Ce protocole présente une technique aseptique à utiliser avec C.Elegans qui élimine le besoin d’une flamme nue. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle réduit les risques pour la sécurité en éliminant une flamme nue et peut être utilisée dans des espaces de laboratoire sans conduites de gaz et dans des hottes à flux laminaire. Déplacer les instruments dans et hors de la zone de stérilisation sans toucher les côtés peut être difficile, mais l’ajout d’un guide et la stabilisation de votre main facilitent le mouvement.
Commencez par fixer un guide d’accessoire de support de boucle au micro-incinérateur en le clipsant sur le canon extérieur. Branchez le micro-incinérateur sur une prise électrique standard de 120 ou 230 volts, selon le cas. Tournez le micro-incinérateur au réglage Élevé et laissez-le se réchauffer pendant 10 à 20 minutes pour atteindre une température optimale entre 800 et 825 degrés Celsius.
Insérez l’instrument dans la zone de stérilisation cylindrique sans toucher les côtés en le faisant glisser le long du guide. Tenez l’instrument dans la zone de stérilisation pendant cinq à sept secondes. Retirez l’instrument sans toucher les côtés en glissant vers l’arrière le long du guide.
Pour les pics, laissez refroidir l’instrument pendant trois à cinq secondes avant de toucher un ver pour éviter de le brûler. Après avoir cueilli les vers, réinsérez le pic dans la chambre pendant cinq à sept secondes pour incinérer les vers sur le pic. Connectez un brûleur Bunsen à la conduite de gaz à l’aide d’un tube en caoutchouc.
Assurez-vous de bien fixer le tube et de positionner le brûleur loin des objets aériens. Allumez le gaz en tournant le bouton de la conduite de gaz. Allumez le brûleur à l’aide d’un gâche ou d’un briquet.
Réglez la flamme à l’aide du bouton de gaz et de l’entrée d’air jusqu’à ce qu’un cône bleu soit visible. Tenez le pic, la spatule ou le scalpel dans la flamme jusqu’à ce qu’il brille en rouge. Pour les pics, laissez refroidir l’instrument pendant trois à cinq secondes avant de toucher un ver pour éviter de le brûler.
Après avoir cueilli des vers, réinsérez le pic dans la flamme pour incinérer tous les vers sur le pic. Culture de la bactérie OP50 E. coli dans le bouillon Luria pendant la nuit sur un shaker à 37 degrés Celsius. Après la culture pendant la nuit, diluer la culture dans de l’eau stérile dans un rapport de 1:100.
Trempez un pic à vers stérilisé à l’aide d’un brûleur Bunsen ou d’un micro-incinérateur dans la solution bactérienne, retérilisez-le et faites-le tourbillonner dans 100 microlitres d’eau stérile. Pour le contrôle positif, trempez le pic dans une solution bactérienne, tourbillonnez dans de l’eau stérile et, pour le contrôle négatif, stérilisez le pic sans plonger dans une solution bactérienne, puis tourbillonnez dans l’eau stérile. Plaquez les 100 microlitres d’eau sur une boîte de Petri à gélose de bouillon Luria de 10 centimètres, étalez l’eau à l’aide d’un épandeur de cellules stériles et incubez à température ambiante pendant 24 heures avec le couvercle.
Comptez les colonies manuellement après la période d’incubation. Le taux de contamination relatif a été mesuré en comptant le nombre de colonies par échantillon. Dans les plaques témoins négatives, aucune colonie n’a été trouvée.
Un nombre moyen de 4,7 colonies avec une erreur-type de 0,3 colonies a été obtenu lorsque le brûleur Bunsen a été utilisé pour stériliser les pics. Un nombre moyen de 3,3 colonies avec une erreur-type de 1,2 colonies a été observé dans l’état de micro-incinérateur. Cependant, un dénombrement moyen de 298,3 colonies a été obtenu dans la condition de contrôle positif.
Ainsi, le micro-incinérateur a obtenu des résultats de stérilité aussi efficaces que le brûleur Bunsen. En suivant cette procédure, toutes les méthodes impliquant la cueillette ou le fractionnement de C.Elegans peuvent être effectuées. Ainsi, il est applicable à une grande variété de questions de recherche.
