DNA-Extraktion und Vergleich zwischen alten und frischen nekrophilen Fliegenproben

Zusammenfassung

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll für die Extraktion frischer und alter nekrophiler Fliegen-DNA unter Verwendung eines modifizierten gängigen DNA-Extraktionskits.

Zusammenfassung

Insgesamt wurden fünf Proben von Chrysomya megacephala-Proben - drei frische Proben, eine Probe, die 2 Jahre lang in Alkohol gelagert wurde, und eine Probe, die 2 Jahre lang in trockener, versiegelter Lagerung nur lichtgeschützt gelagert wurde - ausgewählt, um zu untersuchen, ob ein Blut-DNA-Extraktionskit DNA von nekrophilen Fliegen extrahieren kann und ob Alkohol die Konservierung der DNA von nekrophilen Fliegen verlängern kann. Zunächst wurde das Blut-DNA-Extraktionskit verwendet, um DNA aus ihrem Thoraxgewebe zu extrahieren. Anschließend wurden die Reinheit und Konzentration der DNA mit einem Mikroplatten-Reader und einem Fluorometer untersucht. Schließlich wurden die PCR-Amplifikation und die Elektrophorese der extrahierten DNA mit nekrophilen fliegenspezifischen Primern durchgeführt, die sich in der mitochondrialen CO I-Gensequenz befanden. Die Ergebnisse zeigten, dass die DNA-Reinheit aller Proben größer als 2,0 war. Es wurde festgestellt, dass die DNA-Konzentration in der folgenden Größenordnung liegt: frische Proben > alkoholkonservierte alte Proben > unbehandelte, alte Proben. Alle Proben wiesen nach PCR-Amplifikation spezifische elektrophoretische Banden auf. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass ein Blut-DNA-Extraktionskit verwendet werden kann, um DNA aus nekrophilen Fliegen erfolgreich zu extrahieren, und die DNA-Konzentration frischer Fliegenproben ist höher als die alter Fliegenproben. Die Fliegen können lange in Alkohol gelagert werden.

Einleitung

Die Schlussfolgerung des Todeszeitpunkts war schon immer eine der zentralen und schwierigsten Fragen, die in der gerichtlichen Praxis zu lösen waren. In der Praxis der Forensik spielt die Bestimmung des postmortalen Intervalls bei einem Kriminalfall eine entscheidende Rolle bei der Ableitung des Tatzeitpunkts, der Eingrenzung des Verdächtigen und der Eingrenzung des Ermittlungsumfangs. Traditionelle Methoden zur Ableitung des Todeszeitpunkts beruhen in erster Linie auf frühen postmortalen Phänomenen, die in der Regel nur zur Ableitung des Todeszeitpunkts innerhalb von 24 Stunden herangezogen werden können. Die lange Zeit des Todes kann jedoch nicht durch postmortale P....

Protokoll

HINWEIS: In diesem Protokoll wurden insgesamt fünf Proben von C. megacephala verwendet - drei frische Proben (Fresh 1, Fresh 2 und Fresh 3), eine Probe, die 2 Jahre lang in Alkohol gelagert wurde (Old 1) und eine Probe, die 2 Jahre lang in einer trockenen, versiegelten Lagerung gelagert wurde, die nur vor Licht geschützt war (Old 2). Die Proben müssen entsprechend den experimentellen Anforderungen gekennzeichnet werden.

1. Allgemeine Probenlagerung und -vorbereitung

1. Probenauswahl und -vorbereitung
   HINWEIS: Achten Sie darauf, im Abzug zu arbeiten, wenn Sie Ethylacetat auftragen, um nekrophage Fliegen zu....

Diskussion

Die DNA-Extraktion ist das wichtigste Glied bei der molekularen Identifizierung nekrophiler Fliegen, und die Extraktionsmethode und die Qualität der extrahierten DNA wirken sich direkt auf den späteren Nachweis aus. In diesem Experiment haben wir erfolgreich DNA von nekrophilen Fliegen extrahiert, indem wir ein gängiges Blutkit verwendet haben, ohne dass ein spezielles Insekten-DNA-Extraktionskit gekauft werden musste, was die Extraktion von Insekten-DNA erleichtert.

Die Oberfläche der Fli.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buffer AE	Qiagen	172026832	DNA elution buffer
Buffer AL	Qiagen	172028374	lysis buffer
Buffer ATL	Qiagen	172028162	tissue lysis buffer
Buffer AW1	Qiagen	172028760	protein removal buffer
Buffer AW2	Qiagen	57203108	desalination buffer
C1-J-2495	Taihe Biotechnology	TW21109216	forword primer
C1-N-2800	Taihe Biotechnology	TW21109217	reverse primer
D2000 DNA ladder	Real-Times(Beijing) Biotechnology	RTM415	Measure the position of electrophoretic bands
DNeasy Mini spin column	Qiagen	166050343	DNA adsorption column
Dry Bath Incubator	Miulab	DKT200-2D	used for heating
MIX-30S Mini Mixer	Miulab	MUC881206	oscillatory action
Proteinase K	Qiagen	172026218	Inactivation of intracellular nucleases and other proteins
Qubit 3.0 Fluorometer	Thermo Fisher Scientific	2321611188
Speed Micro-Centrifuge	Scilogex	9013001121	centrifuge
Standard#1	Thermo Fisher Scientific	2342797
Standard#2	Thermo Fisher Scientific	2342797
Tanon 3500R Gel Imager	Tanon	16T5553R-455	gel imaging
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Thermo Cycler	Zhuhai Hema	VRB020A	ordinary PCR
Working Solution	Thermo Fisher Scientific	2342797