Hyperandrogenic 小鼠模型研究多囊卵巢综合征

这种方法可以帮助回答生殖领域的关键问题。和内分泌学。并适用于多囊卵巢综合征或PCOS和超生激素的研究。

这种技术的优点是，它促进一致，均匀，长期释放激素在昂贵的有效方式。J朱斯治疗这个程序将是平雪，一个技术员，从我的实验室。对于二氢酮或 DHT 颗粒制备，请使用剃刀刀片切割 15 毫米的硅胶管。

并使用装有钝化 20 量针的三毫升注射器将 2 到 5 毫米医用粘合剂硅胶注射到管子的一端。让管道干燥过夜。并检查密封端的气泡。

穿着适当的个人防护装备，将 DHT 粉末倒入流动中的塑料快艇中。将胶粘管的开端印象成粉末。使用大拉直的回形针，将粉末向下插入管中，直到 DHT 达到适当的实验深度。

然后用硅胶密封管的开路侧过夜。第二天早上，切割每个密封的一侧，以获得两毫米长度的硅胶两侧的DHT和没有DHT控制颗粒。然后在室温下将用铝箔包裹的50毫升圆锥管中储存颗粒长达三个月。

对于 PCOS 小鼠模型生成平衡高达 20 DHT 或控制颗粒在单独的 50 毫升锥形管中，包含 30 毫升 0.9% 盐水，在 37 摄氏度下 24 小时。第二天，确认对麻醉两个月大的雌性小鼠的"手趾捏"反应不足，并使用无菌纱布对手术区进行连续的波维酮碘和70%的乙醇磨砂。接下来，通过颈部附近的皮肤做一个五毫米的切口。

并使用十轨小车在旋转方向上建造一条 15 毫米的隧道。使用小车将颗粒粘入隧道，并使用手术粘合剂密封切口。手动用钳子近似伤口边缘，并使用柔和的刷冲，将三层液体粘合剂涂抹到对对伤口边缘两侧一厘米外。

然后将鼠标单独放在热垫上的笼子中，进行监控，直到完全恢复。每四周更换一次颗粒，以保持恒定的地激素暴露水平。颗粒插入三天后，使用 p10 移液器将十微升无菌盐水喷入阴道腔，并使用移液器尖端立即恢复盐水。

将阴道细胞盐水样本铺到贴有标签的幻灯片上。让盐水在室温下干燥。将干滑在 100% 乙醇的容器中固定至少五分钟。

然后在缓冲器 B 中染色幻灯片一分钟，从 dif 快速染色套件中染色 C。在缓冲液结束时，C 孵育用自来水清洗幻灯片三秒钟，并在室温下干燥。在光学显微镜的十倍目标下确定最圆环视图的幻灯片。

计算每个阶段的天数，并除以总天数，以计算每个阶段的百分比时间。为了测试葡萄糖耐受性，20天DHT插入，禁食小鼠过夜。第二天早上称体重老鼠，并使用血糖仪和测试条测量尾静脉血的罗勒葡萄糖水平。

给老鼠注射每公斤2克的葡萄糖，重量为20%。然后在葡萄糖后15、30、60、90、120分钟测量尾静脉血样的葡萄糖水平。要从 DHT 插入的母子获得雌性后代，在颗粒插入后，将雌性小鼠移至笼子中，在经过证明的肥沃雄性小鼠中进行测试。

每周记录一次大人的体重，以确定老鼠是否怀孕。产后第七天，将长矛尖浸入纹身膏中，并在脚趾上用纹身标记每只小狗。每七天称体重一次，直到70天。

在产后日期12至16之间，耳朵打小鼠，根据系统对它们进行编号，如图所示。要区分性别，检查每个标记的小鼠的腹侧。雌性将有可见的奶嘴。

收集血液样本进行各种下游分析，使用长矛收集九至十上午间血液的近似实验量，通过亚曼多利静脉出血。并离心样品，以允许血清收集。然后将血清样本储存在零下80摄氏度的1.5毫升微离心管中，直到分析。

为了评估DHT雌性后代的青春期，每天在产后第21天下奶后，通过目视检查检查阴道开口。并使用口径测量无生殖器距离。虽然质谱法和Elisa分析血清DHT的绝对值不同，但DHT与无DHT插入的相对民间变化在测定和实验中都是相似的。

DHT水平在DHT和没有DHT小鼠的孕前到怀孕显著增加。然而，DHT小鼠的DHT水平比在孕前和妊娠时间点没有DHT小鼠高两倍。成年DHT女儿在生殖功能上表现出差异。

例如，与成人相比，被破坏的循环性没有DHT女儿经历明显更长的时间在甲体死亡和更少的时间在亲酯和酯。在尝试此程序时，重要的是要记住在颗粒用于均匀释放激素之前孵育这些颗粒 24 小时。按照这个程序，也可以检查DHT接触的生殖和代谢后果。

在它的发展之后，这一技术为内序和母体胎儿相互作用领域的研究人员研究PCOS和低水平高激素症对雌性小鼠的影响铺平了道路。不要忘记，使用 DHT 可能非常危险，执行此过程时应始终采取预防措施，如戴手套、戴口罩和护目镜，以及在生物安全罩中工作。