洁净室环境和细胞疗法的微生物控制和监测策略

摘要

该协议总结了在洁净室环境中最大限度地减少微生物生物负荷的最佳实践，并包括环境监测、过程监控和产品无菌测试等策略。它与需要满足当前良好组织规范标准和当前良好生产规范标准的制造和测试设施相关。

摘要

一个经过充分验证的整体计划，包括强大的防护服、清洁、环境监测和人员监测措施，对于最大限度地减少细胞疗法制造套件和相应测试实验室中的微生物生物负荷至关重要，以确保设施在受控状态下运行。通过质量控制措施（如无菌测试）确保产品安全是最低限度操纵（第361条）和超过最低限度操纵（第351条）人体细胞、组织以及细胞和组织产品 （ HCT/Ps）的监管要求。在本视频中，我们提供了有关如何开发和整合在洁净室环境中操作的最佳无菌实践的逐步指南，包括穿衣、清洁、材料分期、环境监测、过程监控和使用直接接种的产品无菌测试，由美国药典 （USP<71>） 和美国国立卫生研究院 （NIH） 替代无菌测试方法提供。该协议旨在作为预计符合当前良好组织规范（cGTP）和当前良好生产规范（cGMP）的企业的参考指南。

引言

通过环境监测 （EM）、过程监测和产品无菌测试实施强大的微生物监测计划是细胞治疗实验室当前良好组织规范 （cGTP） 和当前良好生产规范 （cGMP） 的监管要求¹。此外，美国食品和药物管理局 （FDA） 预计，对产品进行质量控制 （QC） 测试的实验室还应采用与无菌灌装操作相当的设施和控制措施²。

该协议有四个主要部分：1）无菌实践，包括人员穿长袍，清洁和分期材料;2）EM，包括活性空气和表面培养物以及非活性颗粒空气监测;3）过程监控，包括沉降板和戴手套的指尖取样;4）通过药典美国药典（USP）<71>方法³或NIH替代无菌测试方法⁴进行产品无菌测试。当结合使用时，这些措施可以成为确保设施保持控制状态的有效方法。

这里描述的技术并不新颖;然而，监管机构和专业组织的现行标准缺乏细节，导致缺乏微生物监测或实施非标准化实践，特别是在现场制造和产品无菌测试迅速出现的学术中心1，^5，6.该协议可用作创建微生物监测和控制程序的指南，该程序....

研究方案

1. 无菌实践

1. 洁净室空间的人员防护服
   注意：此过程基于在未分类空间中初始穿上防护服，然后进入国际标准化组织 （ISO） 8 区域，然后进入 ISO7 区域。该程序与试图将现有空间转换为洁净室功能的实验室相关。理想情况下，所有初始防护服都将在 ISO8 分类空间（而不是非分类空间）中进行。
   1. 固定松散的头发。洗手，换上磨砂膏（最好穿长袖磨砂上衣和全长磨砂裤）。收集并换上带鞋套的洁净室鞋。
   2. 首先使用含酒精的洗手液消毒双手，然后在以下每个步骤之间再次消毒：如果适用，请戴上非无菌手套，然后戴上胡须套（适用于任何数量的可见面部毛发）。穿上非无菌的蓬松剂，如果未使用长袖磨砂上衣，则用非无菌袖子覆盖前臂。
   3. 取下鞋套，取下鞋套后，每只脚踩在 ISO8 前厅门前的粘性垫子上。在进入之前，确保整个脚都与粘性垫接触。丢弃鞋套，并用 70% 无菌异丙醇 （sIPA） 对手套和门把手进行净化。进入ISO8前厅。
   4. 收集无菌头罩、无菌口罩、无菌工作服、无菌靴套和安全眼镜。用 70% sIPA 对手套进行净化。戴上安全眼镜，按照步骤1.5将材料放在干净的表面上。
   5. 在专用的洁净室鞋上穿上一双新的非无菌鞋套，然后踏上二级前厅前的粘性垫子。确保每只脚的整个都与粘性垫接触。用 70% sIPA 对手套进行净化。收拾好分阶段的礼服用品，进入二级ISO7前厅，留在分界线的肮脏一侧。
   6. 戴上无菌兜....

讨论

该协议中有几个关键领域，包括保持无菌技术和洁净室和平衡计分卡内的单向气流。 最佳做法包括缓慢而有意识地移动，以尽量减少湍流。无菌操作应从产品的侧面进行，而不是从上方进行。建议进行封闭系统处理，并使用经过终端灭菌的原材料。应避免在关键区域说话并靠在墙壁或设备上。同样，在无菌处理完成之前，应避免不必要的触摸非无菌物品和捡起掉落的物品。平衡计分卡中的材料应.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
20-25°C Incubator			Lab preference
30-35°C Incubator			Lab preference
Alcohol-based hand sanitizer			Lab preference
BacT/ALERT Dual-T instrument	BioMerieux Industry
Beard cover			Lab preference
Biosafety cabinet (BSC)			Lab preference
Cleanroom shoes			Lab preference
Fluidthioglycollate medium (FTM)	Hardy Diagnostics	U84	USP
Handheld cleaning mop	Contec	2665LF
Hypodermic needle			Lab preference
iFA+ BacT/ALERT bottle	Biomerieux	412990
iFN+ BacT/ALERT bottle	Biomerieux	412991
Isokinetic head			Lab preference
Laser particle counter	TSI Incorporated	9500-01
LpH III	Steris	1S16CX
Mirror			Lab preference
Non-sterile bouffant			Lab preference
Non-sterile gloves			Lab preference
Non-sterile shoe covers			Lab preference
Non-sterile sleeve covers			Lab preference
Parafilm			Lab preference
Peridox RTU	Contec	CR85335IR
Plastic bag			Lab preference
Sabouraud Dextrose Agar with Lecithinase and Tween (SABLT)	Hardy Diagnostics	P595	USP, irradiated
Sabouraurd Dextrose Agar (SAB)	Hardy Diagnostics	W565	USP, irradiated
Safety glasses			Lab preference
Scrubs (top and bottom)			Lab preference
Spor-Klenx RTU	Steris	6525M2
Sterile 70% isopropyl alcohol (IPA)	Decon CiDehol	8316
Sterile alcohol wipe			Lab preference
Sterile boot covers	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile coveralls	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile face mask			Lab preference
Sterile gloves			Lab preference
Sterile hood	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile low-lint wipes	Texwipe	TX3210
Sterile mop cleaning pads	Contec	MEQT0002SZ
Sterile sleeve covers	Kimberly Clark	36077
Sterile spreading rod	Fisher Scientific	14665231
Sterile syringe			Lab preference
Tacky mats			Lab preference
Tryptic Soy Agar (TSA)	Hardy Diagnostics	W570R	USP, irradiated
Tryptic Soy Agar with Lecithinase and Tween (TSALT)	Hardy Diagnostics	P520R	USP, irradiated
Tryptic Soy Broth (TSB)	Hardy Diagnostics	U46	USP
Tubing			Lab preference
Vesphene III	Steris	1S15CX
Viable air sampler	Hardy Diagnostics	BAS22K
Vortex			Lab preference