Mechanismus des Shu-Mu-Gehirn-Nieren-Akupunkturpunkts bei der Behandlung von Oligoasthenospermie bei Ratten über die Hypothalamus-Hypophysen-Hoden-Achse

Zusammenfassung

Ziel dieser Studie ist es, die therapeutische Wirkung des Shu-Mu Gehirn-Nieren-Akupunkturpunkts auf die Oligoasthenospermie bei Ratten zu verifizieren und den zugrunde liegenden Mechanismus über die Hypothalamus-Hypophysen-Hoden-Achse (HPT) zu erforschen.

Zusammenfassung

Oligoasthenospermie ist eine häufige Ursache für männliche Unfruchtbarkeit. Die Hypothalamus-Hypophysen-Hoden-Achse (HPT) reguliert die Differenzierung und Reifung der Gonaden durch die Synthese und Freisetzung von Fortpflanzungshormonen und spielt eine wichtige Rolle für die männliche Fruchtbarkeit. Eine Störung der Stabilität der HPT-Achse beeinträchtigt die Spermienproduktion und verringert die Samenqualität. Die Untersuchung der Wirkung der Elektroakupunktur auf die Regulation der HPT-Achse kann Einblicke in die Behandlung von Oligoasthenospermie geben. Fünfzig 8 Wochen alte männliche SD-Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in Blind-, Modell-, Shu-Mu-Gehirn-Niere-, Nicht-Akupunktur- und L-Carnitin-Gruppen eingeteilt (n = 10 pro Gruppe). Mit Ausnahme der Blindgruppe erhielten die Ratten 28 Tage lang intragastrisch Adenin, um das Modell zu etablieren. Nach der Modellierung wurde die Shu-Mu-Gehirn-Nieren-Gruppe einer Elektroakupunktur an bestimmten Akupunkturpunkten unterzogen, während die Nicht-Akupunktur-Gruppe täglich eine 30-minütige Scheinbehandlung erhielt. Die L-Carnitin-Gruppe erhielt L-Carnitin (10 ml/kg) intragastrisch einmal täglich. Die Behandlungen dauerten 28 Tage. Der Allgemeinzustand, die Organkoeffizienten und die Samenqualität wurden beurteilt. Bei der HE-Färbung wurde die Gewebemorphologie analysiert, und der ELISA wies Veränderungen des Serumhormons nach. Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten die Shu-Mu-Gehirn-Nieren- und L-Carnitin-Gruppen signifikante Verbesserungen des Geistes, der Ernährung und des Stuhlgangs mit erhöhtem Körpergewicht, während die Nicht-Akupunktur-Gruppe keine signifikante Veränderung zeigte. Die Koeffizienten der Nierenorgane nahmen in der Shu-Mu-Gehirn-Niere- und der L-Carnitin-Gruppe signifikant ab, blieben aber in der Nicht-Akupunktur-Gruppe unverändert. Die Koeffizienten der Hodenorgane zeigten keine signifikanten Unterschiede zwischen den Behandlungsgruppen. Die Spermienzahl, -dichte, das Überleben und die Motilitätsraten verbesserten sich signifikant in den Shu-Mu-Gehirn-Nieren- und L-Carnitin-Gruppen, jedoch nicht in der Nicht-Akupunktur-Gruppe. Die H&E-Färbung zeigte eine verbesserte Schädigung des Nieren- und Hodengewebes in den Shu-Mu-Gehirn-Nieren- und L-Carnitin-Gruppen. Der ELISA zeigte in diesen Gruppen erhöhte T-, GnRH- und INHB-Werte und verringerte LH-, FSH-, E2- und PRL-Spiegel (p < 0,001), wobei es in der Nicht-Akupunktur-Gruppe keine signifikanten Veränderungen gab. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Shu-Mu-Gehirn-Nieren-Akupunkturpunkttherapie die Spermienqualität verbessert, indem sie die HPT-Achse reguliert und eine potenzielle Behandlung für Oligoasthenospermie bietet.

