前适应30分钟，然后启动步态分析程序，点击新建实验菜单，指定保存数据的文件夹。指定后，将最大运行时间设置为5秒，将最大允许速度变化设置为50%接下来，在程序的设置选项卡中，选择已注册的相机并将走道长度设置为30厘米。然后在程序菜单的"获取"选项卡上，选择"打开采集"，并根据状态消息，单击快照背景按钮以获取空走道的背景图像。

接下来，单击开始采集按钮，并将鼠标放在左/右横穿走道的入口处。录制将在鼠标自由移动后自动开始。成功录制后，从程序菜单的"获取"选项卡中选择"分类运行"，然后选择要分析的运行并单击"自动分类"按钮。

自动分类完成后，在每次运行中去除鼻子，生殖器识别和爪子的错误识别到垃圾数据，然后分析数据。在行为测试室中适应30分钟后，将小鼠放入装有15厘米水的透明Plexiglas圆柱体中15分钟。第二天，在相同条件下再次将鼠标放入圆柱体中并测量静止时间，即鼠标停止攀爬或游泳并且头部漂浮在水面上方时。

接下来，为了测量正常的运动功能，将动物放在悬挂在设备底部上方16厘米处的滚动圆柱形平台上。在诱导烧伤之前，让小鼠每天在轮转上训练一次至少五天。给药后，每20分钟进行一次轮转试验，持续两小时，截止时间为两分钟。

测量鼠标以每分钟15转的恒定速度在旋转杆上运行而不掉落的时间。与对照组相比，烧伤诱导小鼠的爪子退出阈值在第一天后降低，并持续7天。对乙酰氨基酚给药显著降低了烧伤诱导的爪子戒断阈值的降低。

此外，曲线下面积分析表明，对乙酰氨基酚给药显著降低了烧伤引起的机械性异常性疼痛。后爪印面积在引诱烧伤后也明显减少，持续7天。与载体治疗相比，对乙酰氨基酚给药显著改善了后爪印面积。

此外，烧伤在第一天后减少了同侧后爪的单一姿势，并且这种减少维持了七天。对乙酰氨基酚给药改善后爪单姿势。在强制游泳试验中，与对照组相比，烧伤诱导的小鼠在受伤后7天的不动时间增加。

对乙酰氨基酚给药显著减少了烧伤引起的不动时间增加。在rotrorod测试中，烧伤诱导小鼠的运行时间与烧伤诱导后7天的对照组相似。相比之下，甲氧醬酮治疗小鼠的运行时间显着减少约60分钟，表明这种烧伤方法不会引起运动障碍。

施加在每只动物身上的烧伤程度必须保持恒定，以获得准确的结果。本研究中提出的各种行为实验分析方法也可以应用于与疼痛，步态障碍和抑郁样行为相关的其他动物模型。所提出的分析方法可以量化烧伤诱导后的各种症状，这将有助于未来烧伤相关研究和治疗方法的发展。