Estrazione del DNA e confronto tra campioni di mosca necrofila vecchi e freschi

Riepilogo

Questo articolo descrive un protocollo per l'estrazione del DNA di mosche necrofile fresche e vecchie utilizzando un kit di estrazione del DNA comune modificato.

Abstract

Un totale di cinque campioni di Chrysomya megacephala - tre campioni freschi, un campione conservato in alcol per 2 anni e un campione conservato in un deposito sigillato a secco per 2 anni protetto solo dalla luce - sono stati selezionati per indagare se un kit di estrazione del DNA del sangue potesse estrarre il DNA dai moscerini necrofili e per determinare se l'alcol potesse prolungare la conservazione del DNA dei moscerini necrofili. In primo luogo, il kit di estrazione del DNA del sangue è stato utilizzato per estrarre il DNA dai tessuti del torace. Quindi, la purezza e la concentrazione del DNA sono state esaminate utilizzando un lettore di micropiastre e un fluorimetro. Infine, l'amplificazione PCR e l'elettroforesi del DNA estratto sono state eseguite con primer necrofili specifici per la mosca situati nella sequenza genica mitocondriale CO I. I risultati hanno mostrato che la purezza del DNA di tutti i campioni era superiore a 2,0. È stato osservato che la concentrazione di DNA era del seguente ordine: campioni freschi > vecchi campioni conservati in alcool > vecchi campioni non trattati. Tutti i campioni avevano bande elettroforetiche specifiche dopo l'amplificazione della PCR. In conclusione, un kit per l'estrazione del DNA del sangue può essere utilizzato per estrarre con successo il DNA dalle mosche necrofile e la concentrazione di DNA dei campioni di mosca freschi è maggiore di quella dei vecchi campioni di mosca. Le mosche possono essere conservate a lungo nell'alcool.

Introduzione

La deduzione dell'ora della morte è sempre stata una delle questioni chiave e difficili da risolvere nella pratica giudiziaria. Nella pratica delle scienze forensi, per un caso penale, determinare l'intervallo post-mortem gioca un ruolo cruciale nel dedurre l'ora del crimine, bloccare il sospetto e restringere l'ambito dell'indagine. I metodi tradizionali per dedurre l'ora della morte si basano principalmente su fenomeni post-mortem precoci, che generalmente possono essere utilizzati solo per dedurre l'ora della morte entro 24 ore. Tuttavia, il lungo periodo della morte non può essere determinato da fenomeni post mortem. È ora generalmente riconosciuto nella comunità ....

Protocollo

NOTA: In questo protocollo sono stati utilizzati un totale di cinque campioni di C. megacephala : tre campioni freschi (Fresh 1, Fresh 2 e Fresh 3), un campione conservato in alcool per 2 anni (Old 1) e un campione conservato in una conservazione sigillata a secco per 2 anni al riparo dalla luce (Old 2). I campioni devono essere etichettati secondo i requisiti sperimentali.

1. Conservazione e preparazioni generali dei campioni

1. Selezione e preparazione dei campioni
   NOTA: Assicurarsi di lavorare nella cappa aspirante quando si applica l'acetato di etile per eseguire mosche necrofaghe. Rimuovere il liquid....

Discussione

L'estrazione del DNA è l'anello più critico nell'identificazione molecolare delle mosche necrofile e il suo metodo di estrazione e la qualità del DNA estratto influenzano direttamente la successiva rilevazione. In questo esperimento, abbiamo estratto con successo il DNA dalle mosche necrofile utilizzando un comune kit di sangue, senza la necessità di acquistare uno speciale kit di estrazione del DNA degli insetti, che rende l'estrazione del DNA degli insetti più facile da realizzare.

La s.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buffer AE	Qiagen	172026832	DNA elution buffer
Buffer AL	Qiagen	172028374	lysis buffer
Buffer ATL	Qiagen	172028162	tissue lysis buffer
Buffer AW1	Qiagen	172028760	protein removal buffer
Buffer AW2	Qiagen	57203108	desalination buffer
C1-J-2495	Taihe Biotechnology	TW21109216	forword primer
C1-N-2800	Taihe Biotechnology	TW21109217	reverse primer
D2000 DNA ladder	Real-Times(Beijing) Biotechnology	RTM415	Measure the position of electrophoretic bands
DNeasy Mini spin column	Qiagen	166050343	DNA adsorption column
Dry Bath Incubator	Miulab	DKT200-2D	used for heating
MIX-30S Mini Mixer	Miulab	MUC881206	oscillatory action
Proteinase K	Qiagen	172026218	Inactivation of intracellular nucleases and other proteins
Qubit 3.0 Fluorometer	Thermo Fisher Scientific	2321611188
Speed Micro-Centrifuge	Scilogex	9013001121	centrifuge
Standard#1	Thermo Fisher Scientific	2342797
Standard#2	Thermo Fisher Scientific	2342797
Tanon 3500R Gel Imager	Tanon	16T5553R-455	gel imaging
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Thermo Cycler	Zhuhai Hema	VRB020A	ordinary PCR
Working Solution	Thermo Fisher Scientific	2342797