Plus de 50% des patients atteints de cancer colorectal développent des métastases hépatiques par dissémination veineuse porte. Et les modèles animaux actuels pour étudier les métastases hépatiques du cancer colorectal restent inadéquats pour récapituler le processus biologique. L’injection veineuse portale de tumoroïdes du cancer colorectal fournit un environnement tumoral riche en fibroblastes qui permet d’étudier la diaphonie entre les cellules cancéreuses métastatiques et la CAS dans les métastases hépatiques du cancer colorectal.
Cette technique fournit une plate-forme pour évaluer l’efficacité des stratégies thérapeutiques ciblant le microenvironnement tumoral des métastases hépatiques du cancer colorectal. Cette méthode est particulièrement utile pour étudier les interactions entre la CAS, les cellules tumorales et le microenvironnement tumoral. Si la pointe de coton n’est pas placée correctement sur le site d’injection, des saignements excessifs peuvent survenir après le retrait de l’aiguille.
Le trempage de la pointe de coton s’arrête une fois le site d’injection localisé. L’identification de la veine porte et la visualisation du site d’injection peuvent être difficiles sans démonstration visuelle de cette procédure. Pour commencer, préparez une zone chirurgicale aseptique à l’aide de rideaux stériles sur un coussin chauffant.
De plus, préparez tous les instruments nécessaires à la chirurgie comme décrit dans le manuscrit du texte. Éclairez ensuite la zone chirurgicale en ajustant la position de la source lumineuse. Ensuite, injectez par voie sous-cutanée 0,1 milligramme par kilogramme de poids corporel de buprénorphine dans une souris pour la gestion chirurgicale de la douleur.
Ensuite, anesthésiez la souris et à l’aide d’un rasoir électrique, rasez le milieu jusqu’au haut de l’abdomen dans une zone éloignée de la zone chirurgicale aseptique pour éviter que les cheveux ne contaminent le site. Nettoyez le site d’incision en alternant avec de la bétadine et de l’éthanol à 80% pour stériliser la zone chirurgicale. Répétez trois fois.
Placez la souris dans la zone chirurgicale sur un coussin chauffant en position couchée avec maintien de l’anesthésie à l’isoflurane. Ensuite, placez un drap chirurgical avec un trou sur son abdomen. Soulevez la peau abdominale avec une pince et faites une incision cutanée de deux à trois centimètres à la ligne médiane avec des ciseaux, en coupant uniquement la peau, en vous assurant que l’incision va du milieu de l’abdomen au processus xiphoïde du sternum et non au-dessus de l’extrémité inférieure du processus xiphoïde.
Ensuite, soulevez complètement la paroi péritonéale avec une pince et faites une incision similaire de deux à trois centimètres au péritoine avec des ciseaux. Évitez de couper l’intestin et le diaphragme. Ensuite, faites tremper une gaze chirurgicale avec une solution saline chaude et placez-la à côté de l’incision à droite du chirurgien.
Retirez doucement le petit et le gros intestin à l’aide d’un coton-tige imbibé d’une solution saline et placez-les sur la gaze trempée dans la solution saline. Couvrez les intestins avec de la gaze humide supplémentaire pour les garder humides. Ensuite, tirez doucement l’intestin vers la droite du chirurgien avec la gaze humide.
Appliquez ensuite une tension douce pour visualiser la veine porte. Si la visualisation de la veine porte est difficile, ajustez doucement la position de l’estomac avec un coton-tige humide. Après avoir doucement canalisé la suspension tumoroïde plusieurs fois pour obtenir une suspension cellulaire homogène, aspirer 100 microlitres de la suspension cellulaire dans une seringue Hamilton ou un millilitre attachée à une aiguille de calibre 33, en évitant les bulles d’air.
Insérez lentement le biseau de l’aiguille dans la veine porte avec une profondeur d’insertion de trois à quatre millimètres et l’angle de l’aiguille presque parallèle à la veine porte. Injectez les cellules tumorales lentement pendant 30 secondes pour éviter l’occlusion de la veine porte. La couleur du foie passe temporairement du rouge au blanc.
