Un modelo murino de hipertrofia ventricular derecha inducida por sobrecarga de presión y fallo por bandas del tronco pulmonar

Resumen

Describimos un modelo murino de sobrecarga de presión ventricular derecha inducida por bandas del tronco pulmonar. En el documento se incluyen protocolos detallados para la intubación, la cirugía y el fenotipado por ecocardiografía. Para la intubación y la cirugía se utilizan instrumentos hechos a medida, lo que permite una reproducción rápida y económica del modelo.

Resumen

La insuficiencia del ventrículo derecho (VD) causada por sobrecarga de presión está fuertemente asociada con la morbilidad y mortalidad en una serie de enfermedades cardiovasculares y pulmonares. La patogenia del fracaso del VD es compleja y sigue siendo inadecuada. Para identificar nuevas estrategias terapéuticas para el tratamiento del fracaso del VD, son esenciales modelos animales robustos y reproducibles. Los modelos de bandas del tronco pulmonar (PTB) han ganado popularidad, ya que la función del VD se puede evaluar independientemente de los cambios en la vasculatura pulmonar.

En este artículo, presentamos un modelo murino de sobrecarga de presión RV inducida por PTB en ratones de 5 semanas de edad. El modelo se puede utilizar para inducir diferentes grados de patología del VD, que van desde la hipertrofia leve del VD hasta el fracaso descompensado del VD. En el documento se incluyen protocolos detallados para la intubación, la cirugía PTB y el fenotipado por ecocardiografía. Además, se proporcionan instrucciones para personalizar los instrumentos de intubación y cirugía de PTB, lo que permite una reproducción rápida y económica del modelo de PTB.

Se utilizaron clips de ligadura de titanio para constreñir el tronco pulmonar, lo que garantizó un grado de constricción del tronco pulmonar altamente reproducible e independiente del operador. La severidad del TBP se clasificó mediante el uso de diferentes diámetros de clip de ligadura interna (leve: 450 μm y grave: 250 μm). Esto dio lugar a una patología del VD que va desde la hipertrofia con la función del VD preservada hasta la insuficiencia descompensada del VD con gasto cardíaco reducido y manifestaciones extracardíacas. La función del VD se evaluó mediante ecocardiografía a la 1 semana y a las 3 semanas después de la cirugía. Aquí se presentan ejemplos de imágenes ecocardiográficas y resultados. Además, se muestran los resultados del cateterismo cardíaco derecho y los análisis histológicos del tejido cardíaco.

Introducción

La insuficiencia ventricular derecha (VD) es un síndrome clínico con síntomas de insuficiencia cardíaca y signos de congestión sistémica resultante de la disfunción del VD¹. La disfunción del VD está fuertemente asociada con la morbilidad y mortalidad en una serie de enfermedades cardiovasculares y pulmonares². La etiología de la disfunción del VD es compleja y sus vías de señalización y regulación subyacentes siguen sin estar adecuadamente dilucidadas.

Las observaciones de las terapias actuales muestran que la mejora de la función del VD se correlaciona estrechamente con la reducción de la po....

Protocolo

El estudio fue aprobado por la Inspección Danesa de Experimentos con Animales (número de autorización: 2021-15-0201-00928) y se realizó de acuerdo con la legislación nacional sobre animales de laboratorio. En este estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6N de 5 semanas de edad.

1. Personalización de instrumental para intubación y cirugía (Figura 1)

NOTA: Esta sección detalla los pasos más importantes en la preparación de instrumentos hechos a medida para la intubación y la cirugía de PTB a partir de materiales económicos y fácilmente disponibles.

Discusión

En este artículo, presentamos un modelo murino de hipertrofia y falla del VD inducida por sobrecarga de presión. Demostramos que: (i) el PTB en ratones juveniles puede inducir diversos grados de patología del VD, que van desde una hipertrofia leve del VD hasta un fallo del VD con signos extracardíacos de descompensación y fibrosis del VD confirmada histológicamente. (ii) Los signos de disfunción del VD pueden observarse y cuantificarse mediante ecocardiografía a las 1 y 3 semanas después de la cirugía de PTB. (.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Biosyn 6-0, monofilament, absorbable suture	Covidien	UM-986
Blunt cannula, 27G 0.4x0.25,	Sterican	292832
Bupaq Multidose vet 0,3 mg/ml (Buprenorphinum)	Salfarm Danmark	VNR 472318
C57BL/6NTac mice	Taconic Biosciences	C57BL/6NTac
Dagrofil 1, braided, non-absorbable suture	B Braun	C0842273
Depilatory cream	Veet	3132000
Disinfection Swabs (82% Ethanol + 0.5% Chlorhexidine)	Mediq	3340122
Disposable scalpels, size 11	Swann-Morton	11708353
Dräger Vapor 2000 Sevoflurane	Dräger	M35054
Eye oinment neutral, "Ophta"	Actavis	MTnr.: 07586 Vnr: 53 96 68
Horizon ligating clips	Teleflex Medical	5200 (IPN914931)
Horizon Open Ligating Clips applier, curved, 6" (15 cm)	Teleflex Medical	537061
Kitchen roll holder	n.a.	n.a.
Metal wire of different thickness	n.a.	n.a.
Microsurgical instruments set	Thompson	n.a.
MiniVent Ventilator	Hugo Sachs	Type 845
MS505S transducer	Visual sonics	n.a.
Rimadyl Bovis vet. 50 mg/ml (Carprofen)	Zoetis	MTnr: 34547, Vnr: 10 27 99,
Sevoflurane Baxter 100 %	Baxter Medical	MTnr: 35015
Silicone tubing	n.a.	n.a.
Soft plastic sheet	n.a.	n.a.
Stereomicroscope, "Opmi Pico"	Carl Zeiss Surgicals GmbH	n.a.
Ultrasonic probe holder/rail	Visual Sonics	11277
Varming plate	Visual sonics	11437
Venflon ProSafety, 22G, 0,9 x 25mm	Becton Dickinson	393222