הרכבה מודולרית מבוססת CRISPR לבניית ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF

Summary

אנו מציגים פרוטוקול להרכבה מודולרית מבוססת קריספר (CRISPRmass), שיטה לבנייה בתפוקה גבוהה של ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF בדרוזופילה תוך שימוש במשאבי cDNA/ORF הזמינים לציבור. CRISPRmass ניתן ליישם על עריכת ספריות פלסמיד שונות.

Abstract

בדיקת גנומיקה פונקציונלית מציעה גישה רבת עוצמה לתפקוד גנים ומסתמכת על בניית ספריות פלסמיד רחבות גנום. גישות קונבנציונליות לבניית ספריית פלסמיד גוזלות זמן ומייגעות. לכן, פיתחנו לאחרונה שיטה פשוטה ויעילה, הרכבה מודולרית מבוססת קריספר (CRISPRmass), לבניית תפוקה גבוהה של ספריית פלסמיד במעלה הזרם המפעילה רצף דנ"א משלים/מסגרת קריאה פתוחה (UAS-cDNA/ORF). כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור CRISPRmass, תוך לקיחת כדוגמה את הבנייה של ספריית פלסמיד מבוססת GAL4/UAS UAS-cDNA/ORF. הפרוטוקול כולל תגובות מבחנה דו-שלביות מקבילות באופן מאסיבי ולאחריהן טרנספורמציה חיידקית. השלב הראשון הוא לינאריות של פלסמידים קיימים של DNA משלים (cDNA) או מסגרת קריאה פתוחה (ORF) cDNA או ספריית ORF על ידי חיתוך הרצפים הווקטוריים המשותפים במעלה הזרם הסמוכים לקצה 5' של cDNA או ORFs באמצעות CRISPR/Cas9 יחד עם RNA מנחה יחיד (sgRNA), והשלב השני הוא החדרת מודול UAS לתוך פלסמידים cDNA ליניארי או ORF באמצעות תגובה חד שלבית. CRISPRmass מאפשר בנייה פשוטה, מהירה, יעילה וחסכונית של ספריות פלסמיד שונות. ספריית הפלסמיד UAS-cDNA/ORF יכולה לשמש לבדיקת רווח תפקוד בתאים בתרבית ולבניית ספריית UAS-cDNA/ORF טרנסגנית רחבת גנום בדרוזופילה.

Introduction

סריקה גנטית בלתי משוחדת של גנום שלם היא גישה רבת עוצמה לזיהוי גנים המעורבים בתהליך ביולוגי נתון ולהבהרת המנגנון שלו. לכן, הוא נמצא בשימוש נרחב בתחומים שונים של מחקר ביולוגי. כ-60% מהגנים של דרוזופילה נשמרים בבני אדם ^1,2, ו~75% מהגנים של מחלות אנושיות מכילים הומולוגים בדרוזופילה³. בדיקות סקר גנטיות נחלקות בעיקר לשני סוגים: אובדן תפקוד (LOF) ושיפור תפקוד (GOF). המסכים הגנטיים של LOF בדרוזופילה מילאו תפקיד קריטי בהבהרת מנגנונים השולטים כמעט בכל היבט של הביולוגיה. עם זאת, לרוב הגנים של דרוזופילה אין פנוטיפים ברורים של LOF⁴, ולכן, בדיקת GOF היא שיטה חשובה לחקר תפקודם של גנים אלה ^4,5.

המערכת הבינארית GAL4/UAS משמשת בדרך כלל לביטוי גנים ספציפיים לרקמות בדרוזופילה⁶. במערכת זו, הרקמה מבטאת באופן ספציפי מפעיל שעתוק שמרים GAL4 הנקשר לאלמנט המגיב GAL4 (UAS) ובכך מפעיל שעתוק של המרכיבים הגנטיים במורד הזרם (למשל, cDNA ו- ORF)⁶. כדי לבצע מסכי GOF רחבי גנום בדרוזופילה, עלינו לבנות ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF רחבת גנום, ולאחר מכן ספריית UAS-cDNA/ORF טרנסגנית בדרוזופילה.

