小鼠新鲜骨髓外植体的丙酸盐形成动力学

该程序的总体目标是实时跟踪小鼠巨核细胞形成的丙酸盐，这些巨核细胞在其天然环境中成熟。这种方法具有简单，可重复和快速的优点。人们可以分析许多巨核细胞，并在短短六个小时内可视化丙酸盐的形成，而不是像体外小鼠巨核细胞那样等待培养的第一天。

这种方法的一个有趣的应用是研究药物治疗或基因突变的效果的可能性，特别是在丙酸盐延伸的步骤中。这里没有对分化过程的干扰，如体外培养的情况。此视频有助于确保冲洗和切割骨髓的这些关键步骤。

它还解释了如何对形态学和巨核细胞进行分类，这对于表征易栓性疾病中的缺陷非常有用。首先，将Tyrode的缓冲液加热到37摄氏度，然后打开显微镜的加热室，将温度调到37摄氏度。准备所有必要的工具，例如计时器，孵育室，5毫升21号注射器，镊子，剃须刀片，巴斯德移液器，载玻片和15毫升离心管。

通过将21号针头引入膝盖侧的股骨开口，用两毫升Tyrode缓冲液冲洗骨髓，然后缓慢按压柱塞以取回完整的骨髓圆柱体。使用三分钟升塑料移液器小心轻轻地将完整的骨髓转移到载玻片上。切掉在冲洗时可能被压缩的骨髓末端。

然后使用锋利的剃须刀片切割0.5毫米厚的横向薄切片，以避免损坏巨核细胞。使用塑料移液器，将10个切片收集到一个含有Tyrode缓冲液的一毫升管中。小心地将切片转移到直径为13毫米的孵育室。

吸出缓冲液并将体积调节至30微升Tyrode缓冲液，并补充5%小鼠血清。将截面放置在一定距离的位置。用22×55毫米的盖滑盖密封自粘室，倾斜盖滑以避免形成气泡。

将腔室置于37摄氏度的加热室中。启动天文台表，在37摄氏度下运行实验六个小时，制作视频记录巨核细胞的转化。30分钟后，骨髓细胞逐渐迁移到外植体的外围，形成单层。

孵育一小时后，可以通过它们的大尺寸和多叶核来鉴定巨核细胞。巨核细胞的数量在孵育三小时后增加，有些具有较长的扩展。绘制地图以定位孵育室中的每个部分。

一小时后，识别可见的巨核细胞，它们是每个部分外围的巨型多叶细胞，并在图纸上绘制它们的位置。在三小时和六小时后重复此过程。手动计数巨核细胞，并在孵育室密封后三小时和六小时根据其形态进行分类。

它们分为小，大，有厚的意图，和丙酸盐延伸。在映射的帮助下，它们可以随着时间的推移而跟踪其演变。结果表示为在每个观察时间每个类的百分比。

传统上，在野生型小鼠骨髓的外周可见的巨核细胞中有一半在六小时时延长丙酸盐。在圆形巨核细胞的命运之后，随着时间的推移捕获顺序图像，以观察它们如何形成丙烯酸盐。尝试此过程时要记住的一件重要事情是在实验期间将外植体保持在37摄氏度。

不同的温度可以改变结果。有趣的是，外植体方案可以在内向显微镜实验后使用。最后，骨髓外植体中的巨核细胞将是天然荧光的，并且它们的行为可以很容易地被研究。

这使得可以对相同的动物进行不同的处理，从而减少小鼠的数量。总之，外植体方法快速，简单，并且提供了许多关于天然巨核细胞对外部丙酸盐的能力的信息。由此产生的定性和定量发现是我们理解易栓性疾病的关键。

在生理或病理背景下。