Extraction d’ADN et comparaison entre des échantillons de mouches nécrophiles anciennes et fraîches

Résumé

Cet article décrit un protocole pour l’extraction de l’ADN de mouches nécrophiles fraîches et anciennes à l’aide d’un kit d’extraction d’ADN commun modifié.

Résumé

Au total, cinq échantillons d’échantillons de Chrysomya megacephala - trois échantillons frais, un échantillon stocké dans de l’alcool pendant 2 ans et un échantillon stocké dans un stockage scellé à sec pendant 2 ans à l’abri de la lumière seulement - ont été sélectionnés pour déterminer si un kit d’extraction d’ADN sanguin pouvait extraire de l’ADN de mouches nécrophiles et pour déterminer si l’alcool pouvait prolonger la conservation de l’ADN des mouches nécrophiles. Tout d’abord, le kit d’extraction d’ADN sanguin a été utilisé pour extraire l’ADN des tissus de leur thorax. Ensuite, la pureté et la concentration de l’ADN ont été examinées à l’aide d’un lecteur de microplaques et d’un fluorimètre. Enfin, l’amplification par PCR et l’électrophorèse de l’ADN extrait ont été réalisées avec des amorces spécifiques à la mouche nécrophile situées dans la séquence du gène mitochondrial CO I. Les résultats ont montré que la pureté de l’ADN de tous les échantillons était supérieure à 2,0. On a observé que la concentration d’ADN était de l’ordre suivant : des échantillons frais > des échantillons anciens conservés dans de l’alcool > des échantillons anciens non traités. Tous les échantillons présentaient des bandes électrophorétiques spécifiques après amplification par PCR. En conclusion, un kit d’extraction d’ADN sanguin peut être utilisé pour extraire avec succès l’ADN des mouches nécrophiles, et la concentration d’ADN des échantillons de mouches fraîches est supérieure à celle des anciens échantillons de mouches. Les mouches peuvent être stockées dans l’alcool pendant une longue période.

Introduction

L’inférence de l’heure du décès a toujours été l’une des questions clés et difficiles à résoudre dans la pratique judiciaire. Dans la pratique de la science médico-légale, pour une affaire criminelle, la détermination de l’intervalle post-mortem joue un rôle crucial dans la déduction de l’heure du crime, l’enfermement du suspect et la réduction de la portée de l’enquête. Les méthodes traditionnelles d’inférence de l’heure du décès sont basées principalement sur des phénomènes d’autopsie précoces, qui ne peuvent généralement être utilisés que pour déduire l’heure du décès dans les 24 heures. Cependant, la longue durée de la mort ne peut pas être déterminée par des phén....

Protocole

REMARQUE : Au total, cinq échantillons de C. megacephala ont été utilisés dans le cadre de ce protocole : trois échantillons frais (frais 1, frais 2 et frais 3), un échantillon conservé dans de l’alcool pendant 2 ans (ancien 1) et un échantillon stocké dans un endroit sec scellé pendant 2 ans, à l’abri de la lumière seulement (ancien 2). Les échantillons doivent être étiquetés conformément aux exigences expérimentales.

1. Stockage et préparations généraux des échantillons

1. Sélection et préparation des échantillons
   REMARQUE : Assurez-vous de travailler dans la hotte lorsque vous appliquez de l’acétate d’....

Discussion

L’extraction de l’ADN est le maillon le plus critique dans l’identification moléculaire des mouches nécrophiles, et sa méthode d’extraction et la qualité de l’ADN extrait affectent directement la détection ultérieure. Dans cette expérience, nous avons réussi à extraire de l’ADN de mouches nécrophiles en utilisant un kit de sang commun, sans avoir besoin d’acheter un kit spécial d’extraction d’ADN d’insecte, ce qui rend l’extraction de l’ADN d’insecte plus facile à réaliser.

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Buffer AE	Qiagen	172026832	DNA elution buffer
Buffer AL	Qiagen	172028374	lysis buffer
Buffer ATL	Qiagen	172028162	tissue lysis buffer
Buffer AW1	Qiagen	172028760	protein removal buffer
Buffer AW2	Qiagen	57203108	desalination buffer
C1-J-2495	Taihe Biotechnology	TW21109216	forword primer
C1-N-2800	Taihe Biotechnology	TW21109217	reverse primer
D2000 DNA ladder	Real-Times(Beijing) Biotechnology	RTM415	Measure the position of electrophoretic bands
DNeasy Mini spin column	Qiagen	166050343	DNA adsorption column
Dry Bath Incubator	Miulab	DKT200-2D	used for heating
MIX-30S Mini Mixer	Miulab	MUC881206	oscillatory action
Proteinase K	Qiagen	172026218	Inactivation of intracellular nucleases and other proteins
Qubit 3.0 Fluorometer	Thermo Fisher Scientific	2321611188
Speed Micro-Centrifuge	Scilogex	9013001121	centrifuge
Standard#1	Thermo Fisher Scientific	2342797
Standard#2	Thermo Fisher Scientific	2342797
Tanon 3500R Gel Imager	Tanon	16T5553R-455	gel imaging
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Taq Mix Pro	Monad	00007808-140534	PCR Mix
Thermo Cycler	Zhuhai Hema	VRB020A	ordinary PCR
Working Solution	Thermo Fisher Scientific	2342797