שיטה ללא להבה לעיקור C. elegans פיקים , מריתות ואזמלים

פרוטוקול זה מציג טכניקה אספטית לשימוש עם C.Elegans המבטלת את הצורך בלהבה פתוחה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא מפחיתה את סכנות הבטיחות על ידי ביטול להבה פתוחה וניתן להשתמש בה בחללי מעבדה ללא קווי גז ובמנדפי זרימה למינריים. הזזת מכשירים פנימה והחוצה מאזור העיקור מבלי לגעת בצדדים יכולה להיות קשה, אך הוספת מדריך וייצוב היד הופכת את התנועה לקלה יותר.

התחילו על ידי הצמדת מדריך עזר למחזיק לולאה למיקרו-משרפה על ידי חיתוךו אל הקנה החיצוני. חברו את המיקרו-משרפה לשקע חשמל סטנדרטי של 120 או 230 וולט לפי הצורך. סובבו את המיקרו-משרפה להגדרה הגבוהה ואפשרו לו להתחמם במשך 10 עד 20 דקות כדי להגיע לטמפרטורה אופטימלית בין 800 ל-825 מעלות צלזיוס.

הכנס את המכשיר לאזור העיקור הגלילי מבלי לגעת בצדדים על ידי החלקתו לאורך המדריך. החזק את המכשיר באזור העיקור למשך חמש עד שבע שניות. הסר את הכלי מבלי לגעת בצדדים על ידי החלקה לאחור לאורך המדריך.

עבור פיקים, אפשרו לכלי להתקרר למשך שלוש עד חמש שניות לפני שאתם נוגעים בתולעת כדי להימנע משריפתה. לאחר קטיף התולעים, הכניסו מחדש את התולעים לתא למשך חמש עד שבע שניות כדי לשרוף את כל התולעים על התולעים. חברו מבער בונזן לקו הגז באמצעות צינורות גומי.

הקפידו לאבטח היטב את הצינורות ולמקם את המבער הרחק מחפצים עיליים. הפעל את הגז על ידי הפעלת הידית על קו הגז. הציתו את המבער באמצעות מכת או מצית.

כוונו את הלהבה באמצעות ידית הגז וכניסת האוויר עד שחרור כחול נראה לעין. החזיקו את הפיק, המרית או האזמל בלהבה עד שהיא זוהרת באדום. עבור פיקים, אפשרו לכלי להתקרר למשך שלוש עד חמש שניות לפני שאתם נוגעים בתולעת כדי להימנע משריפתה.

לאחר קטיף התולעים, הכניסו מחדש את הפיק בלהבה כדי לשרוף את כל התולעים על הקטיף. תרבית חיידקי E.coli OP50 בציר לוריא למשך הלילה על שייקר 37 מעלות צלזיוס. לאחר תרבית לילה, דיללו את התרבית במים סטריליים ביחס של 1:100.

טובלים את התולעת מעוקרת באמצעות מבער בונזן או מיקרו-משרפה בתמיסת החיידקים, מעקרים מחדש ומסובבים אותה ב-100 מיקרוליטרים של מים סטריליים. לצורך שליטה חיובית, טבלו את הפיק בתמיסה חיידקית, הסתחררו במים סטריליים, ולשם הבקרה השלילית, עיקרו את הפיק מבלי לטבול בתמיסה חיידקית ואז הסתחררו במים הסטריליים. צלחת את 100 המיקרוליטרים של המים על צלחת אגר פטרי של ציר לוריא בקוטר 10 ס"מ, מפזרים את המים באמצעות מפזר תאים סטרילי, ודגירה בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות עם המכסה דולק.

ספרו את המושבות באופן ידני לאחר תקופת הדגירה. שיעור הזיהום היחסי נמדד על ידי ספירת מספר המושבות לכל מדגם. בלוחות בקרה שליליים נמצאו אפס מושבות.

ספירה ממוצעת של 4.7 מושבות עם שגיאת תקן של 0.3 מושבות הושגה כאשר מבער בונזן שימש לעיקור פיקים. ספירה ממוצעת של 3.3 מושבות עם שגיאת תקן של 1.2 מושבות נצפתה במצב מיקרו-משרפה. עם זאת, ספירה ממוצעת של 298.3 מושבות הושגה במצב שליטה חיובי.

לפיכך, המיקרו-משרפה השיגה תוצאות סטריליות יעילות באותה מידה למבער בונזן. לאחר הליך זה, ניתן לבצע כל השיטות הכרוכות בקטיף או קיבוץ של C.Elegans. לפיכך, הוא חל על מגוון רחב של שאלות מחקר.