C. elegans Picks, Spatulas, Scalpels를 살균하기위한 화염없는 방법

이 프로토콜은 C.Elegans와 함께 사용할 수있는 무균 기술을 제공하여 화염의 필요성을 제거합니다. 이 기술의 주요 장점은 화염을 제거하여 안전 위험을 줄이고 가스 라인이없는 실험실 공간 및 층류 후드에서 사용할 수 있다는 것입니다. 측면을 만지지 않고 멸균 영역 안팎으로 악기를 움직이는 것은 어려울 수 있지만 가이드를 추가하고 손을 안정화하면 움직임이 더 쉬워집니다.

루프 홀더 액세서리 가이드를 마이크로 소각로에 부착하여 외부 배럴에 클리핑하여 시작하십시오. 마이크로 소각로를 표준 120V 또는 230V 전기 콘센트에 적절하게 꽂습니다. 마이크로 소각로를 높음 설정으로 돌리고 섭씨 800도에서 825도 사이의 최적 온도에 도달하기 위해 10 ~ 20 분 동안 예열하십시오.

가이드를 따라 밀어 측면을 만지지 않고 원통형 살균 영역에 장비를 삽입하십시오. 악기를 살균 구역에서 다섯 초에서 일곱 초 동안 유지하십시오. 가이드를 따라 뒤로 밀어 측면을 만지지 않고 계측기를 분리합니다.

픽의 경우, 웜을 만지기 전에 악기를 삼 ~ 다섯 초 동안 식혀서 태우지 않도록하십시오. 웜을 따낸 후, 픽을 챔버에 다섯 초에서 일곱 초 동안 다시 삽입하여 픽의 웜을 소각합니다. 고무 튜브를 사용하여 Bunsen 버너를 가스 라인에 연결하십시오.

튜브를 단단히 고정하고 버너를 오버 헤드 물체로부터 멀리 떨어 뜨려야합니다. 가스 라인의 손잡이를 돌려 가스를 켭니다. 스트라이커 또는 라이터를 사용하여 버너에 불을 붙입니다.

파란색 원뿔이 보일 때까지 가스 손잡이와 공기 흡입구를 사용하여 화염을 조정하십시오. 픽, 주걱 또는 메스가 빨간색으로 빛날 때까지 불꽃 속에서 잡으십시오. 픽의 경우, 웜을 만지기 전에 악기를 삼 ~ 다섯 초 동안 식혀서 태우지 않도록하십시오.

웜을 따낸 후, 픽을 화염에 다시 삽입하여 픽의 웜을 소각합니다. OP50 E.coli 박테리아를 루리아 브로스에서 섭씨 37도 쉐이커에서 하룻밤 동안 배양한다. 밤새 배양한 후, 배양물을 멸균수에 1:100의 비율로 희석한다.

Bunsen 버너 또는 마이크로 소각로를 사용하여 멸균 된 웜 픽을 박테리아 용액에 담그고 다시 살균 한 다음 100 마이크로 리터의 멸균수에 소용돌이 치십시오. 양성 대조군의 경우, 픽을 박테리아 용액에 담그고 멸균수에 소용돌이 치며 음성 대조군의 경우 박테리아 용액에 담그지 않고 픽을 살균 한 다음 멸균수로 소용돌이 치십시오. 100 마이크로리터의 물을 10 센티미터 루리아 브로스 한천 페트리 접시에 플레이트하고, 멸균 세포 스프레더를 사용하여 물을 퍼뜨리고, 뚜껑을 켠 상태에서 실온에서 24시간 동안 인큐베이션한다.

잠복기 후에 콜로니를 수동으로 계산하십시오. 상대적 오염률은 샘플당 콜로니의 수를 계수하여 측정하였다. 음성 대조군 플레이트에서, 제로 콜로니가 발견되었다.

0.3 콜로니의 표준 오차를 갖는 4.7 콜로니의 평균 카운트는 Bunsen 버너가 픽을 살균하기 위해 사용될 때 얻어졌다. 1.2 콜로니의 표준 오차를 갖는 3.3 콜로니의 평균 카운트가 마이크로 소각로 조건에서 관찰되었다. 그러나, 양성 대조군 조건에서 298.3 콜로니의 평균 카운트가 얻어졌다.

따라서, 마이크로 소각로는 Bunsen 버너에 동등하게 효과적인 멸균 결과를 달성하였다. 이 절차에 따라 C.Elegans의 선택 또는 청크와 관련된 모든 방법을 수행 할 수 있습니다. 따라서, 다양한 연구 질문에 적용 가능하다.