בניית ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF רחבת גנום בשיטות קונבנציונליות משיבוטים cDNA/ORF הזמינים לציבור היא גוזלת זמן ומייגעת, מכיוון שכל גן דורש עיצובים אינדיבידואליים, כולל תכנון וסינתזה ראשוניים, תגובת שרשרת פולימראז (PCR), טיהור ג'ל, ריצוף, הגבלת עיכול וכן הלאה ^7,8. לכן, בניית ספריית פלסמיד כזו היא צעד מגביל קצב ביצירת ספריית UAS-cDNA/ORF טרנסגנית רחבת גנום בדרוזופילה. לאחרונה, פתרנו בהצלחה בעיה זו על ידי פיתוח שיטה חדשנית, הרכבה מודולרית מבוססת קריספר (CRISPRmass)⁹. הליבה של CRISPRmass היא לתפעל את הרצפים הווקטוריים המשותפים של ספריית פלסמיד באמצעות שילוב של טכנולוגיית עריכת גנים וטכנולוגיית שיבוט חלקה.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור CRISPRmass, הכולל תגובות מבחנה מקבילות מאסיביות בשני שלבים ואחריו טרנספורמציה חיידקית. CRISPRmass היא שיטה פשוטה, מהירה, יעילה וחסכונית, שבאופן עקרוני ניתן להשתמש בה לבניית תפוקה גבוהה של ספריות פלסמיד שונות.

אסטרטגיית CRISPRmass
ההליך של CRISPRmass מתחיל בתגובות מבחנה מקבילות בשני שלבים לפני טרנספורמציית Escherichia coli (E. coli) (איור 1). שלב 1 הוא הפיצול של עמוד השדרה הווקטורי הזהה של פלסמידים cDNA/ORF על ידי Cas9/sgRNA. אתר מחשוף אידיאלי צמוד לקצה 5′ של cDNA/ORF. מוצרי המחשוף אינם חייבים להיות מטוהרים. שלב 2 הוא החדרת מודול כטב"ם ספציפי לווקטור לתוך פלסמידים cDNA/ORF ליניאריים Cas9/sgRNA על ידי הרכבת גיבסון (להלן תגובה חד-שלבית), וכתוצאה מכך פלסמידים של UAS-cDNA/ORF. רצפי הטרמינלים 5′ ו-3′ של מודול כטב"ם חופפים לאלה של פלסמידים cDNA/ORF ליניאריים, ומאפשרים תגובה חד-שלבית.

תוצרי התגובה החד-שלבית נתונים ישירות לטרנספורמציה של E. coli . תיאורטית, רק מושבות UAS-cDNA/ORF הרצויות יכולות לגדול על לוחות לוריא-ברטאני (LB) המכילים אנטיביוטיקה ברירה המתאימה לגן העמידות לאנטיביוטיקה של מודול הכטב"ם. מודול הכטב"ם מורכב ממודול ליבה של כטב"מים, גן עמידות לאנטיביוטיקה הנבדל מזה של פלסמידים cDNA או ORF, ורצפים טרמינליים 5′ ו-3′. מודול ליבה של כטב"ם כולל 10 עותקים של כטב"ם, מקדם מינימלי Hsp70, רצף attB לאינטגרציה גנומית בתיווך phiC31, וסמן טרנספורמציה מיני לבן עבור דרוזופילה⁷.

