의식 쥐의 쇄골 하 정맥에서 반복적 인 혈액 샘플링

약동학 및 독성 동태학 연구에서 우리는 약물 노출을 감지하기 위해 쥐의 특정 시점에서 일정량의 혈액을 수집해야 합니다. 이 연구는이 프로토콜에서 쥐의 쇄골 하 정맥에서 혈액을 수집하는 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다. 이 기술은 마취없이 반복적이고시기 적절하며 쉽게 식별 할 수있는 샘플링을 가능하게하고 반복적 인 샘플 수집을 통해 고품질 혈액을 얻습니다.

쇄골 하 정맥의 해부학, 유능한 쥐 구속 및 바늘 점을 알아야합니다. 이 방법은 위험하며 자격을 갖춘 전문가가 필요합니다. 시작하려면 쥐의 목과 앞다리 사이의 쇄골 하 삼각형 포사의 가장 낮은 지점을 찾으십시오.

머리쪽으로 약 2-3 밀리미터를 움직여 혈액 수집 부위의 바늘 지점에 도달하십시오. 전기 면도기를 사용하여 머리카락을 제거하십시오. 쥐의 머리, 목, 가슴을 똑바로 세우려면 한 손으로 목 뒤쪽의 피부를 잡고 주사 부위를 노출시킵니다.

주사 부위의 앞다리를 곧게 펴서 수평을 유지하십시오. 다른 손으로 주사기를 쥐의 머리와 평행하게 유지하고 주사기를 바깥쪽으로 5도에서 10도 기울여 팁이 복부 방향으로 기울어 지도록합니다. 바늘을 전방에 완전히 삽입하십시오.

튜브와 부압을 유지하기 위해 주사기를 뒤로 당깁니다. 바늘을 깊은 곳에서 얕은 곳으로 천천히 옮기고 같은 경로를 백업하십시오. 혈액이 주사기 바늘에 들어가면 바늘의 위치를 고정하십시오.

쥐의 체중과 건강 상태에 따라 기관의 동물 관리 및 사용위원회가 정한 기준에 따라 채취 할 최대 혈액량을 모니터링하십시오. 다른 요구 사항이없는 경우 24 시간 이내에 동물의 총 혈액량의 20 % 이상을 제거하지 마십시오. 충분한 혈액 샘플이 수집되면 즉시 주사기를 꺼내 혈액 치료를 준비하십시오.

출혈을 멈추기 위해 쥐의 주사 부위에 1-2 분 동안 압력을 가하십시오. 수집 부위가 목 아래 부분에 있기 때문에 쇄골 하 정맥의 피부를 꼬집어 출혈을 멈추십시오. 주사기에서 바늘을 제거하고 날카로운 도구 용기에 버립니다.

주사기에서 1.5 밀리리터 튜브로 혈액을 천천히 옮깁니다. 기포 형성을 피하기 위해 주사기를 벽에 대고 누르십시오. 마이크로 원심 분리기 튜브의 뚜껑을 닫고 부드럽게 튕깁니다.

혈액과 항응고제를 적어도 5 번 거꾸로 뒤집어 철저히 섞으십시오. 혈장을 수집한 후 120분 이내에, 전혈 샘플을 실온에서 10 내지 15분 동안 2, 000 RCF에서 원심분리한다. 피펫 건을 사용하여 상부 플라즈마를 새로운 마이크로 원심 분리기 튜브로 옮깁니다.

피펫 헤드를 더 낮은 전혈로 만지지 마십시오. 적혈구로 오염된 혈장을 폐기하거나 다시 원심분리하십시오. 쇄골하 정맥으로부터 정확하게 수집된 혈장 샘플은 반투명 옅은 황색이었다.

부적절한 채혈 또는 조작으로 인해 용혈이 발생했습니다. 첫 번째 샘플링 동안 수컷 동물의 체중은 268-297g, 암컷의 경우 약 214-239g이었습니다. 마지막 샘플링 동안 수컷 동물의 체중은 376-462g, 암컷의 경우 약 254-300g이었습니다.

독성 동태 학적 혈액 수집 사이에는 28 일의 간격이있었습니다. 동물의 체중은 매주 꾸준히 증가했으며 임상 관찰은 정상이었습니다. 정확한 바늘 삽입 방법과 각도는 원활한 혈액 수집을 보장하고 위험을 피할 수 있습니다.

이 작업은 반복적 인 연습이 필요합니다.