يقدم هذا البروتوكول تقنية معقمة للاستخدام مع C.Elegans التي تلغي الحاجة إلى لهب مفتوح. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تقلل من مخاطر السلامة عن طريق القضاء على اللهب المكشوف ويمكن استخدامها في المساحات المختبرية بدون خطوط غاز وفي أغطية التدفق الرقائقي. قد يكون تحريك الأدوات داخل وخارج منطقة التعقيم دون لمس الجانبين أمرا صعبا ، ولكن إضافة دليل وتثبيت يدك يجعل الحركة أسهل.
ابدأ بتوصيل دليل ملحق حامل الحلقة بالمحرقة الدقيقة عن طريق قصها على البرميل الخارجي. قم بتوصيل المحرقة الدقيقة بمأخذ تيار كهربائي قياسي بقوة 120 أو 230 فولت حسب الاقتضاء. أدر المحرقة الدقيقة إلى الإعداد العالي واتركها تسخن لمدة 10 إلى 20 دقيقة للوصول إلى درجة حرارة مثالية تتراوح بين 800 إلى 825 درجة مئوية.
أدخل الأداة في منطقة التعقيم الأسطوانية دون لمس الجانبين عن طريق تحريكها على طول الدليل. أمسك الأداة في منطقة التعقيم لمدة خمس إلى سبع ثوان. قم بإزالة الأداة دون لمس الجانبين عن طريق الانزلاق للخلف على طول الدليل.
بالنسبة للاختيارات ، اترك الأداة تبرد لمدة ثلاث إلى خمس ثوان قبل لمس الدودة لتجنب حرقها. بعد قطف الديدان، أعد إدخال القطف في الغرفة لمدة خمس إلى سبع ثوان لحرق أي ديدان على اللقطة. قم بتوصيل موقد بنسن بخط الغاز باستخدام أنابيب مطاطية.
تأكد من تأمين الأنبوب بإحكام ووضع الموقد بعيدا عن الأشياء العلوية. قم بتشغيل الغاز عن طريق تدوير المقبض على خط الغاز. أشعل الموقد باستخدام مهاجم أو أخف وزنا.
اضبط اللهب باستخدام مقبض الغاز ومدخل الهواء حتى يظهر مخروط أزرق. امسك المعول أو الملعقة أو المشرط في اللهب حتى يتوهج باللون الأحمر. بالنسبة للاختيارات ، اترك الأداة تبرد لمدة ثلاث إلى خمس ثوان قبل لمس الدودة لتجنب حرقها.
بعد اختيار الديدان ، أعد إدخال القطف في اللهب لحرق أي ديدان على الاختيار. استزراع بكتيريا OP50 E.coli في مرق لوريا بين عشية وضحاها على شاكر 37 درجة مئوية. بعد الثقافة بين عشية وضحاها، قم بتخفيف الثقافة في الماء المعقم بنسبة 1:100.
اغمس دودة معقمة باستخدام موقد بنسن أو محرقة صغيرة في المحلول البكتيري ، وأعد تعقيمها ، وقم بتدويرها في 100 ميكرولتر من الماء المعقم. للتحكم الإيجابي ، اغمس القطف في محلول بكتيري ، وقم بالدوران في الماء المعقم ، وللتحكم السلبي ، قم بتعقيم القطف دون غمس في محلول بكتيري ثم قم بالدوران في الماء المعقم. ضعي 100 ميكرولتر من الماء على طبق من أجار بيتري من مرق لوريا بطول 10 سنتيمترات ، وانشري الماء باستخدام موزع خلايا معقم ، واحتضنيه في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة مع تشغيل الغطاء.
عد المستعمرات يدويا بعد فترة الحضانة. تم قياس معدل التلوث النسبي عن طريق حساب عدد المستعمرات لكل عينة. في لوحات التحكم السلبية ، تم العثور على مستعمرات صفرية.
تم الحصول على متوسط عدد 4.7 مستعمرات مع خطأ قياسي قدره 0.3 مستعمرة عندما تم استخدام موقد بنسن لتعقيم اللقطات. وقد لوحظ متوسط عدد 3.3 مستعمرات مع خطأ قياسي قدره 1.2 مستعمرة في حالة المحرقة الصغيرة. ومع ذلك ، تم الحصول على متوسط عدد 298.3 مستعمرة في حالة التحكم الإيجابية.
وبالتالي ، حققت المحرقة الدقيقة نتائج العقم بنفس القدر من الفعالية لموقد بنسن. بعد هذا الإجراء ، يمكن تنفيذ أي طرق تنطوي على اختيار أو قطع C.Elegans. وبالتالي ، فإنه ينطبق على مجموعة واسعة من الأسئلة البحثية.
