Obtención de células similares a la microglía inducidas a partir de monocitos derivados de la sangre total para sondear la dinámica microglial en enfermedades humanas

Para empezar, obtenga células mononucleares humanas de sangre completa. Reactivo de bloqueo FcR humano Vortex y agregue la cantidad requerida de reactivo a las células. Incubar el tubo con células a cuatro grados centígrados durante cinco minutos.

Agregue 20 microlitros de CD11b MicroBeads por cada 10 a la potencia de siete células totales e incube a cuatro grados centígrados durante 20 minutos. Desinfecte a fondo el soporte magnético con etanol al 70%. Después de la incubación, agregue 10 mililitros de tampón de aislamiento.

Mezcle y centrifugue el tubo a 300 g durante 10 minutos a cuatro grados centígrados. Una vez que el soporte se seque, coloque la columna magnética en el soporte magnético. Después de retirar el sobrenadante, agregue un mililitro de tampón aislante y mezcle suavemente con la pipeta.

A continuación, cargue la suspensión de la celda en la columna y lávela tres veces con tres mililitros de tampón de aislamiento cada vez que el depósito de la columna esté vacío. Coloque la columna en un tubo cónico de 15 mililitros sin tocar la parte magnética. Después de agregar cinco mililitros de tampón de aislamiento, empuje el émbolo hacia adentro del tubo para forzar la salida del líquido a través de la columna.

Centrifugar la suspensión celular recogida en el tubo. Aspirar el sobrenadante y volver a suspender las células en un medio de aislamiento. Después del recuento de células, alícuota 500 microlitros de suspensión celular en cada pocillo de una placa de 24 pocillos e incubar durante la noche.

Para inducir células similares a la microglía, reemplace el medio de aislamiento de la siembra del día anterior por un medio de inducción e incube las células durante 14 días. Las células inducidas similares a la microglía exhibían diminutos cuerpos de soma y numerosos colaterales ramificados.