Einleitung

Die Oligoasthenospermie, unterteilt in "Oligospermie" und "Asthenospermie", ist eine der häufigsten Arten der männlichen Unfruchtbarkeit, mit einer Inzidenzrate, die etwa 75 % der männlichen Unfruchtbarkeitsfälle ausmacht¹. Die Oligoasthenospermie ist hauptsächlich durch eine verminderte Spermiendichte und -motilität in den Hoden gekennzeichnet und manifestiert sich klinisch meist als Spermatogenesestörung, verminderte Spermienzahl und geringe Spermienmotilität ^2,3. In den letzten Jahren hat die Inzidenz von Oligoasthenospermie von Jahr^{zu Jahr 4} zugenommen. Ohne eine wirksame Behandlung wird es langfristige negative Auswirkungen auf die körperliche und geistige Gesundheit der Patienten und sogar auf die Harmonie in der Familie^{haben 5}. Studien haben gezeigt, dass genetische Probleme⁶, endokrine Fortpflanzungsstörungen⁷, Infektionen des Urogenitaltrakts⁸ und chemische Medikamente⁹ die Spermienproduktion und -reifung beeinträchtigen können, was zu einer Verschlechterung der Samenqualität führt. Derzeit ist die Verbesserung der Qualität geschädigter Spermien zu einem herausfordernden Problem im medizinischen Bereich geworden.

Die Hypothalamus-Hypophysen-Hoden-Achse (HPT) ist der Hauptweg der Fortpflanzungsregulation im Körper, der die Differenzierung und Reifung der Gonaden regulieren kann, indem er die Synthese und Freisetzung von Fortpflanzungshormonen stimuliert, die mit dem Hypothalamus, der Hypophyse und den Hoden in Verbindung stehen, und eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der normalen männlichen Fortpflanzungsfunktion spielt¹⁰. Wenn die Stabilität der Funktion der HPT-Achse gestört ist, führt dies dazu, dass die Hodensekretion nicht ausreicht, um die physiologische Testosteronkonzentration zu erreichen, was zu einer Abnahme der Anzahl und Qualität der Spermien im Hoden führt¹¹. Daher zielt die Behandlung der Oligoasthenospermie hauptsächlich darauf ab, die Funktion der HPT-Achse zu regulieren und den Zweck zu erreichen, das Gleichgewicht der verwandten endokrinen Hormone aufrechtzuerhalten, wodurch die Anzahl der Spermien im Sperma erhöht, die Spermienaktivität erhöht und die Samenqualität verbessert wird.

Bei der klinischen Behandlung der Oligoasthenospermie wendet die moderne Medizin hauptsächlich Methoden wie chirurgische Eingriffe und Medikamente zur Antioxidation und zur Verbesserung der Beweglichkeit der Spermien^{an 12,13}, während die Elektroakupunkturtherapie die traditionelle chinesische Akupunktur und die moderne medizinische Bioelektrizität kombiniert. Es hat die Vorteile, dass es schnell und genau ist, eine offensichtliche heilende Wirkung hat, wenige Nebenwirkungen hat, eine breite Palette geeigneter Krankheiten und niedrige Behandlungskosten aufweist und eine gute Behandlungswirkung auf die Oligoasthenospermie hat ^14,15. "Der Rücken ist Yang und der Bauch ist Yin." Die Shu-Mu-Akupunkturkombination kombiniert die Shu-Punkte mit den Mu-Punkten, einen vorne und einen hinten, ein Yin und ein Yang, die zusammenarbeiten, auch bekannt als die Akupunktur-Kombinationsmethode vorne-hinten. Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) geht davon aus, dass die Niere die Wurzel der pränatalen Essenz ist und die Krankheit in der Niere lokalisiert ist. Der vordere mu-Punkt der Niere, Jingmen (GB25), und der hintere shu-Punkt, Shenshu (BL23), werden ausgewählt, was den Effekt hat, die Niere zu erwärmen, Yang zu unterstützen und Yang innerhalb von Yin zu suchen^16,17; Die Niere speichert Essenz und steuert die Produktion von Knochenmark, das Gehirn ist das Markmeer und der Treffpunkt allen Yangs, und Taixi (KI3) ist der Quellpunkt des Fuß-Shaoyin-Nierenmeridians, der Leber und Niere regulieren und tonisieren, Yin nähren und Knochenmark erzeugen kann¹⁸. In Kombination mit Epangsanxian (MS4) verbindet es die Niere und das Gehirn, was die Idee der "Shu-Mu Gehirn-Nieren-Akupunktur-Kombination" in TCM¹⁹ widerspiegelt, und die therapeutische Wirkung ist offensichtlicher als die der gewöhnlichen Akupunktur.

