פרוטוקול זה מתאים למחקר על ההיבטים השונים ותוצאות כאבי הכוויה והטיפול בו, וצפוי להביא מידע חשוב לתחום מחקר זה. פרוטוקול זה קובע מודל בעלי חיים כוויות המושרה במים חמים ומציע שיטה למדידת כאב קשור, הפרעות בהליכה ותגובות התנהגותיות דמויות דיכאון. מי שידגים את ההליך יהיה ג'הייוק קים, סטודנט לתואר שני במעבדתו של ד"ר קים.
כדי להתחיל, לשכן את עכברי ICR זכר במשקל 20 עד 25 גרם בחדר אור מבוקר טמפרטורה. אפשר לעכברים גישה חופשית למזון ומים ולהתאקלם לפחות שבוע לפני תחילת הניסוי. לאחר שבוע, הקצו את העכברים באופן אקראי לקבוצת הניסוי או הבקרה והשתמשו במספרי בעלי חיים כקודים לעריכת ניסויים עיוורים.
לפני ביצוע אינדוקציה כוויות, ללבוש שמלה כירורגית, כפפות, ומסכה. לאחר מכן, לאחר מרדים עמוק את העכבר, לחטא סביב הכף האחורית הימנית עם 70% אתנול ולהחיל משחה עיניים על העיניים כדי למנוע ייבוש הקרנית, ולאחר מכן להטביע את הטביעה על הקרסול של כל עכבר לטבול את הכף האחורית הימנית במים חמים ב 65 מעלות צלזיוס במשך שלוש שניות. לאחר פציעת הכוויה, מניחים את העכבר על כרית חימום בכלוב ביתי נקי עד שהוא מתאושש מהרדמה.
הביאו את העכברים לחדר הבדיקות ההתנהגותיות ותנו להם להתאקלם לפחות 30 דקות לפני הבדיקה. בזמן שהעכברים מתאקלמים, לבשו שמלה כירורגית, כפפות ומסכה. לאחר מכן, מניחים את העכברים לתוך קופסה מרובעת על רצפת רשת מתכת ולתת להם להתאקלם במשך 30 דקות נוספות.
לאחר מכן, כדי להעריך את הסף המכני של כף הרגל האחורית באמצעות שיטת הגירוי העולה, דוקר בעדינות את כף הרגל עם סדרה של חוטי פון פריי במרווחים של חמש עד שמונה שניות כדי לעורר את plantar האחורי. בצע חמישה ניסויים כדי להעריך סף מכני עבור כל כף אחורית ipsilateral. לניתוח הליכה, התאקלם העכברים במערכת ניתוח ההליכה מדי יום במשך 10 עד 15 דקות החל מחמישה ימים לפני פציעת הכוויה.
ביום המבחן, לאחר שלבשו שמלה כירורגית, כפפות ומסכה, הביאו את העכברים לחדר הבדיקות ההתנהגותיות ותנו להם להתאקלם במשך 30 דקות לפני הבדיקה, ואז התחילו את תוכנית ניתוח ההליכה ולחצו על תפריט הניסוי החדש כדי לייעד את התיקייה לשמירת הנתונים. לאחר הייעוד, הגדר את זמן הריצה המרבי לחמש שניות ואת וריאציות המהירות המרביות המותרות ל- 50%הבא, בכרטיסיית ההתקנה של התוכנית, בחר מצלמה רשומה והגדר את אורך המסלול ל -30 ס"מ. לאחר מכן, בכרטיסיה הנרכשת של תפריט התוכנית, בחר רכישה פתוחה ובהתבסס על הודעות המצב, לחץ על לחצן הרקע של הצמדה כדי להשיג תמונת רקע של שביל ריק.
לאחר מכן, לחץ על כפתור הרכישה התחל והמקם את העכבר בכניסה לשביל החצייה השמאלית/ימנית. ההקלטה תתחיל באופן אוטומטי בעקבות התנועה החופשית של העכבר. לאחר הקלטה מוצלחת, בחר סיווג פועל מהכרטיסיה שנרכשה של תפריט התוכנית, ולאחר מכן בחר את הריצה שיש לנתח ולחץ על כפתור הסיווג האוטומטי.