Protocol

1. קביעת אתר מחשוף Cas9/sgRNA אופטימלי במעלה הזרם של cDNA/ORF

1. הכנת פלסמידים cDNA או ORF עם עמוד שדרה וקטורי זהה
   1. רכוש שיבוטים של cDNA/ORF הזמינים במשאבים ציבוריים, כגון מרכז המשאבים לגנום דרוזופילה (DGRC, https://dgrc.bio.indiana.edu/) Gold Collection^10,11, אוסף הגנים של יונקים עכבריים (MGC, https://genecollections.nci.nih.gov/MGC/), וספריית הביטוי הלנטיוויראלי הרחבה של CCSB האנושי¹². בפרוטוקול זה, אנו לוקחים כדוגמה את שיבוטי cDNA/ORF מבוססי וקטור pOT2, הזמינים באוסף הזהב של DGRC.
   2. חילוץ DNA פלסמיד באמצעות ערכת הכנה קטנה פלסמיד. למדוד את הריכוז של פלסמידים עם ספקטרופוטומטר.
2. תכנון sgRNA
   1. בקר באתר האינטרנט של CHOPCHOP (https://chopchop.cbu.uib.no/). לחץ על הלחצן הדבק יעד ולאחר מכן הזן את רצף ה- DNA המעניין. רצף העניין הוא אזור של 20-100 bp הממוקם בעמוד השדרה הווקטורי pOT2 במעלה הזרם של קצה cDNA/ORF 5'.
   2. בחר את המין Drosophila melanogaster. לחץ על הלחצן חפש אתרי יעד. בחר מועמדים sgRNA עם יעילות חזויה גבוהה מ 80%.
3. הכנת sgRNA
   1. הזמנת אוליגוס מטוהר PAGE, פריימר קדמי (5′ -TAATACGACTCACTATAGG(N)₂₀GTTTTAGAGCTA
      GAAATAG-3′) כאשר (N)₂₀ הוא רצף המטרה של sgRNA, ושל פיגום sgRNA פריימר הפוך sgRNA-REV (5′-AAAAGCACCGACTCGGTGCCACTT-3′).
      הערה: מומלץ להשתמש באוליגונוקלאוטידים באיכות גבוהה מטוהרים PAGE.
   2. הכן תבנית DNA על ידי PCR עבור שעתוק חוץ גופי (IVT) של sgRNA. הגדר תגובת PCR של 100 μL באופן הבא: 5 μL של תבנית pX330 (פלסמיד Addgene 42230, מתנה מפנג ז'אנג; 0.1 ng/μL), 5 μL של פריימר קדמי (10 μM), 5 μL של sgRNA-REV (10 μM), 50 μL של 2x תערובת מאסטר PCR באיכות גבוהה, ו- 35 μL של מים מטופלים דיאתיל פירוקרבונט (DEPC) בצינור PCR.
   3. בצע PCR באמצעות התנאים הבאים thermocycling: 1 מחזור של 98 ° C במשך 30 שניות; 5 מחזורים של 98 °C עבור 10 שניות, 51 °C עבור 10 s, 72 °C עבור 5 שניות; 30 מחזורים של 98 °C עבור 10 שניות, 72 °C עבור 15 שניות; מחזור אחד של 72°C למשך 2 דקות. לדגור תגובות במחזור תרמי.
   4. להפריד מוצרי PCR על ידי אלקטרופורזה ג'ל אגרוז 0.8%. מקטע DNA ~ 120-bp צריך להיות גלוי על הג'ל תחת UV. לטהר את מקטע ה- DNA ~ 120-bp באמצעות ערכת מיצוי ג'ל. מקטע הדנ"א המטוהר משמש כתבנית ל-IVT של sgRNA.
   5. הגדר תגובת IVT של 5 μL באופן הבא: 165 ng של ~ 120-bp מקטע DNA ג'ל מטוהר, 1.65 μL של תערובת חיץ NTP, 0.33 μL של תערובת T7 RNA פולימראז, ומים מטופלים DEPC. לדגור תגובות ב 37 ° C במשך 4 שעות. בצע את ההוראות הידניות של ערכת תמלול חוץ גופית .
   6. יש להוסיף 45 μL של מים שטופלו ב-DEPC למוצר עם תגובת IVT. התייחסו למוצרי תגובת IVT כאל RNA והשתמשו במים שטופלו ב-DEPC כבקרה ריקה. למדוד את הריכוז של sgRNA עם ספקטרופוטומטר. הריכוז של sgRNA מדולל הוא סביב 870 ng/μL.
   7. יש לדלל את מוצר תגובת ה-IVT ל-20 ננוגרם/מיקרוליטר במים שטופלו ב-DEPC. Aliquot ולאחסן sgRNA ישירות ב -80 ° C.
      הערה: לאחר תגובת IVT, הסרת תבנית הדנ"א על ידי עיכול DNase אינה הכרחית למדידת הריכוז המדויק של sgRNA, מכיוון שכמות תבנית הדנ"א נמוכה מ-0.4% מזו של sgRNA ותבנית הדנ"א אינה משפיעה על תגובת CRISPRmass שלאחר מכן. לכן, טיהור sgRNA אינו הכרחי.
4. הערכה של sgRNAs
   1. לעכל פלסמיד cDNA/ORF הנושא עמוד שדרה וקטורי pOT2 עם אנזים הגבלה. להפריד את קטעי ה- DNA המתקבלים על ידי אלקטרופורזה ג'ל agarose 0.8%. לטהר את מצע ה- DNA עם ערכת מיצוי ג'ל.
      הערה: מקטע DNA שנוצר המכיל את רצפי מיקוד sgRNA של עמוד השדרה הווקטורי pOT2 משמש כמצע ה- DNA של Cas9/sgRNAs. אתרי המחשוף של Cas9/sgRNA ממוקמים באופן א-סימטרי במצע הדנ"א, וכך פיצול מצע הדנ"א על ידי Cas9/sgRNA מניב שני מקטעי דנ"א בגדלים שונים, מה שמקל על ההבחנה בינם לבין מצע הדנ"א הלא תקין בתגובת העיכול.
   2. הגדר תגובת מחשוף של 5 μL Cas9 באופן הבא: 0.2 μL של 1.22 μM S. pyogenes Cas9, 0.5 μL של 20 ng/μL sgRNA, 0.015 pmol של מצע DNA, 0.5 μL של 10x Cas9 Buffer, ומים מטופלים DEPC. לדגור תגובות ב 37 ° C במשך 1 שעות.
   3. להפריד את מוצרי המחשוף על ידי אלקטרופורזה ג'ל agarose 0.8%. טען את מצע ה- DNA השלם כבקרה שלילית על מצע ה- DNA המעוכל.
      הערה: כאן, מצע DNA שלם מתייחס למצע DNA שאינו נתון לתגובות עיכול על ידי Cas9/sgRNAs. פיצול מצע הדנ"א על ידי Cas9/sgRNA מניב שני מקטעי דנ"א בגדלים שונים, מה שמקל על ההבחנה בינם לבין מצע הדנ"א הלא תקין בתגובת העיכול.
   4. נתחו דפוסי מחשוף באמצעות מערכת הדמיה דיגיטלית (איור 2). בחר את sgRNA היעיל ביותר עבור ניסויי CRISPRmass הבאים. איור 2 מראה שכל ארבעת ה-sgRNA מפגינים יעילות גבוהה של המחשוף, וניתן להשתמש בהם עבור CRISPRmass. בחר את sgRNA המסומן בקו תחתון עבור הניסויים הבאים.
      הערה: ככל שמצע הדנ"א הפנוי קטן יותר, כך ה-sgRNA יעיל יותר לעיכול Cas9/sgRNA של מצע DNA.

