在这里，我们提出了使用乙醇作为溶剂来提取和描述台湾绿色蜂胶抑制抗菌活性的规程。该协议是确定台湾绿色蜂胶质量的可靠和可重复的方法。演示程序将是陈春丁和易贤，我的实验室博士生。
首先，称出100克台湾绿色蜂胶。使用香料研磨机，研磨蜂胶，确保碎片研磨成细粉，没有任何大颗粒。设置五个烧瓶，并加入100毫升的各种浓度乙醇在水中。
将 10 克地蜂胶混合到每个烧瓶中的乙醇溶液中，在 25 摄氏度下孵育，在 250 RPM 下摇晃 48 小时。之后，使用25微米孔径的滤纸过滤乙醇提取物。使用体积烧瓶，用95%乙醇将滤瓶重新构成其原始体积为100毫升。
将重组后的提取物存放在零下 20 摄氏度，直到准备好使用。当准备为 HPLC 准备提取物时，使用真空蒸发将每个提取物的 10 毫升在 40 摄氏度下浓缩 10 分钟 10 分钟。在45摄氏度下烘烤干物质24小时。
然后，用10毫升95%乙醇重新制备每个干物质样品。使用 0.22 微米孔径的注射器过滤器，重新过滤每个提取物，并收集滤物，使用 HPLC 进行直接分析。要开始建立标准曲线，请以 88.8 比 11.2 的比例准备一升移动相甲醇与水溶液。
使用移动相溶液作为溶剂，准备如文本协议中概述的丙烯标准浓度的连续稀释。将每个标准浓度的 20 微升按顺序从最低浓度注入反向相列到最高浓度。然后，将 HPLC 柱设置为 30 摄氏度，将紫外线检测器的豁免长度设置为 280 纳米，将流速设置为每分钟 1 毫升，将记录器时间设置为 20 分钟。
至少分析三次标准。在此之后，使用计算表软件将测量响应与浓度堵塞，从而形成具有已确定方程和 R 平方值的标准曲线。要开始分析提取，请将每个萃取的 20 微升注入反向相位列。
将 HPLC 柱设置为 30 摄氏度的温度，流量为每分钟 1 毫升。将紫外线检测器的豁免长度设置为 280 纳米，将记录器时间设置为 20 分钟。分析数据提取至少三次。
然后，使用标准曲线确定每个乙醇提取物中丙烯的浓度。在制备测试生物体和乙醇提取物后，将10微升稀释乙醇提取物加入96井板的井中，每毫升0.156至640微克。使用汤将每井的体积调整为 100 微升，确保所有稀释中保持 5%DMSO。
接下来，将100微升的细菌培养剂接种到96井板的每个井中。在37摄氏度的高温下进行48小时。使用 590 纳米的微孔板读卡器根据浊度分析细菌生长，并确定最低抑制浓度。
在此之后，从每一个井中接种10微升的液体培养剂，这些井表现出生长到阿加板上。在37摄氏度下孵育24小时。确定未显示可见细菌生长的最低浓度，以确定细菌活性。
完全消除细胞生长的浓度被认为是最小的细菌浓度。在这项研究中，用乙醇提取台湾绿色蜂胶。当使用高浓度乙醇时，干物质的产量似乎是最高的，而使用水时，干物质的产量是最低的。
这些结果表明，有机溶剂在萃取过程中表现最佳，产量与乙醇浓度呈正相关。同样，丙烯的浓度似乎在提取过程中与乙醇浓度呈正相关，在95%和99.5%乙醇提取物中获得最高产量的丙烯。然后对乙醇提取物对大肠杆菌和大肠杆菌的抗菌影响进行调查。
S aureus 的平均最低抑制浓度似乎在每毫升 10 到 20 微克之间，细菌的平均浓度似乎是每毫升 20 微克。然而，水提取物对古雷乌斯没有任何抗菌作用。使用水或乙醇提取物时，对大肠杆菌没有抗菌影响。
关键的实验过程之一是在研磨过程中回避台湾绿色蜂胶的均匀性。
