RGBradford : Quantification des protéines avec l’appareil photo d’un smartphone

Résumé

Cet article fournit un protocole pour la quantification des protéines à l’aide du test de Bradford et d’un smartphone comme dispositif d’analyse. Les niveaux de protéines dans les échantillons peuvent être quantifiés à l’aide de données de couleur extraites d’une photo d’une microplaque prise avec un smartphone.

Résumé

La quantification des protéines est une procédure essentielle dans la recherche en sciences de la vie. Parmi plusieurs autres méthodes, le test Bradford est l’une des plus utilisées. En raison de sa grande popularité, les limites et les avantages du test Bradford ont été rapportés de manière exhaustive, y compris plusieurs modifications de la méthode originale pour améliorer ses performances. L’une des modifications de la méthode originale est l’utilisation de l’appareil photo d’un smartphone comme instrument d’analyse. En tirant parti des trois formes du colorant bleu brillant de Coomassie qui existent dans les conditions du test de Bradford, cet article décrit comment quantifier avec précision les protéines dans les échantillons à l’aide de données de couleur extraites d’une seule image d’une microplaque. Après avoir effectué le test dans une microplaque, une image est prise à l’aide de l’appareil photo d’un smartphone et les données de couleur RVB sont extraites de l’image à l’aide d’une application logicielle d’analyse d’image gratuite et open-source. Ensuite, le rapport entre l’intensité bleue et l’intensité verte (dans l’échelle RVB) d’échantillons avec des concentrations inconnues de protéines est utilisé pour calculer la teneur en protéines sur la base d’une courbe standard. Aucune différence significative n’est observée entre les valeurs calculées à l’aide des données de couleur RVB et celles calculées à l’aide des données d’absorbance conventionnelles.

Introduction

Quelle que soit l’utilisation en aval (par exemple, ELISA, cinétique enzymatique, transfert Western, purification des protéines et spectrométrie de masse), la quantification des protéines est cruciale pour une analyse précise dans les laboratoires des sciences de la vie. En plus de leur utilisation comme lectures secondaires (c’est-à-dire pour calculer les niveaux relatifs d’analytes par masse de protéines), les niveaux de protéines dans un échantillon peuvent également être le résultat souhaité lui-même. Par exemple, on peut s’intéresser aux teneurs en protéines des ressources alimentaires¹ ou dans l’urine². Il existe d....

Protocole

1. Préparation du réactif de dosage des protéines de Bradford

1. Dissoudre 100 mg de Coomassie Brilliant Blue G dans 50 ml d’éthanol à 95 % (p/v). Mélanger jusqu’à ce que Coomassie Brilliant Blue G soit complètement dissous.
   ATTENTION : L’éthanol est inflammable et provoque une irritation des yeux. Évitez les flammes et utilisez des lunettes de protection.
2. Ajouter 100 mL d’acide phosphorique à 85 % (p/v) à la solution précédente.
   ATTENTION : L’acide phosphorique est corrosif pour les métaux et provoque une corrosion de la peau, de graves lésions oculaires et une toxicité orale aiguë. Portez des gants et des lunettes de protectio....

Discussion

Cet article décrit RGBradford, une méthode qui utilise l’appareil photo d’un smartphone pour enregistrer les données d’un test de protéine Bradford, extraire les données de couleur et quantifier avec précision les niveaux de protéines dans les échantillons biologiques, comme décrit récemment²⁰. Une différence par rapport à la méthode RGBradford originale est qu’ici une procédure permettant d’obtenir automatiquement des données de couleur avec un plugin ImageJ

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
96-well flat-bottom polystyrene microtiter plates	Jet Biofil, Guangzhou, China	TCP011096	Any flat-bottom microplate compativle with optical reading will suffice.
Bovine serum albumin	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	A2153
Coomassie Brilliant Blue G	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	B0770
Ethyl alcohol
iPhone 11	Apple	MWM02BR/A	Can be substituted with other smartphone equiped with a camera
iPhone 14 Pro	Apple	N/A
Phosphoric acid	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	695017
Redmi Note 9 Pro	XIAOMI	N/A
S22 Ultra	Samsung	N/A
SpectraMax 384 Plus. Microplate reader.	Molecular Devices, San Jose, CA	PLUS 384	Any microplate reader capable of reading at 450 nm and 590 nm will work. This is optional. The method was actually created to dismiss the need of a microplate reader.