2. בניית מודול כטב"ם

הערה: מודול כטב"ם מורכב מכטב"ם ליבה וכ-20-40 bp של רצפי הטרמינלים 5′ ו-3′ החופפים לקצוות 5′ ו-3′ של אתר המחשוף בעמוד השדרה, בהתאמה (איור 1). רצפי הטרמינל 5′ ו-3′ של מודול המל"ט נקבעים על ידי אתר המחשוף בעמוד השדרה של וקטור pOT2.

1. שכפל את מודול הכטב"ם הספציפי לווקטור pOT2 לאתר EcoRI של וקטור pCR8GW, וכתוצאה מכך pCR8GW-Amp-W-attB-UAS-Hsp70 פלסמיד (קובץ משלים 1). שחרר את מודול הכטב"ם הספציפי לווקטור pOT2 על ידי עיכול פלסמיד pCR8GW-Amp-W-attB-UAS-Hsp70 עם EcoRI ב-37°C למשך שעה אחת.
2. להפריד את מוצרי המחשוף על ידי אלקטרופורזה ג'ל אגרוז 0.7%. טהרו את מודול הכטב"ם 6178-bp באמצעות ערכת מיצוי ג'ל. דללו את מודול הכטב"ם ל-23 ננוגרם/מיקרוליטר לניסויים הבאים. מקטע 6178-bp זה משמש כמודול כטב"ם לבניית פלסמידים מבוססי UAS-cDNA/ORF משיבוטים מבוססי cDNA/ORF מבוססי וקטור pOT2.

3. בנייה בקנה מידה גדול של פלסמידים UAS-cDNA/ORF על ידי CRISPRmass

הערה: CRISPRmass מתוקנן כתגובות מבחנה דו-שלביות מקבילות באופן מאסיבי לפני טרנספורמציית E. coli (איור 1).