Après l’injection, retirez l’aiguille lentement et appliquez immédiatement une légère pression sur le site d’injection avec un coton-tige sec pendant cinq minutes. Retirez le coton-tige et appliquez immédiatement une éponge hémostatique sur le site d’injection. Tenez l’éponge avec un coton-tige ou une pince et appliquez une légère pression pendant cinq minutes de plus.
Après cinq minutes, retirez la pression sur l’éponge hémostatique et confirmez qu’il n’y a pas de saignement du site d’injection. En cas de saignement, effectuez immédiatement une hémostase sous pression avec un coton-tige pendant environ 10 minutes. Appliquez ensuite une éponge hémostatique supplémentaire pendant cinq minutes supplémentaires.
Après avoir confirmé qu’il n’y a pas de saignement, retirez les gazes chirurgicales sur les intestins. Ensuite, à l’aide d’une seringue remplie de cinq millilitres de solution saline, vers les intestins pour empêcher l’adhésion des organes. Replacez doucement les intestins à l’intérieur de la cavité abdominale et suturez le péritoine à l’aide de sutures de polyglactine 4-0.
Ensuite, soulevez les deux côtés de la peau avec une pince, appliquez des agrafeuses cutanées pour fermer l’incision cutanée, en faisant attention à ne pas agrafer l’intestin. Éteignez l’isoflurane, mais maintenez le flux d’oxygène en marche. Surveillez attentivement la souris.
Et lorsque la souris se réveille, placez-la dans une cage vide sur un coussin chauffant. Surveillez la souris jusqu’à ce qu’elle soit consciente et qu’elle se déplace normalement. Quatre heures après la chirurgie, injecter par voie sous-cutanée 0,1 milligramme par kilogramme de buprénorphine.
Surveillez attentivement la souris tous les jours pendant une semaine, en vérifiant les sutures et la cicatrisation des plaies. Sept à 10 jours après la chirurgie, retirez les agrafeuses cutanées à l’aide d’un dissolvant d’agrafeuse. L’hybridation in situ de l’ARN deux semaines après l’injection d’AAV-8 Islr dans la veine caudale a montré une surexpression d’Islr dans le foie.
Deux semaines après l’injection d’AAV mRuby2, des suspensions unicellulaires d’organoïdes du cancer du côlon ont été injectées dans la veine porte de la souris. Macroscopiquement, cette injection de veine porte a entraîné la formation de multiples nodules tumoraux blancs dans le foie. La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine des métastases hépatiques du cancer colorectal induites par l’injection de veine porte a démontré une histopathologie d’un adénocarcinome tubulaire modérément différencié accompagné d’une réaction stromale desmoplastique et d’une nécrose.
Cette histologie riche en stroma a fidèlement récapitulé celle des métastases hépatiques du cancer colorectal humain, ce qui rend ce modèle adapté à la recherche translationnelle sur le stroma tumoral métastatique. L’immunohistochimie de l’actine musculaire alpha lisse a confirmé la présence de fibroblastes associés au cancer, tandis que la coloration rouge Picro-Sirius a démontré une matrice extracellulaire abondante dans le mésenchyme tumoral. L’immunochimie pour EPCAM a révélé que le cancer colorectal métastatique a montré un bourgeonnement tumoral, ce qui est une caractéristique du cancer colorectal de mauvais pronostic.
Et l’indice de marquage Ki67 était d’environ 80%, ce qui indique que la plupart des cellules tumorales sont mitotiquement actives. Les souris ont montré une survie médiane de 57 jours après l’injection de tumoroïde dans la veine porte. Les souris traitées par AAV-8 Islr ont montré une amélioration de la survie des souris, une diminution des signaux d’imagerie in vivo des tumeurs, une augmentation de la signalisation des protéines morphogénétiques osseuses et une diminution des cellules proliférantes Ki67.
Assurez-vous que la pointe de coton est appliquée au bon site d’injection et que l’éponge hémostatique n’est appliquée qu’après l’arrêt du saignement. L’établissement de la tumeur peut être surveillé à l’aide de l’imagerie IVIS pour s’assurer que les cellules tumorales se développent dans le foie.
