האמון Wellcome סיפקה תמיכה כספית (פרס VIP כדי JSY ואת 074,128 עמיתי מחקר כדי KLB). המועצה למחקר רפואי מלגת הלימודים כדי RJA Leica_SP2_Stacker, אלגוריתם המשמש לייבוא ​​המריבות על &quot;שחזור&quot; לסדרה, המבוססת על Leica_tiff_sequence, תוסף לקריאה לייקה SP2 המריבות בתוך ImageJ, שפותחה על ידי טוני קולינס בשימוש באישורו שלו. ( <a href="http://www.uhnres.utoronto.ca/facilities/wcif/software/Plugins/LeicaTIFF.html">http://www.uhnres.utoronto.ca/facilities/wcif/software/Plugins/LeicaTIFF.html</a> ) StackReg ו TurboReg, אלגוריתמים המשמשים הנכון עבור התנועה של רקמות, המבוססים על ה &#39;venaz ועמיתיו (1998) 9. Excel_writer.jar נכתב על ידי קורט דה ווס (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/excel-writer.html). JNCT0.08JoVE.ijm, אלגוריתם זיהוי החלקיקים, מבוסס על אלגוריתם שנכתב על ידי המוח KL ומפורט בעבר 5.

חלק 1: הכנת Ca 2 + מדד (אורגון גרין 488 BAPTA, 01:00) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אורגון גרין 488 BAPTA-01:00 מגיע 500 מבחנות μl כמו כמות קטנה (50 מיקרוגרם) של אבקה. הוסף 40 μl Pluronic F-127 הפתרון אבקה, מנערים בעדינות למשך 30 שניות, ולאחר מכן להוסיף 460 PSS μl, וללחוץ בעדינות במשך 30 s. הפתרון הסופי, 10 מיקרומטר אורגון גרין 488 BAPTA-01:00, מספק 4 x 125 aliquots μl. המנעו מחשיפה לאור החנות ב -20 C. </li></ol> חלק 2: Ca 2 + טעינה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את Ca 2 + מדד (אורגון גרין 488 BAPTA, 01:00) מהמקפיא (-20 C) ולאפשר להפשיר בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 1 מ&quot;ל של PSS במבחנה ובמקום באמבט מים. הבועה עם 95% O 2 / 5% CO 2 בקצב של בועה סביב 1 המופיעים לשנייה. Bubbler צריך להיות מאובטח לתוך במבחנה, למשל עם פקק או עם Parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את הרקמה מן החיה, בצלחת פטרי Sylgard מצופה, להסיר בזהירות רקמת חיבור. ללא קשר לסוג האיבר שריר חלק, PSS יש להחליף כל 10 דקות ורקמות יש לשטוף היטב (למשל על ידי החלפת PSS שלוש פעמים) לנתיחה שלאחר מכן. במשך הזרע הזרע: לשקול חיתוך איבר באורך דרכים לייצר גיליון של רקמות. עבור בשלפוחית ​​השתן: לפתוח longitudinally מהצוואר שלפוחית ​​השתן (האחורי) לחלק העליון של הכיפה (הקדמי). הכינו ארבעה פסים, 6 - 8 מ&quot;מ ארוך 1-2 מ&quot;מ רוחב, על פני השטח הגבי של detrusor, חיתוך לכיוון של חבילות השריר הדומיננטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום גזור רקמה ב &#39;טרום התחמם מבעבע &quot;PSS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 125 μl של 10 מיקרומטר אורגון גרין 488 BAPTA-1 בבוקר עד במבחנה ולתת לנער קטן, ביד, לערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קורות חיים מבעבע ולעזוב, מכוסה בנייר כסף. הפעם הוא לוקח רקמות מספיק לקחת את Ca 2 + אינדיקטור משתנה בהתאם לגודל של רקמות עובי שכבת השריר החלק. לדוגמה: 70 דקות (עכבר detrusor, anococcygeus חולדה) עד 120 דקות (detrusor חולדה, מוליכי הזרע העכבר). </li></ol> חלק 3: הכנת &quot;Ca 2 + טעון&quot; רקמה