1. תגובת מבחנה שלב 1
   1. לבקע את עמוד השדרה הווקטורי הזהה של פלסמידים cDNA/ORF על ידי Cas9/sgRNA. סדרו צינורות 0.2 מ"ל בבלוק קירור אלומיניום על קרח ותייגו את הצינורות בזהירות. הכינו את תערובת המאסטר באופן הבא.
      1. לתגובה יחידה, יש להוסיף 0.16 μL של 1.22 μM S. pyogenes Cas9, 0.4 μL של 20 ng/μL sgRNA, 0.24 μL של 10x Cas9 buffer, 1.2 μL של מים שטופלו ב-DEPC. עבור N תגובות, הוסף (N+1) x 0.16 μL של 1.22 מיקרומטר S. pyogenes Cas9, (N+1) x 0.4 μL של 20 ng/μL sgRNA, (N+1) x 0.24 μL של 10x Cas9 buffer, (N+1) x 1.2 μL של מים שטופלו ב-DEPC.
   2. מערבלים, מערבבים היטב, ומסתחררים. Aliquot 2 μL של תערובת מאסטר לכל צינור. הוסף 0.4 μL של 0.019 מיקרומטר של פלסמיד cDNA/ORF לכל צינור. יש לדגור על תגובות מחשוף בטמפרטורה של 37°C למשך שעה אחת.
      הערה: יש לדלל כל פלסמיד ל-0.019 מיקרומטר במים שטופלו ב-DEPC. אם ריכוז הפלסמיד נמוך מ-0.019 מיקרומטר, יש להוסיף DNA פלסמיד ישירות לתגובת המחשוף. השתמש בצינורות נטולי RNase ובמים שטופלו ב- DEPC. ביצוע שלבים אלה בקנה מידה גדול ייקח מספר שעות. אלא אם כן צוין אחרת, שמור ריאגנטים ותגובות על קרח.
2. תגובת מבחנה שלב 2
   1. הכנס מודול UAS ספציפי לווקטור משלב 2 לתוך פלסמידים cDNA/ORF ליניאריים Cas9 על ידי הרכבת תגובה חד-שלבית. הגדר תגובה של 1.4 μL בצעד אחד עבור כל דגימה. סדרו את צינורות ה-0.2 מ"ל בבלוק קירור מאלומיניום על קרח ותייגו את הצינורות בזהירות.
      1. הכינו את תערובת המאסטר באופן הבא. עבור תגובה יחידה, הוסף 0.07 μL של מודול UAS 0.006 μM ו- 0.7 μL של תערובת מאסטר להרכבה של תגובה חד-שלבית. עבור N תגובות, הוסף (N+1) x 0.07 μL של מודול UAS של 0.006 μM ו- (N+1) x 0.7 μL של תערובת מאסטר להרכבת תגובה חד-שלבית.
   2. מערבלים, מערבבים היטב, ומסתחררים. Aliquot 0.77 μL של תערובת המאסטר לכל צינור. הוסף 0.7 μL של פלסמיד cDNA/ORF ליניארי Cas9 לכל צינור. לדגור תגובות ב 50 ° C במשך 1 שעה.
      הערה: אין צורך בטיהור של מוצרי תגובת הרכבה חד-שלבית. ביצוע שלבים אלה בקנה מידה גדול לוקח כמה שעות. אלא אם כן צוין אחרת, שמור ריאגנטים ותגובות על קרח.
3. הפוך מוצרי תגובת הרכבה חד-שלבית ל-E. coli בקנה מידה גדול.
   1. Prechill 10 μL טיפים ב 4 °C. צינורות Prechill 1.5 מ"ל בבלוק קירור אלומיניום על קרח.
   2. הפשירו תאי E. coli מוכשרים על קרח במשך 5 דקות. Aliquot 10 μL של תאים מוסמכים לכל צינור precooled 1.5 מ"ל.
      הערה: השתמש בתאי E. coli מוכשרים הזמינים מסחרית עם יעילות טרנספורמציה של לפחות 1 x 10⁸ CFU/μg של pUC19 DNA.
   3. יש להוסיף 1 μL של מוצר תגובת הרכבה בצעד אחד ל-10 μL של תאים מתאימים, לערבב בעדינות ולהניחו על קרח למשך 30 דקות.
   4. לדגור את הצינורות באמבט מים 42 מעלות צלזיוס במשך 1 דקות, ולאחר מכן מיד לצנן על קרח במשך 2 דקות.
   5. יש להוסיף 100 μL של SOC בינוני (שחומם מראש ל-37°C) לכל צינור בטמפרטורת החדר, ולדגור באינקובטור רועד (250 סל"ד) ב-37°C למשך שעה אחת.
   6. חממו עד 37 מעלות צלזיוס את לוחות LB המכילים אנטיביוטיקה המתאימה לגן העמידות לאנטיביוטיקה של מודול המל"ט. פזרו תאים על הצלחות ודגרו בטמפרטורה של 37°C למשך הלילה.
      הערה: ביצוע שלבים אלה בקנה מידה גדול אורך מספר שעות. אלא אם כן צוין אחרת, שמור ריאגנטים ותגובות על קרח.
4. אימות פלסמידים מסוג UAS-cDNA/ORF שנבנו על ידי CRISPRmass
   1. בחר מושבה אחת וחסן אותה ב 4.5 מ"ל של מדיום נוזלי LB בתוספת הבחירה המתאימה של אנטיביוטיקה המתאימה לגן עמידות לאנטיביוטיקה של מודול UAS. יש לדגור למשך הלילה ב-37°C תוך רעידות ב-250 סל"ד.
   2. לחלץ DNA פלסמיד באמצעות ערכת הכנת פלסמיד מיני. הגדר תגובת עיכול הגבלה של 20 μL באופן הבא: 300-500 ng/μL של פלסמיד, אנזים הגבלה מתאים, חיץ הגבלת עיכול ומים טהורים במיוחד. לדגור תגובות ב 37 ° C במשך 1 שעות.
   3. הפרידו מקטעי דנ"א באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז ב-0.8% ונתחו באמצעות מערכת הדמיה דיגיטלית (איור 3).

