小鼠肺损伤的诱导,通过博霉素内切注射

该协议可以通过血管注射Bleomycin，在肺部诱导重要的炎症和纤维反应，并验证新的抗炎和抗纤维化全身疗法的尾静脉输液。该技术的主要优点是，将Bleomycin直接注射到小鼠气管中，可确保快速瞄准肺部，而上气道没有任何溢出物，从而安全、可靠且可重复地诱导肺炎和纤维化。演示这个程序的将是来自我们合作实验室的兽医菲奥伦扎·奥兰多博士。

首先，将麻醉小鼠放在手术平台上。巧妙地用手术胶带固定它的腿，以固定到位。要过度伸展小鼠的脖子，请在其颈椎区域下放置一个支撑，如牙棉卷。

然后用剃刀轻轻剃喉咙。使用一对解剖钳来捏皮。使用一对环处理弯曲钝剪刀，使短切口约半厘米长，以对应小鼠胸肌。

使用棉布棒止血。然后通过钝解剖将气管外化，然后轻轻地从脂肪和其他组织中清洁。旋转手术平台，使鼠标头部朝向操作者，使操作员在注射过程中正确角度对注射器进行角。

要可视化气管，请将鼠标置于手术显微镜下。调整照明并设置 1 和 1.2 之间的放大倍率，然后调整焦点和锐度。气管可以很容易地区分为白色半透明管与清晰可见的气管环。

轻轻移液器，混合 Bleomycin 溶液，用 25 量针将 100 微升吸气吸入 0.5 毫升注射器，避免气泡形成。一旦气管被清晰地可视化，小心地用针尖以30度角刺穿气管。慢慢地将100微升的Bleomycin直接注射到气管的流明中。

等待几秒钟后，整个体积向下针移动，将其从气管中取出。当针头正确插入气管时，观察几秒发生的呼吸暂停，表明整个液体量已被吸入。安全丢弃注射器和针头。

用5-0可吸收的缝合线关闭皮下筋膜和皮肤伤口，让动物恢复。再次麻醉小鼠后，一旦失去知觉得到确认，将鼠标放在无菌罩下。在整个实验中，使用连续流量为1.5%异氟的面膜保持温和的麻醉。

为了促进血管扩张和更容易注射，将尾巴浸泡在温水中两分钟。通过轻轻移液混合人体脐带中质质的悬浮细胞，以避免细胞团形成。用26规格的针头将200微升吸入一毫升注射器，避免气泡形成。

抓住尖端的尾巴，轻轻拉直它。然后找到尾巴的横向静脉。用手术刀轻轻刮取尾巴，然后用70%乙醇擦拭。

从尾部的远角开始，以 15 度角将针头插入静脉。慢慢地注入200微升的人类脐带中质质质细胞。要监测成功的静脉输液，观察进入静脉的液体无阻力和缺乏外注射。

等待几秒钟后，直到整个体积沿着针头向下移动，将其从静脉中去除。然后用无菌纱布短暂地对入口伤口施加压力，以防止出血，让动物恢复。输液后安全丢弃注射器和针头。

Bleomycin注射后，与盐水注射后的正常肺结构相比，由血氧林和Eosin和Picrosirius红染色评估肺组织病理变化，确认广泛炎症渗透和纤维化。由血红素引起的肺部炎症和纤维化在很大程度上被人类脐带间质细胞输液减轻，但不受盐水影响。胶原蛋白沉积通过羟基丙酸测定进行测量。

在布洛霉素注射后，羟基丙酸水平从第8天逐渐增加至第14天和21日。而人类脐带中质细胞的加入显著降低了血红素的影响。全肺mRNA中Col1A1型一型胶原蛋白基因的表达水平在第8天、第14天和21日也出现逐渐增加，由于人类脐带中质细胞治疗部分降低。

含有特异性抗体的免疫功能表明，注入人类脐带的细胞细胞迅速有效地到达小鼠肺部，尽管只检测到少数细胞。这些数据表明，尽管具有长期的保护作用，但细胞从现场损伤中迅速脱位。使用操作显微镜可确保在安装前准确监控针头正确放入小鼠气管中，从而最大限度地降低损坏针头的风险，从而确保成功的信心。