للبدء ، ضع الماوس المحلوق والمخدر على وسادة الاحترار. قرصة الجلد مع ملاقط بالقرب من الحلمة الرابعة وقطع الجلد المرتفع بمقص حاد لعمل شق خط الوسط من حوالي سنتيمتر واحد. قم بعمل شقوق دائرية حول الغدة في كلا الاتجاهين القحفي والذيلي ، وقشر الجلد بعناية بعيدا عن البطن.
قم بإزالة أي دم خارجي على الفور باستخدام محلول ملحي فسيولوجي لتجنب فقدان الدقة البصرية لاحقا. لتقليل فقدان الدم ، أغلق أي أوعية دموية بارزة باستخدام كي محمول باليد. ثم ندف بلطف الطبقة السطحية بالملقط الدقيق لإزالة الأنسجة الضامة والدهنية السطحية.
الحفاظ على الغدة المكشوفة رطبة مع المياه المالحة الفسيولوجية. إذا لزم الأمر ، عالج الغدة بعوامل خارجية ، على سبيل المثال ، العوامل الدوائية أو أصباغ معينة من العضيات عن طريق الاستحمام في الغدد المكشوفة أثناء الجراحة. حماية جدار البطن مع فيلم شبه شفاف ، بالحرارة مرنة.
ضع الماوس بعناية مع الجانب البطني لأسفل على مرحلة المجهر المقلوب بحيث يمتد رفرف الجلد على زجاج الغطاء المركزي. حماية المناطق المكشوفة بطبقة رقيقة من الجل. الشريط الساق الخلفية والذيل إلى المسرح.
ثم ضع مباعدا مصنوعا حسب الطلب معدا من ثلاثة أعواد قطنية مسجلة بين رفرف الجلد وجدار الجسم لتهدئة الغدة من القطع الأثرية الحركية الناتجة عن التنفس ونبض القلب. قم بلصق غطاء بلاستيكي بإحكام في أي من طرفي فتحة المسرح لمنع رفرف الجلد من الانزلاق أثناء التصوير. أدخل قسطرة تحت الجلد تحت الجلد الظهري متصلة بأنبوب ومحقنة ومضخة.
باستخدام الفحص المجهري الفلوري التقليدي ، تأكد من أن رفرف الجلد مستقر مع تدفق الدم الكافي. قم بإجراء الفحص المجهري البؤري التقليدي للفأر الغشائي EGFP أو الفأر الغشائي EGFP المسمى ب BODIPY 665676 ومجهرين فوتونيين للفأر الغشائي EGFP المسمى بفأر غشاء أحادي دانسيل بنتان و tdTomato المسمى بمونودانسيلبنتان. في الفئران الخلوية EGFP ، تم تمييز سيتوبلازم الخلايا الظهارية الإفرازية بوضوح بواسطة EGFP.
في الوقت نفسه ، ظهرت قطرات الدهون الملطخة ب BODIPY 665676 كأجسام فلورية مستديرة ، خاصة نحو السطح القمي. أظهر تحليل الفاصل الزمني أن BODIPY 665676 قطرات دهنية ملطخة تتحرك من المناطق القاعدية إلى المناطق القمية بسرعات متغيرة وتندمج مع بعضها البعض أثناء النقل. في الفئران الغشائية EGFP ، سلط EGFP الضوء على أغشية البلازما للخلايا الظهارية الشعرية والإفرازية وكانت قطرات الدهون الملطخة BODIPY مرئية في جميع أنحاء السيتوبلازم.
سمح مجهران فوتونيان للغدد الثديية إما لغشاء EGFP أو فئران غشاء tdTomato بإجراء مسح أكثر شمولا لمورفولوجيا الغدة. يتم تصور ألياف الكولاجين على السطح في قناة مونودانسيلبنتان من خلال الجيل التوافقي الثاني. بعد ذلك في الحمة، تظهر الظهارة الإفرازية بأغشية البلازما القاعدية والجانبية والقمية وقطرات الدهون الملطخة بأحادي البنتان.
يصبح التجويف المركزي واضحا في الحويصلات الهوائية. كان فلوروفور الطماطم الأحمر tdTomato مفيدا بشكل خاص لتسمية البطانة الشعرية ، على عكس EGFP في الفئران الخلوية EGFP.