תוצאות

יישמנו את CRISPRmass כדי ליצור ספריית פלסמיד UAS-cDNA/ORF רחבת גנום באמצעות 3402 שיבוטים של cDNA/ORF הנושאים עמוד שדרה וקטורי pOT2 מאוסף הזהב של DGRC. ניתחנו באופן אקראי רק מושבה אחת עבור כל מבנה UAS-cDNA/ORF, וניתוח הגבלות עוקב עם PstI הצביע על כך ש-98.6% ממבני UAS-cDNA/ORF נוצרו בהצלחה⁹. הרציונל לשימוש ב- PstI לניתו...

Discussion

השלבים הקריטיים ביותר של CRISPRmass הם תכנון של sgRNA והערכה של sgRNAs. בחירה של sgRNA יעיל במיוחד עבור Cas9 היא המפתח להצלחה של CRISPRmass. אם מעט מאוד מושבות או בכלל לא נצפות על רוב לוחות LB המכילים אנטיביוטיקה לאחר השינוי של E. coli עם מוצרי הרכבה תגובה בצעד אחד, לבדוק עיכול פלסמיד על ידי אלקטרופורזה ג'ל agarose. אם פ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum Cooling Block	Aikbbio	ADMK-0296	To perform bacterial transformation
DEPC-Treated Water	Invitrogen	AM9906
Gel Extraction Kit	Omega	D2500	To purify DNA from agarose gel
Gel Imaging System	Tanon	2500B
HiScribe T7 Quick High Yield RNA Synthesis Kit	NEB	E2050
NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix	NEB	E2621
Plasmid Mini Kit	Omega	D6943	To isolate plasmid DNA from bacterial cells
Q5 Hot Start High-Fidelity 2x Master Mix	NEB	M0494
S. pyogenes Cas9	GenScript	Z03386
Shaking Incubator	Shanghai Zhichu	ZQLY-180V
T series Multi-Block Thermal Cycler	LongGene	T20	To perform PCR
Trans10 Chemically Competent Cell	TranGen BioTech	CD101
Ultraviolet spectrophotometer	Shimadzu	BioSpec-nano	To measure concentration of DNA or RNA