이 절차의 전반적인 목적은 그들의 네이티브 환경에서 성숙한 마우스 거대 카르요세포에서 proplatelet의 형성을 실시간으로 따르는 것입니다. 이 방법은 간단하고 재현 가능하며 빠르다는 장점이 있습니다. 하나는 많은 메가 카요 사이클을 분석하고 시험관내 마우스 거대 카르요세포에 관해서는 문화의 첫날을 기다리는 대신 6 시간 만에 프로 플라플라인의 형성을 시각화 할 수 있습니다.
이 방법의 흥미로운 응용 프로그램은 특히 프로 플라틀렛 확장의 단계에서 약제 학적 치료 또는 유전 돌연변이의 효과를 연구 할 수있는 가능성입니다. 여기서는 체외 문화의 경우와 같이 분화 과정에 간섭이 없습니다. 이 비디오는 골수를 플러싱하고 절단하는 이러한 주요 단계를 보장하는 데 도움이됩니다.
또한 혈전성 질환의 결함 특성화에 정말 유용한 형태와 거대 카르요사이클을 분류하는 방법에 대해서도 설명했습니다. 우선, Tyrode의 버퍼를 섭씨 37도에서 따뜻하게 하고 현미경의 난방 실을 켜서 온도를 섭씨 37도까지 끌어올립니다. 타이머, 인큐베이션 챔버, 5 밀리리터 21 게이지 주사기, 집게, 면도날, 파스퇴르 파이펫, 유리 슬라이드 및 15 밀리리터 원심분리기 튜브와 같은 필요한 모든 도구를 준비합니다.
21 게이지 바늘을 무릎 쪽의 대퇴골 개구부에 도입하여 티로드의 완충제 두 밀리리터로 골수를 씻어내고 플런저를 천천히 눌러 그대로 골수 실린더를 회수합니다. 3분 짜리 플라스틱 파이펫을 사용하여 그대로 있는 골수를 유리 슬라이드에 조심스럽게 부드럽게 전달합니다. 플러시 에 압축 되었을 수 있습니다 골수의 끝을 잘라.
그런 다음 날카로운 면도날을 사용하여 0.5mm 두께의 얇은 대지 부분을 잘라 메가 카요사이클을 손상시키지 않도록합니다. 플라스틱 파이펫을 사용하여 티로드의 버퍼가 들어 있는 1밀리리터 튜브에 10개의 섹션을 수집합니다. 조심스럽게 13 밀리미터의 직경을 가진 잠복챔버로 섹션을 전송합니다.
버퍼를 흡인하고 5%의 마우스 세럼으로 보완된 Tyrode의 버퍼30 마이크로리터로 볼륨을 조정합니다. 단면을 멀리 배치합니다. 22~ 55mm 커버 슬립으로 자체 접착제 챔버를 밀봉하여 공기 포기의 형성을 피하기 위해 커버 슬립을 절제합니다.
챔버를 섭씨 37도에 가열실에 놓습니다. 크로노미터를 시작하고 섭씨 37도에서 6시간 동안 실험을 실행하여 메가카르요세포의 변형을 기록하기 위해 비디오를 만듭니다. 30분 후, 골수 세포는 모노층을 형성하는 해종의 주변으로 점차 이동한다.
1시간 동안 배양한 후, 메가카요세포는 큰 크기와 폴리로부트된 핵으로 식별할 수 있다. 메가카요세포의 수는 3시간 동안 인큐베이션을 한 후 증가하고 일부는 긴 연장을 가지고 있습니다. 맵을 그려 인큐베이션 챔버의 각 섹션을 지역화합니다.
1시간 후 각 섹션 의 주변에 거대한 폴리로직화된 세포인 눈에 보이는 메가카요세포를 식별하고 도면에 위치를 그립니다. 3시간 6시간 후에 이 절차를 반복합니다. 메가카요세포는 인큐베이션 챔버를 밀봉한 후 3시간 6시간 후에 그들의 형태에 따라 수동으로 계산되고 분류된다.
그들은 작은 으로 분류 됩니다., 두꺼운 의도, 그리고 프로 플래틀렛 확장. 매핑의 도움으로 시간이 지남에 따라 진화를 따를 수 있습니다. 결과는 각 관측 시간에 각 클래스의 백분율로 표시됩니다.
고전적으로, 주변에서 보이는 거대 카르요세포의 절반은 야생형 마우스 골수의 경우 6시간 동안 프로플라츠를 확장한다. 둥근 메가카요세포의 운명은 시간이 지남에 따라 순차적인 이미지를 캡처하여 프로플라츠판을 형성하는 방법을 이미지했습니다. 이 절차를 시도 할 때 기억해야 할 중요한 것은 실험 기간 동안 섭씨 37도에서 이절을 유지하는 것입니다.
온도가 다른 온도로 결과를 변경할 수 있습니다. 흥미롭게도, 외래 프로토콜은 내향성 현미경 실험 후에 사용될 수 있습니다. 결국 골수 의 거대 카르요세포는 자연적으로 형광이 될 것이며, 그들의 행동은 쉽게 조사 될 수 있습니다.
이것은 가능하게 동일 동물에 다른 처리를 결합하고 마우스의 수를 감소시다. 결론적으로, 이 절제 방법은 빠르고 간단하며 외부 프로플라틀에 천연 거대 핵세포의 용량에 대한 많은 정보를 제공한다. 결과 질적 및 정량적 발견은 혈전성 질병의 우리의 이해에 열쇠입니다.
생리학적 또는 병리학적 맥락에서.