Aktuelle Behandlungsstudien zur Samenqualität konzentrieren sich in erster Linie auf die Verbesserung der Hodenstruktur und -funktion, während begrenzte Untersuchungen zur Regulierung des Serumhormonspiegels in verschiedenen Geweben der Hypothalamus-Hypophysen-Hoden-Achse (HPT) durchgeführt wurden²⁰. In der Vorforschung wurde die RNA-Sequenzierung (RNA-Seq) verwendet, um Kandidatengene und Regulationswege zu identifizieren, die an der Regulation der Samenqualität im Hypothalamus-, Hypophysen- und Hodengewebe gesunder Ratten und Adenin-induzierter Oligozoospermie-Modellratten beteiligt sind²¹. Zusätzlich wurden in beiden Gruppen Samenqualitätstests und histologische Analysen des Hodengewebes durchgeführt. Diese Ergebnisse lieferten Einblicke in die molekularen Mechanismen, die der Samenqualität bei Adenin-induzierten Oligoasthenospermie-Ratten zugrunde liegen. Die Elektroakupunkturtherapie mit distanziert-approximalem Akupunkturpunkt könnte die Spermienqualität bei Oligoasthenospermie-Ratten verbessern, indem sie die HPT-Achse reguliert, und der Effekt hängt mit dem Prozess des oxidativen Stresses zusammen²². Es ist jedoch nicht bekannt, ob der Shu-Mu Gehirn-Nieren-Akupunkturpunkt die Samenqualität von Ratten verbessern kann, indem er die HPT-Achse reguliert. Um den Regulationsmechanismus zur Verbesserung der Samenqualität bei Oligoasthenospermie-Ratten und wirksame Behandlungsmethoden weiter zu untersuchen, verwendete diese Studie ein Adenin-induziertes Rattenmodell der Oligoasthenospermie und wählte vier Akupunkturpunkte, Epangsanxian, Shenshu, Jingmen und Taixi, aus, um den verwandten Mechanismus der therapeutischen Wirkung des Shu-Mu-Gehirn-Nieren-Akupunkturpunkts auf die Oligoasthenospermie bei Ratten aus dem Aspekt der HPT-Achse zu untersuchen. Bereitstellung einer wissenschaftlicheren Grundlage für die klinische Behandlung.

Protokoll

Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der Ningxia Medical University geprüft und genehmigt (Zulassungsnummer: IACUC-NYLAC-2021-130). Die Studie wurde in strikter Übereinstimmung mit den ARRIVE-Richtlinien 2.0 für Tierversuche durchgeführt und hielt sich an die Tierschutzprinzipien, die im NIH-Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren beschrieben sind. Diese randomisierte kontrollierte Tierstudie verwendete eine einseitige Varianzanalyse und wurde von März bis Mai 2023 am Tierversuchszentrum der Ningxia Medical University durchgeführt. Für diese Studie wurden acht Wochen alte männliche SD-Ratten mit Lichtschutzfaktor mit einem Gewicht von 180-220 g verwendet. Die Einzelheiten zu den verwendeten Reagenzien und Geräten sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Etablierung von Tiermodellen und Behandlungsverfahren

