Actuellement, il n’existe aucun médicaments qui sont bien établis dans la promotion de la formation hétérochromatine. Ici, nous présentons une méthode simple et efficace pour identifier les composés de petites molécules qui favorisent ce processus. Notre protocole de dépistage fournit un système in vivo simple, peu coûteux et facile à suivre pour l’identification des médicaments favorisant l’hétérochromatine.
L’identification des composés qui favorisent la formation d’hétérochromatine peut mener à la découverte des mécanismes du cancer qui résédent et de la thérapie de cancer. Ce rapport coût-efficacité a été mesuré pour identifier les composés de promotion de l’hétérochromatine dans Drosophila pourrait également être utilisé pour compter les coups de forme car il s’agit d’une mesure préventive à un plus grand bassin cellulaire de dépistage cellulaire. Notre protocole de criblage pourrait également être utile pour les écrans pilotes rapides car ce système Drosophila TranSheet produit un phénotype de couleur des yeux panaché qui est inversement corrélé à la quantité d’hétérochromatine présente à la mouche.
Kenny Dao, un étudiant de premier cycle de notre laboratoire, aidera à démontrer la procédure. Après avoir identifié et préparé une bibliothèque de médicaments pour un dépistage à l’aide d’un solvant approprié, et la concentration désirée, traverser trois mouches mâles avec trois mouches femelles vierges ou plus dans un flacon alimentaire de 25 par 95 millimètres. Avec neuf millimètres de milieu alimentaire standard de Drosophila.
Configurer trois flacons réplique pour chaque médicament. Ajoutez un flacon de commande pour l’écran. Et permettre aux mouches de pondre des œufs pendant deux jours à température ambiante.
Le deuxième jour de la croix, anesthésier les mouches avec une courte rafale de dioxyde de carbone. Et jeter les mouches parent dans une bouteille contenant 70% d’éthanol. Ensuite, diluer chaque composé médicamenteuse du stock initial pour assister à la concentration finale de micro molaire dans 33%DMSO dans l’eau.
Et ajouter 60 microlitres de la drogue, ou le contrôle 33%DMSO seul, sur le dessus de la nourriture à la mouche. Ensuite, confirmez qu’aucune mouche parente n’est présente dans les flacons. Et ajouter la solution médicamentine aux flacons appropriés.
Deux jours après l’émergence des mouches F1, transférer les mouches anesthésiées d’un flacon à la fois sur une plaque poreuse de dissectation avec du dioxyde de carbone filtrant à travers sous le papier filtre. Sous un microscope disséquant, examinez chaque mouche entière, identifiant tous les mâles hétérozygotes par leur absence du phénotype bouclé d’aile bouclée o-dominante. Marquer la couleur des yeux de chaque mâle hétérozygotes sur une échelle de un à cinq.
Avec un score d’un étant attribué à une surface totale dispersée inférieure à 5%rouge. Ajouter un score de deux aux mouches avec une surface totale de 6 à 25% des yeux rouges. A trois à voler avec une surface totale de 26 à 50% d’oeil de tache rouge.
A quatre à voler avec une surface totale de 51 à 75% d’oeil de tache rouge. Et un cinq mouches avec une surface totale de l’œil tache plus de 75% rouge. Calculez ensuite l’indice de couleur moyen de tous les mâles de chaque flacon marqué en triplicate.
Pour confirmer que les composés favorisent en effet la formation d’hétérochromatine, une technique de validation différente, telle que le ballonnement occidental, peut être exécutée. Dans cette expérience représentative, une petite bibliothèque de médicaments à molécule, l’oncologie set 3, qui est composé de 97 médicaments d’oncologie autorisés par la FDA, a été examinée à l’aide de la souche DX1 de Drosophila Melanogaster. Selon l’analyse de dépistage, le méthotrexate, codé comme E7 dans la bibliothèque, a causé la plus grande variation au sein de la souche Dx1.
Suggérant que le méthotrexate pourrait être le médicament le plus prometteur de promotion de l’hétérochromatine pour la thérapie ciblée contre le cancer futur. Pour confirmer davantage que ce composé favorise la transformation hétérochromatine, des données occidentales de tache ont été exécutées. Démontrer la régulation vers le haut de la protéine associée à l’hétérochromatine formatine, la triméthylation H3K9, et la validation des résultats de dépistage.
L’étape critique consiste à marquer la couleur des yeux de chacun des blancs 11-18 DX1 hétérozygotes mouches mâles sur une échelle de un à cinq selon un itinéraire d’étude prédéterminé. Nous pouvons utiliser des taches occidentales ou immunostaining pour confirmer les coups. La découverte de composés soupçonnés de favoriser la formation d’hétérochromatine peut également mener à la découverte du mécanisme génétique IV du développement du cancer et des essais cliniques chez les patients humains.
