Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen über die Heilungsmechanismen von kolokolonischen Anastomosen zu beantworten, und kann ein Modell für die Verringerung der anastomotischen Leckraten und ihre potenziell verheerenden Folgen bieten. Unsere Technik bietet eine relativ einfache und reproduzierbare Methode zur Durchführung von kolokolinischer oder kolorektaler Anastomose in einem Tiermodell mit ähnlichen klinischen Leckraten wie bei menschlichen Patienten. Beginnen Sie mit der Sicherung der Gliedmaßen einer anästhesierten Maus an der chirurgischen Oberfläche und desinfizieren Sie den freiliegenden Bauch mit Chlorhexidin.
Als nächstes legen Sie einen sterilen Drap über das Tier, und machen Sie einen Hautschnitt entlang der Mittellinie des Unterbauchs zum Xiphoid. Verwenden Sie Zangen, um die Mittellinie der Bauchwand zu heben, und achten Sie darauf, die intraabdominalen Strukturen nicht zu verletzen, die Länge der Mittellinie Bauchfaszie. Wenn der Darm exponiert ist, lokalisieren Sie das Cecum und den kleinen Darm, und drehen Sie die linke Seite Viszera medial, um den absteigenden und sigmoid Enkopunkt zu belichten.
Dann die Eingeweide mit feuchter, steriler Gaze bedecken. Beschichten Sie eine stumpfe Sondenspitze mit Schmiergelee, und bringen Sie die Sonde vorsichtig ins Rektum, um die Identifizierung des absteigenden Sigmoid-Dickdarms zu unterstützen. Sobald der Dickdarm identifiziert wurde, ziehen Sie die Sonde teilweise zurück und verwenden Sie atraumatische Zangen, um den Sigmoid-Kolon, der dem Beckeneinlass überlegen ist, sanft zu erfassen.
Mit scharfen Mikroscheren, machen Sie einen Schnitt entlang der Sigmoid-Darm, senkrecht zum Darmgewebe, und 80 bis 90% über die Breite des Dickdarms. Wenn ein mesenterisches Blutgefäß während der viszeralen Rotation oder der Kolotomie verletzt wird, setzen Sie den Anblick der Verletzung vorsichtig bis zu zwei Minuten lang. Um die Sigmoid-Kolotomie zu reparieren, verwenden Sie einen castroviejo Nadeltreiber und fünf bis sechs einfache unterbrochene acht O nicht resorbierbare Polypropylenstiche, um die Kolostomie zu reparieren.
Die Anastomose an der Mesentery-Grenze durchzuführen und sich bilateral bis zur Anti-Mesentery-Grenze zu arbeiten, trägt dazu bei, eine Patent- und Nicht-Stenose-Anastomose zu gewährleisten. Im Verlauf der Reparatur können Sie die transanale, stumpfe Spitzensemitnonde voranbringen, um die Reparatur zu überspannen, bevor die ersten Nähte platziert werden, um eine zu enge Reparatur zu verhindern und die Raten der anastomottischen Strenge zu verringern. Wenn alle Nähte platziert sind, verwenden Sie eine 10-Milliliter-Spritze gefüllt mit erwärmter steriler Saline, um den Bauch mehrmals zu bewässern.
Während der letzten Bewässerung füllen Sie den Bauch mit steriler Saline, und bringen Sie vorsichtig einen geschmierten 18 gage Angiokatheter in das Rektum, um den Dickdarm mit 5 bis einem Kubikzentimeter Luft aufzublasen, um ein Leck innerhalb der Anastomose zu identifizieren. Legen Sie dann eine zusätzliche Naht für die Reparatur, und blasen Sie den Doppelpunkt wieder auf, um sicherzustellen, dass es keine Leckagen gibt. Entleeren Sie den Dickdarm mit dem Angiokatheter vor der Entfernung, und bringen Sie die medialisierte Viszera vorsichtig in ihre normale anatomische Position zurück.
Verwenden Sie vier O rezidiierbare geflochtene Nähte, um den Bauchschnitt zu schließen, mit einer laufenden Naht entlang der Muskelschicht der Bauchwand, beginnend an der Spitze des Einschnitts, und beenden Sie am unteren Aspekt des Schnittes. Verwenden Sie dann eine vier O-Monofilament-Nähte, um die Haut zu schließen, und überwachen Sie die Maus, bis sie sich vollständig von der Anästhesie erholt hat. Am entsprechenden experimentellen Endpunkt sterilisieren Sie den Bauch mit Chlorhexidin und 70% Ethanol und verwenden Sie scharfe Scheren, um den ursprünglichen Mittellinienschnitt zu reinisieren.
Verwenden Sie die Schere, um in die Muskelschicht zu schneiden, und führen Sie sorgfältig eine linke mediale Viszeralrotation durch, um den reparierten Sigmoid-Kolon freizulegen. Identifizieren Sie die Reparatursicht, indem Sie die Schwänze der Polypropylen-Nähte, die für die Reparatur verwendet werden, lokalisieren. Sanft und unverblümt sezieren jeden Darm zu Darm Adhäsionen weg vom Anblick der Reparatur, achten darauf, nicht die Anastomose zu stören.
Verwenden Sie einen Markierungsstift, um den anzeitsentischen Rand des Doppelpunkts abzugrenzen, bevor Sie das Doppelpunktsegment entfernen. Als nächstes verwenden Sie die Schere, um quer durch den absteigenden Dickpunkt zu transsektieren, einen Zentimeter vom Paar entfernt, bis zu einem Zentimeter distal vom Anblick der Anastomose. Die postoperativen Gewebe neigen dazu, extrem zerbrechlich und chirurgische Schleifen sowie sanft und akribisch Umgang mit Gewebe, helfen, gegen die Störung der chirurgischen Anastomose zu gewährleisten.
Verwenden Sie eine feine Schere, um den Doppelpunkt von der angebrachten Mesentery entlang der hinteren Grenze des Doppelpunkts scharf zu sezieren, um das sigmoidalSegment zu entfernen. Und entlang der Länge der mesenterischen Grenze in einer Längsweise schneiden, um einen rechteckigen Abschnitt des Dickdarms aus dem zuvor entfernten zylindrischen Exemplar zu schaffen. Und machen Sie einen Längsschnitt entlang der Länge des Dickdarms, gegenüber der Markierung.
Dann fixieren, einbetten und schneiden Sie das Probengewebe, wie es für die Histologie und Immunfärbung notwendig ist. Histologische Analyse, sieben Tage nach der Verletzung, zeigt eine fibrotische Heilungsreaktion, vermittelt durch glatte Muskel alpha Aktin positive Myofibroblasten. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, einen Insufflationstest mit der Unterhaut der Anastomose durchzuführen, um die Durchgängigkeit der Anastomose zu bestätigen und sicherzustellen, dass kein Leck vorhanden ist.
Dieses Verfahren kann an genetisch veränderten oder pathogenen Mäusen mit Wundheilungsstörungen wie diabetischen oder immununterdrückten Mäusen durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu den Faktoren zu beantworten, die zu einem anastomotischen Leck beitragen. Nach diesem Verfahren können Immunhistochemie und Zellkultur aus anastomottischem Gewebe durchgeführt werden, das zu bestimmten Zeitpunkten nach der Operation geerntet wird, um ein besseres Verständnis der beteiligten Zellen und ihrer Rolle im anastomotischen Heilungsprozess zu ermöglichen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Isoflurane extrem gefährlich sein kann, und dass Vorsichtsmaßnahmen, wie die Verwendung von Kohlenstofffiltration und Lüftungshauben immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.