1. Versuchstiere und -gruppen
   1. Besorge dir fünfzig 8 Wochen alte männliche SD-Ratten mit Lichtschutzfaktor und einem Gewicht von 180-220 g.
   2. Halten Sie alle Ratten unter Standardbedingungen unter, halten Sie eine Raumtemperatur von 22-25 °C und eine Luftfeuchtigkeit von 50 % bis 60 % aufrecht und bieten Sie freien Zugang zu Standardfutter und Wasser für Nagetiere.
   3. Nach einer Woche der Adaption teilen Sie die Ratten nach dem Zufallsprinzip in eine leere (B) Gruppe (n = 10) und eine Modellierungsgruppe (n = 40) mit einer Zufallszahlentabellenmethode auf. Verabreichen Sie der Blindgruppe normale Kochsalzlösung und der Modellierungsgruppe Adenin durch eine orale Sonde.
   4. Teilen Sie die Modellierungsgruppe nach 28 Tagen nach dem Zufallsprinzip in eine Modellgruppe (M), eine Shu-Mu-Gehirn-Niere (S)-Gruppe, eine Nicht-Akupunkturpunkt-Gruppe (N) und eine L-Carnitin (L)-Gruppe (n = 10 pro Gruppe) auf. Lassen Sie die Modellgruppe unbehandelt.
      1. Wenden Sie eine Elektroakupunktur-Intervention mit der Shu-Mu Gehirn-Nieren-Akupunktur-Matching-Methode auf die Shu-Mu Gehirn-Nieren-Gruppe an. Verabreichen Sie der Nicht-Akupunktur-Gruppe eine nicht-akupunkturäre Behandlung und der L-Carnitin-Gruppe eine orale L-Carnitin-Flüssigkeit durch Sonde. Behandeln Sie alle Gruppen 28 Tage lang ununterbrochen.
2. Modellbau
   HINWEIS: Studien haben gezeigt, dass hohe Dosen von Adenin die Hodenfunktion bei Ratten beeinträchtigen können, was zu einer abnormalen Sekretion von Sexualhormonen, einer Störung der funktionellen Stabilität der HPT-Achse und einer Verschlechterung der Spermienqualität führt²³. Daher wird Adenin häufig verwendet, um Modelle für die Unfruchtbarkeit männlicher Tiere zu etablieren.
   1. Verabreichen Sie der Blindgruppe normale Kochsalzlösung (1 ml/100 g Körpergewicht) und der Modellgruppe Adenin (20 mg/100 g Körpergewicht) durch orale Sonde (Abbildung 1A).
   2. Stellen Sie sicher, dass während der Sonde kontinuierlich gerührt wird, um eine Adeninausfällung und eine Verstopfung der Sondennadel zu verhindern. Verabreichen Sie die Behandlung einmal täglich für 28 Tage.
3. 1.3 Ablauf der Behandlung
   1. Shu-Mu Gehirn-Niere Gruppe
      1. Beginnen Sie mit der Intervention am ersten Tag nach der Modellierung. Führen Sie die Akupunktur mit sterilen Einweg-Akupunkturnadeln an bilateralen Punkten durch. Nachdem Sie die Ratte fixiert haben, legen Sie die Akupunkturstelle frei und desinfizieren Sie sie.
      2. Fixieren Sie die Haut der Akupunkturstelle mit der linken Hand und stechen Sie den Akupunkturpunkt schnell mit der sterilen Einweg-Akupunkturnadel in der rechten Hand ein. Schließen Sie einen elektrischen Stimulator an. Wenden Sie Dilatationswellen mit einer Elektroakupunkturfrequenz von 2 Hz, einer Stimulationsintensität von 1,5 mA und einem leichten Zittern des lokalen Muskels an.
      3. Führen Sie die Elektroakupunkturbehandlung jeweils 30 Minuten lang einmal täglich an 28 aufeinanderfolgenden Tagen durch (Abbildung 1B).
         HINWEIS: Wählen Sie Akupunkturpunkte bei Ratten unter Bezugnahme auf Yong Tangs Experimental Acupuncture and Moxibustion Science, Anhang II, "Acupuncture Points Commonly Used in Experimental Animals", kombiniert mit einer vergleichenden anatomischen Punktauswahlmethode¹⁹. Die folgenden Punkte wurden ausgewählt: (1) Epangsanxian (MS4): Befindet sich 3 mm unterhalb und 4 mm außerhalb des Touwei-Punktes. Operation: 1-2 mm gerade einstechen; (2) Shenshu (BL23): Befindet sich im Bereich der Wirbelsäule, auf beiden Seiten des unteren Dornfortsatzes des zweiten Lendenwirbels, 6 mm neben der dorsalen Medianlinie. Arbeitsweise: 6 mm gerade einstechen; (3) Jingmen (GB25): Befindet sich an der seitlichen Taille, am freien Ende der 13. Rippe an der unteren Seite. Operation: 1-2 mm gerade einstechen; (4) Taixi (KI3): Befindet sich an der Innenseite des Fußes, in der Vertiefung zwischen dem höchsten Punkt des medialen Sprunggelenks und dem hinteren Rand der Achillessehne. Bedienung: 3 mm gerade einstechen.
   2. Nicht-Akupunktur-Gruppe
      1. Wählen und bedienen Sie die Nicht-Akupunkturpunkte 1, 2 und 3 auf die gleiche Weise wie die Shu-Mu Gehirn-Nieren-Gruppe (Abbildung 1B).
         HINWEIS: Da die Nicht-Akupunkturpunkte nicht dem Prinzip der Punktauswahl entlang der Meridiane folgen und gemäß der Theorie der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM) und der klinischen Langzeitbeobachtung haben diese drei Akupunkturpunkte bei Patienten mit Oligoasthenozoospermie wenig therapeutische Wirkung²⁴. (1) Nicht-Akupunktur 1: Befindet sich in der Mitte der Linie zwischen der Ellbogenspitze und der Achselhöhle an der Innenseite des Ellbogens. Operation: 1-2 mm gerade einstechen; (2) Nicht-Akupunktur 2: Befindet sich in der Mitte zwischen dem medialen Epicondylus des Humerus und dem Handgelenk der Ulna, am Ulnarrand. Operation: 1-2 mm gerade einstechen; (3) Nicht-Akupunktur 3: Befindet sich am Schnittpunkt des vorderen Deltamuskels und des Bizepsmuskels am inneren Arm. Operation: 1-2 mm gerade einstechen.
   3. L-Carnitin-Gruppe
      1. Verabreichen Sie Levocarnitin flüssig zum Einnehmen durch eine orale Sonde in einer Dosis von 10 ml/kg Körpergewicht einmal täglich an 28 aufeinanderfolgenden Tagen (Abbildung 1A).
4. Euthanasie
   1. Nach der Behandlung lassen Sie alle Ratten 24 Stunden lang fasten, betäuben Sie sie durch intraperitoneale Injektion von 2 % Pentobarbital-Natrium (40 mg/kg Körpergewicht, gemäß institutionell anerkannten Protokollen) und entnehmen Sie Blut aus der Herzspitze mit einer intravenösen Einweg-Blutentnahmenadel^21,24.
   2. Nach dem Tod durch Enthauptung entfernen Sie eine Seite des Nebenhodens, um die Samenqualität zu messen. Entnehmen Sie das Nieren- und Hodengewebe, wiegen und protokollieren Sie es und fixieren Sie es 48 Stunden lang in Paraformaldehyd-Fixiermittel bei Raumtemperatur, bevor Sie es in Paraffin²⁴ einbetten.

