一种无焰灭菌 秀丽隐杆线虫 镐、抹刀和手术刀的方法

该协议提出了一种用于秀丽隐杆线虫的无菌技术，无需明火。该技术的主要优点是，它通过消除明火来减少安全隐患，并且可以在没有气体管路的实验室空间和层流罩中使用。在不接触侧面的情况下将器械移入和移出灭菌区域可能很困难，但添加导轨并稳定手部会使移动更容易。

首先将环架附件导轨连接到微型焚烧炉，将其夹在外桶上。根据需要将微型焚烧炉插入标准 120 伏或 230 伏电源插座。将微型焚烧炉调至"高"设置，并使其预热10至20分钟，以达到800至825摄氏度之间的最佳温度。

将仪器插入圆柱形灭菌区域，沿导轨滑动，无需接触侧面。将仪器放在灭菌区域五到七秒钟。通过沿导轨向后滑动来移除仪器，而不接触侧面。

对于镐头，在接触蠕虫之前，让仪器冷却三到五秒钟，以避免烧焦它。挑选蠕虫后，将镐重新插入腔室五到七秒钟，以焚烧镐上的任何蠕虫。使用橡胶管将本生燃烧器连接到气体管路。

确保将管道紧紧固定，并将燃烧器放置在远离头顶物体的位置。通过转动气体管路上的旋钮来打开气体。使用撞针或打火机点燃燃烧器。

使用气体旋钮和进气口调节火焰，直到看到蓝色锥体。将镐头、刮刀或手术刀放在火焰中，直到它发出红色的光芒。对于镐头，在接触蠕虫之前，让仪器冷却三到五秒钟，以避免烧焦它。

采摘蠕虫后，将镐重新插入火焰中以焚烧镐上的任何蠕虫。在37摄氏度的振荡器上，在Luria肉汤中培养OP50大肠杆菌过夜。过夜培养后，以1:100的比例在无菌水中稀释培养物。

使用本生燃烧器或微型焚烧炉将灭菌的蠕虫镐浸入细菌溶液中，重新灭菌，并在100微升无菌水中旋转。对于阳性对照，将镐浸入细菌溶液中，在无菌水中旋转，对于阴性对照，在不浸入细菌溶液的情况下对镐进行灭菌，然后旋转到无菌水中。将100微升水放在10厘米的Luria汤琼脂培养皿上，使用无菌细胞扩散器铺开水，并在室温下盖上孵育24小时。

在孵育期后手动计数菌落。通过计算每个样品的菌落数来测量相对污染率。在阴性对照板中，发现零菌落。

当使用本生燃烧器对镐进行灭菌时，平均计数为4.7菌落，标准误差为0.3菌落。在微型焚烧炉条件下，平均计数为3.3个菌落，标准误差为1.2个菌落。然而，在阳性对照条件下获得的平均计数为298.3个菌落。

因此，微型焚烧炉达到的无菌效果与本生燃烧器同样有效。按照此过程，可以执行任何涉及采摘或分块秀丽隐杆线虫的方法。因此，它适用于各种各样的研究问题。