לאחר השלמת הסיווג האוטומטי, הסר את זיהוי האף, איברי המין וזיהוי שגוי של כפות הרגליים לנתוני זבל בכל ריצה, ולאחר מכן נתח את הנתונים. לאחר תקופת התאקלמות של 30 דקות בחדר הבדיקה ההתנהגותית, מניחים את העכבר בגליל פרספקס צלול המכיל 15 ס"מ של מים במשך 15 דקות. למחרת, מניחים את העכבר לתוך הגליל שוב באותם תנאים ולמדוד את זמן חוסר התנועה, כלומר כאשר העכבר מפסיק לטפס או לשחות ופשוט צף עם ראשו מעל פני המים.
לאחר מכן, כדי למדוד תפקוד מוטורי רגיל, מניחים את החיה על פלטפורמה גלילית מתגלגלת תלויה 16 ס"מ מעל החלק התחתון של המנגנון. לפני גרימת פציעת כוויות, לאפשר לעכברים להתאמן פעם ביום על rotarod במשך חמישה ימים לפחות. לאחר מינהל התרופות, לבצע בדיקת rotarod כל 20 דקות במשך שעתיים עם זמן ניתוק של שתי דקות.
מדוד את משך הזמן שהעכבר פועל על מוט מסתובב במהירות קבועה של 15 סיבובים לדקה מבלי ליפול. סף נסיגת הכפות של עכברים כתוצאה מפציעות כוויות ירד לאחר היום הראשון ונמשך במשך שבעה ימים בהשוואה לקבוצת הביקורת. ממשל פרצטמול הפחית באופן משמעותי את הירידה הנגרמת על ידי שריפה בסף גמילה כף הרגל.
בנוסף, האזור תחת ניתוח העקומה הראה כי ניהול פרצטמול הפחית באופן משמעותי את אלודיניה מכנית הנגרמת על ידי פציעת כוויות. גם אזור הדפסת כף הרגל האחורית הצטמצם משמעותית לאחר אינדוקציה של פציעת כוויות ונמשך שבעה ימים. ניהול Acetaminophen שיפר באופן משמעותי את אזור ההדפסה כף הרגל האחורית בהשוואה לטיפול ברכב.
יתר על כן, פציעת כוויות הפחיתה את העמדה היחידה של כף הרגל האחורית ipsilateral לאחר היום הראשון וירידה זו נשמרה במשך שבעה ימים. תנוחת כף הרגל האחורית השתפרה על ידי ממשל פרצטמול. במבחן השחייה הכפוי, זמני חוסר התנועה של העכברים הנגרמים מפציעות כוויות הוגדלו שבעה ימים לאחר הפציעה בהשוואה לאלו של קבוצת הביקורת.
ניהול פרצטמול הפחית באופן משמעותי את העלייה הנגרמת מפציעת כוויות בזמן חוסר תנועה. במבחן הרוטרוד, זמני הריצה של העכברים הנגרמים מפציעת כוויות היו דומים לאלה של קבוצת הביקורת שבעה ימים לאחר אינדוקציה כוויות. לעומת זאת, זמני הריצה של עכברים שטופלו באלפקסולון פחתו באופן משמעותי בכ -60 דקות, מה שמצביע על כך ששיטת פגיעה בכוויות זו אינה גורמת לפגיעה מוטורית.
יש לשמור על מידת הכוויה החלה על כל בעל חיים כדי להשיג תוצאות מדויקות. שיטות הניתוח הניסיוניות ההתנהגותיות השונות המוצעות במחקר זה יכולות להיות מיושמות גם על מודלים אחרים של בעלי חיים הקשורים לכאב, הפרעות בהליכה והתנהגות דמוית דיכאון. שיטות הניתוח המוצעות יכולות לכמת תסמינים שונים לאחר אינדוקציה של פגיעת כוויות, אשר יהיה מועיל לפיתוח שיטות מחקר וטיפול הקשורות לכוויות בעתיד.