2. Beobachtungsindizes

1. Allgemeine Beobachtung: Beobachten Sie den mentalen Zustand, die Ernährung und den Stuhlgang der Ratten und überwachen Sie täglich ihr Körpergewicht.
2. Organkoeffizienten: Nach dem Tod das Oberflächenfett und das Bindegewebe sowohl aus dem Nieren- als auch aus dem Hodengewebe vorsichtig entfernen, mit normaler Kochsalzlösung abspülen, mit Filterpapier trocknen, auf einer Waage wiegen und die Messungen für die Berechnung der Organkoeffizienten aufzeichnen. Organkoeffizient (%) = (Organgewicht [g] / Körpergewicht [g]) x 100%.
3. Qualität des Samens
   1. Nachdem Sie überschüssiges Fett entfernt haben, entfernen Sie eine Seite des Nebenhodens und legen Sie sie 5 Minuten lang in ein Wasserbad mit konstanter Temperatur bei 37 °C. Dann schneiden, filtrieren, vorsichtig blasen und die Probe gut mischen.
   2. Nehmen Sie ein 10 μl Aliquot der verdünnten Samensuspension und tropfen Sie es auf den Rand des Deckglases einer vorgewärmten Zählplatte, so dass die Samensuspension automatisch in die Zählkammer eindringen kann.
   3. Messen Sie die Spermienzahl, -dichte, -überlebensrate und -motilitätsrate mit einem CASA-System (computergestützte Samenanalyse)²¹.
4. Hämatoxylin- und Eosin-Färbung (H&E)
   HINWEIS: Einzelheiten zum Verfahren finden Sie unter Yang, N. et ^al.21.
   1. Spülen Sie das fixierte Gewebe mit fließendem Wasser ab, dehydrieren Sie es und betten Sie es ein.
   2. Paraffinabschnitte (5 μm dick) mit einem Mikrotom schneiden und bei 65 °C 4 h backen.
   3. Entwachse die Abschnitte und rehydriere sie mit Wasser.
   4. Färben Sie die Abschnitte 3 Minuten lang mit Hämatoxylin-Färbelösung und spülen Sie sie dann mit fließendem Wasser ab.
   5. Dehydrieren Sie die Abschnitte 1 min lang mit 95%igem Ethanol und färben Sie sie dann 2 min lang mit Eosinlösung.
   6. Führen Sie nach dem Versiegeln der Objektträger einen Scanvorgang mit einem Objektträgerscanner durch und erfassen und analysieren Sie die Bilder.
5. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
   HINWEIS: Einzelheiten zum Verfahren finden Sie unter Yang, N. et ^al.21.
   1. Zur Herstellung des Serums werden Standardsubstanzen und Serum in den entsprechenden Konzentrationen in die zu messenden Standardsubstanzvertiefungen und Probenvertiefungen gegeben, gefolgt von der Zugabe des enzymmarkierten Reagenzes.
   2. Führen Sie die Schritte Inkubation, Waschen, Farbentwicklung und Beendigung durch.
   3. Bestimmen Sie die Absorption bei einer Wellenlänge von 450 nm mit einem enzymmarkierten Instrument und berechnen Sie die Expressionsniveaus von Testosteron (T), Gonadotropin-Releasing-Hormon (GnRH), Inhibin B (INHB), luteinisierendem Hormon (LH), follikelstimulierendem Hormon (FSH), Östradiol (E2) und Prolaktin (PRL).

