클린룸 환경 및 세포 치료를 위한 미생물 제어 및 모니터링 전략

요약

이 프로토콜은 클린룸 환경에서 미생물 바이오버든을 최소화하기 위한 모범 사례를 요약하고 환경 모니터링, 공정 모니터링 및 제품 멸균 테스트와 같은 전략을 포함합니다. 이는 현재 우수 조직 관행 표준 및 현재 우수 제조 관행 표준을 충족하는 데 필요한 제조 및 테스트 시설과 관련이 있습니다.

초록

강력한 가운, 세척, 환경 모니터링 및 인력 모니터링 조치를 통합하는 잘 검증되고 전체적인 프로그램은 세포 치료제 제조 제품군 및 해당 테스트 실험실에서 미생물 바이오버든을 최소화하여 시설이 통제 상태로 운영되고 있는지 확인하는 데 중요합니다. 멸균 테스트와 같은 품질 관리 조치를 통해 제품 안전을 보장하는 것은 최소 조작(섹션 361) 및 최소 조작 이상(섹션 351) 인간 세포, 조직, 세포 및 조직 기반 제품(HCT/P) 모두에 대한 규제 요구 사항입니다. 이 비디오에서는 미국 약전(USP<71>) 및 미국 국립보건원(NIH) 대체 멸균 테스트 방법에서 제공하는 가운, 세척, 재료 스테이징, 환경 모니터링, 공정 모니터링 및 직접 접종을 사용한 제품 멸균 테스트를 포함하여 클린룸 환경에서 작동하기 위한 최상의 무균 관행을 개발하고 통합하는 방법에 대한 단계별 가이드를 제공합니다. 이 프로토콜은 현행 우수 조직 관리 기준(cGTP) 및 현행 우수 제조 관리 기준(cGMP)을 충족할 것으로 예상되는 시설에 대한 참조 가이드입니다.

서문

환경 모니터링(EM), 공정 모니터링 및 제품 멸균 테스트를 통해 강력한 미생물 모니터링 프로그램을 구현하는 것은 세포 치료 실험실에서 현행 우수 조직 관리 기준(cGTP) 및 현행 우수 제조 관리 기준(cGMP)에 대한 규제 요건입니다¹. 또한 미국 식품의약국(FDA)은 제품의 품질 관리(QC) 테스트를 수행하는 실험실에서도 무균 충전 작업에 사용되는 것과 유사한 시설 및 관리 기능을 사용해야 한다고 예상합니다².

이 프로토콜에는 네 가지 주요 섹션이 있습니다 : 1) 직원 가운, 청소 및 재료 스테이징을 포함한 무균 관행; 2) 생존 가능한 공기 및 표면 배양 및 생존 불가능한 입자 공기 모니터링을 포함한 EM; 3) 침전 플레이트 및 장갑을 낀 손가락 끝 샘플링을 포함한 공정 모니터링; 4) 미국 약전(USP) <71> 방법³ 또는 NIH 대체 무균 테스트 방법⁴를 통한 제품 무균 테스트. 이러한 조치를 함께 사용하면 시설이 통제 상태를 유지하도록 하는 효과적인 방법이 될 수 있습니다.

여기에 설명된 ....

