Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés sur les mécanismes de guérison des anastomoses colo-coloniques, et peut fournir un modèle pour réduire les taux de fuite anastomotic et leurs conséquences potentiellement dévastatrices. Notre technique offre une méthode relativement simple et reproductible pour exécuter l’anastomosis colo-colonique ou colo-rectal dans un modèle animal avec des taux cliniques semblables de fuite aux patients humains. Commencez par fixer les membres d’une souris anesthésiée à la surface chirurgicale et désinfectez l’abdomen exposé avec de la chlorhexidine.
Ensuite, placez un drapé stérile sur l’animal, et faire une incision cutanée le long de la ligne médiane du bas-ventre au xiphoïde. Utilisez des forceps pour soulever la ligne médiane de la paroi abdominale, et en prenant soin de ne pas blesser les structures intra-abdominales incise la longueur du fascia abdominal de midline. Lorsque les intestins sont exposés, localiser le cecum et les intestins grêles, et faire pivoter les viscères gauches côté médiocrement pour exposer le côlon descendant et sigmoïde.
Couvrez ensuite les viscères d’une gaze humide et stérile. Enduire une pointe de sonde contondante de gelée lubrifiante et avancer soigneusement la sonde dans le rectum pour faciliter l’identification du côlon sigmoïde descendant. Une fois que le côlon a été identifié, retirez partiellement la sonde, et utilisez des forceps atraumatiques pour saisir doucement le côlon sigmoïde supérieur à l’entrée pelvienne.
À l’aide de micro ciseaux pointus, faire une coupe le long du côlon sigmoïde, perpendiculairement au tissu intestinal, et s’étendant de 80 à 90% sur toute la largeur du côlon. Si un vaisseau sanguin mésentérique est blessé au cours de la rotation viscérale, ou de la colotomie, appliquez doucement une pression à la vue de la blessure jusqu’à deux minutes. Pour réparer la colotomie sigmoïde, utilisez un conducteur d’aiguille castroviejo et cinq à six simples interrompu huit O points de polypropylène non absorbables pour réparer la colostomie.
L’exécution de l’anastomose à la frontière de mésentery et le travail de votre chemin bilatéralement à la frontière anti-mésentery aide à assurer un brevet et une anastomose de non-sténose. Au fur et à mesure que la réparation progresse, avancez la sonde trans-anale de dissection de pointe émoussée pour enjamber la réparation avant que les sutures initiales soient placées pour aider à empêcher une réparation trop étroite, et pour diminuer des taux de restrictions anastomotic. Lorsque toutes les sutures ont été placées, utilisez une seringue de 10 millilitres remplie de solution saline stérile réchauffée pour irriguer l’abdomen à plusieurs reprises.
Pendant l’irrigation finale remplir l’abdomen avec stérile saline, et avancer soigneusement un lubrifié, angiocathéter 18 gage dans le rectum pour gonfler le côlon avec 5 à un centimètre cube d’air, pour l’identification d’une fuite dans l’anastomose. Ensuite, placez une suture supplémentaire pour la réparation, et gonflez le côlon à nouveau pour s’assurer qu’il n’y a pas de fuites. Dégonfler le côlon avec l’angiocathéter avant l’ablation, et retourner doucement les viscères médialisés à sa position anatomique normale.
Utilisez quatre sutures tressées absorbables O pour fermer l’incision abdominale, avec une suture courante le long de la couche musculaire de la paroi abdominale, en commençant par le haut de l’incision, et en terminant à l’aspect inférieur de l’incision. Ensuite, utilisez une suture de monofilament de quatre O pour fermer la peau, et surveiller la souris jusqu’à ce qu’elle se soit complètement remise de l’anesthésie. Au point d’extrémité expérimental approprié, stériliser l’abdomen avec de la chlorhexidine et 70% d’éthanol, et utiliser des ciseaux pointus pour re-incise l’incision midline d’origine.
Utilisez les ciseaux pour couper dans la couche musculaire, et effectuez soigneusement une rotation viscérale médiale gauche pour exposer le côlon sigmoïde réparé. Identifiez la vue de réparation en localant les queues de la suture de polypropylène utilisée pour la réparation. Disséquer doucement et brutalement les adhérences intestinales à l’intestin loin de la vue de la réparation, en prenant soin de ne pas perturber l’anastomose.
Utilisez un stylo de marquage pour délimiter la bordure antimesenterique du côlon, avant l’enlèvement du segment du côlon. Ensuite, utilisez les ciseaux pour transversal transect à travers le côlon descendant, un centimètre de la paire, jusqu’à un centimètre distal de la vue de l’anastomose. Les tissus postopératoires ont tendance à être extrêmement fragiles et boucles chirurgicales ainsi que la manipulation douce et méticuleuse des tissus, aider à assurer contre la perturbation de l’anastomose chirurgicale.
Utilisez des ciseaux fins pour disséquer brusquement le côlon de la mésenterie attachée le long de la bordure postérieure du côlon pour enlever le segment sigmoïde. Et couper le long de la longueur de la bordure mésentérique d’une manière longitudinale, pour créer une section rectangulaire du côlon à partir du spécimen cylindrique précédemment enlevé. Et faire une coupe longitudinale le long de la longueur du côlon, en face du marquage.
Puis fixer, imbed, et couper le tissu d’échantillon si nécessaire pour l’histologie et ou l’immunostaining. L’analyse histologique, sept jours après blessure, indique une réponse fibrotique de guérison, médiée par les myofibroblastes positifs positifs d’alpha de muscle lisse. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler d’effectuer un test d’insufflation avec l’anastomose immergée sous la solution saline normale, de confirmer la patency de l’anastomose, et de s’assurer qu’aucune fuite n’est présente.
Cette procédure peut être effectuée sur des souris génétiquement modifiées ou pathogènes atteintes de troubles de cicatrisation des plaies, comme des souris diabétiques ou immunodéprimées, pour répondre à d’autres questions sur les facteurs qui contribuent à une fuite anastomotique. Après cette procédure, l’immunohistochimie et la culture cellulaire peuvent être exécutées à partir du tissu anastomotic récolté à des points spécifiques de temps suivant la chirurgie, pour fournir une meilleure compréhension des cellules impliquées, et de leurs rôles dans le processus anastomotic curatif. N’oubliez pas que travailler avec Isoflurane peut être extrêmement dangereux, et que des précautions, telles que l’utilisation de filtration de carbone et de hottes de ventilation doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