3. Statistische Analyse

1. Analysieren Sie die experimentellen Daten mit statistischer Software und präsentieren Sie die Ergebnisse jeder Gruppe als Mittelwert ± Standardabweichung (Mittelwert ± SD).
2. Verwenden Sie die unidirektionale ANOVA, um Stichprobenmittelwerte zwischen mehreren Gruppen zu vergleichen, die die Annahmen der Normalität und Homogenität der Varianz erfüllen.
3. Verwenden Sie den t-Test für Vergleiche zwischen zwei Gruppen und nichtparametrische Tests für Daten, die die oben genannten Annahmen nicht erfüllen.
4. Betrachten Sie Unterschiede als statistisch signifikant, wenn p 0,05 <.

Ergebnisse

Evaluierung des Modells

Beobachten Sie die Ratten nach dem Modellieren auf Lethargie, geduckte Haltung, kalte Gliedmaßen, Unlust zu fressen, Gewichtsverlust, erhöhtes Urinvolumen, weichen Stuhl und andere Symptome, die im Allgemeinen mit dem Syndrom des Nieren-Yang-Mangels übereinstimmen.

Beobachten Sie nach der Sek...

Diskussion

In der TCM besteht die "Niere" aus der "inneren Niere", die sich auf die Funktionen des Harnsystems in der modernen Medizin bezieht, und der "äußeren Niere", die sich auf die Hypothalamus-Hypophysen-Gonaden-Achse und die anatomischen äußeren Fortpflanzungsorgane bezieht²⁵. Die männlichen Samenbläschen gehören zur "äußeren Niere", und zu ihren Bestandteilen gehören die Hoden, Nebenhoden, Samenbläschen usw.²⁶. Die TCM betrachtet di...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adenine	Beijing Solarbio Science & Technology Co. Ltd.	A8330
CASA computer-assisted semen analysis system	Nanning Songjing Tianlun Biotechnology Co., Ltd.	VICOS-SPERM
Centrifuge	Sartorius	A-14C
Differentiation fluid	Shanghai Biyuntian Biotechnology Co., Ltd	C0163M
Disposable sterile acupuncture needles	Hanyi brand	0.25mm*13mm
Drying machine	Leica	HI1220
Electrical stimulator	Hua Tuo Brand	SDZ-II
Electronic balance	Hangzhou Youheng Weighing Equipment Co., Ltd	HLD-6002
ELISA kit	Shanghai Jianglai Biotechnology Co. LTD	JL13251?JL11473?JL11525?JL12505?JL13256?JL12201
Enzyme-labeled instrument	Rayto	RT-6100
Eosin staining solution	Zhuhai Beso Biotechnology Co. LTD	BA-4024
Hematoxylin staining solution	Zhuhai Beso Biotechnology Co. LTD	BA-4041
Levocarnitine oral liquid	Northeast Pharmaceutical Group Shenyang First Pharmaceutical Co. LTD.	H19990372
Microtome	Leica	RM2255
Neutral balsam	Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd	Zli-9555
Paraffin embedding machine	Leica	HistoCore Arcadia H
SD rat, 8-week-old, Male, 180-220 g	144 Animal Center of Ningxia Medical University
Slide scanner	Leica	Aperio LV1
Vortex oscillator	Haimen Qilin Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd	QL-902