프로토콜

1. 무균 관행

1. 클린룸 공간을 위한 직원 가운
   참고: 이 절차는 분류되지 않은 공간에서 가운을 처음 착용한 후 국제 표준화 기구(ISO) 8 영역에 진입한 다음 ISO7 영역에 진입하는 것을 기반으로 합니다. 이 절차는 기존 공간을 클린룸 기능으로 전환하려는 실험실과 관련이 있습니다. 이상적으로, 모든 초기 가운은 ISO8 분류 공간 (분류되지 않은 공간이 아님)에서 발생합니다.
   1. 느슨한 머리카락을 고정하십시오. 손을 씻고 스크럽으로 갈아입습니다(긴팔 스크럽 상의와 전신 스크럽 바지가 바람직함). 신발 커버를 씌운 클린룸 신발로 갈아입습니다.
   2. 처음에는 알코올 성분의 손 소독제를 사용하여 손을 소독한 다음 다음 각 단계 사이에 다시 소독합니다: 비멸균 장갑을 착용한 다음 해당되는 경우 수염 덮개(눈에 보이는 수염의 양에 대하여)를 착용합니다. 비멸균 부팡을 착용하고 긴팔 스크럽 탑을 사용하지 않은 경우 비멸균 슬리브로 팔뚝을 덮습니다.
   3. 신발 커버를 제거한 후 ISO8 대기실 문 앞의 끈적끈적한 매트를 각 발로 밟아 신발 커버를 제거합니다. 입장하기 전에 발 전체가 끈적끈적한 매트에 닿도록 하십시오. 신발 커버를 버리고 장갑과 도어 핸들을 70% 멸균 이소프로필 알코올(sIPA)로 오염을 제거....

토론

이 프로토콜에는 무균 기술의 유지 관리와 클린룸 및 BSC 내의 단방향 공기 흐름을 포함하여 몇 가지 중요한 영역이 있습니다. 모범 사례에는 난기류를 최소화하기 위해 천천히 의도적으로 이동하는 것이 포함됩니다. 무균 조작은 위에서가 아니라 제품 측면에서 수행해야합니다. 폐쇄 시스템 처리 및 최종 멸균 된 원료의 사용이 권장됩니다. 중요한 영역에서 말하고 벽이나 장비에 기대는 것은 피?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
20-25°C Incubator			Lab preference
30-35°C Incubator			Lab preference
Alcohol-based hand sanitizer			Lab preference
BacT/ALERT Dual-T instrument	BioMerieux Industry
Beard cover			Lab preference
Biosafety cabinet (BSC)			Lab preference
Cleanroom shoes			Lab preference
Fluidthioglycollate medium (FTM)	Hardy Diagnostics	U84	USP
Handheld cleaning mop	Contec	2665LF
Hypodermic needle			Lab preference
iFA+ BacT/ALERT bottle	Biomerieux	412990
iFN+ BacT/ALERT bottle	Biomerieux	412991
Isokinetic head			Lab preference
Laser particle counter	TSI Incorporated	9500-01
LpH III	Steris	1S16CX
Mirror			Lab preference
Non-sterile bouffant			Lab preference
Non-sterile gloves			Lab preference
Non-sterile shoe covers			Lab preference
Non-sterile sleeve covers			Lab preference
Parafilm			Lab preference
Peridox RTU	Contec	CR85335IR
Plastic bag			Lab preference
Sabouraud Dextrose Agar with Lecithinase and Tween (SABLT)	Hardy Diagnostics	P595	USP, irradiated
Sabouraurd Dextrose Agar (SAB)	Hardy Diagnostics	W565	USP, irradiated
Safety glasses			Lab preference
Scrubs (top and bottom)			Lab preference
Spor-Klenx RTU	Steris	6525M2
Sterile 70% isopropyl alcohol (IPA)	Decon CiDehol	8316
Sterile alcohol wipe			Lab preference
Sterile boot covers	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile coveralls	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile face mask			Lab preference
Sterile gloves			Lab preference
Sterile hood	Kimberly Clark		Cat# varies based on size
Sterile low-lint wipes	Texwipe	TX3210
Sterile mop cleaning pads	Contec	MEQT0002SZ
Sterile sleeve covers	Kimberly Clark	36077
Sterile spreading rod	Fisher Scientific	14665231
Sterile syringe			Lab preference
Tacky mats			Lab preference
Tryptic Soy Agar (TSA)	Hardy Diagnostics	W570R	USP, irradiated
Tryptic Soy Agar with Lecithinase and Tween (TSALT)	Hardy Diagnostics	P520R	USP, irradiated
Tryptic Soy Broth (TSB)	Hardy Diagnostics	U46	USP
Tubing			Lab preference
Vesphene III	Steris	1S15CX
Viable air sampler	Hardy Diagnostics	BAS22K
Vortex			Lab preference