במיקרוסקופ זהירות מצמיד הרקמה הוא הכרחי על מנת לצמצם תנועה ספונטנית של הרקמות (תכונה של הדמיה של תאים שריר חלק מרקמת תמים יחסית) כדי להקל על מיקום האתר מתאים הדמיה (כמו פיסה שטוחה של רקמה ניתן שנסקרו בשני ממדים, במקום שלושה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את הרקמה PSS מבעבע במשך לפחות 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר בצלחת Sylgard מצופה הכנה, מתיחת הרקמה (במעט) כדי ליצור דף שטוח. הימנע משימוש ארוך &quot;סיכות&quot; שעלולים לשרוט את המטרה: להשתמש באורכים קצרים במקום 25-50 מיקרומטר קוטר חוט כסף כמו &quot;סיכות&quot; והכנס בזווית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את צלחת הכנה על הבמה מיקרוסקופ, נזהר על מנת להבטיח כי PSS לא לברוח מהאזור Sylgard מצופה של המנה (כמו זה עשוי להוביל שטח גדול להיות מכוסה PSS, כאשר superfusion מתחיל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המשאבה על מנת superfuse ההכנה עם PSS. קצב של 100 מ&quot;ל לשעה מועסק לעתים קרובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את יחידת החימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את יבוא ו יצוא צינורות בדיקה הטמפרטורה על צלחת ההכנה (הדבקת לכל רצועת מתכת על ידי המגנט על בסיסו). גובה קצה הצינור יצוא יקבע את עומק PSS. תיזהר על מנת להבטיח כי יצוא הוא בעצם הסרת PSS (כפי שהיא עושה לעיתים לא בהתחלה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הטמפרטורה על יחידת החימום כדי להגיע לטמפרטורה הרצויה, למשל 33-35 ג </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הרקמה לאזן לפחות 10 דקות. </li></ol> חלק 4: מבחר האתר תמונה חשיפה תאורה עירור יהיה photobleach מחוון, לכן הימנע משימוש במשך יותר מכמה שניות בכל פעם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מטרה צריכת חשמל נמוכה (10x או 20x) להשתמש epifluorescence, מרגש עם אור כחול, כדי להציג את שריר חלק לזיהוי אזור מתאים לפקח. נסו לבחור באתר מבוסס על: תנועה (שאמור להיות מינימלי) ומספר לתאי שריר חלק בתחום. &quot;מבנים&quot; ברייט עלול לגרום מספר גבוה של &quot;תוצאות חיוביות שגויות&quot; באלגוריתם זיהוי תמונה, כדי להימנע באתרים עם מספר גדול של (למשל) בתאי אפיתל או fibroblasts וביניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבר אל המטרה חשמל גבוה (40X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את הבמה או את הציר האופטי כך תא שריר חלק (ים) שקרים האופקי (כלומר מקביל לציר סריקה מהירה). </li></ol> חלק 5: מיקרוסקופיה confocal הפרטים של איך מיקרוסקופ confocal הוא &quot;להקים&quot; הם ספציפיים לכל סוג המיקרוסקופ, אבלהשיקולים העיקריים הם: מהירות (מינימום של 5 הרץ נדרש רוב Ca 2 + הארעיים); רזולוציה וגודל השדה (שניהם נסחרים-off עם מהירות). חלק פרוטוקול הבאה היא ספציפית מיקרוסקופ הלייקה SP2 confocal זקוף. פרוטוקול טיפוסית: 100 סדרה מסגרת, רכשה ב 5 הרץ (256 x 256 פיקסלים, כ 100 x 100 מיקרומטר.) או 13.5 הרץ (256 x 64 פיקסלים, כ 100 x 25 מיקרומטר.). ראש סריקה להגדיר להעביר דו directionally (על מנת למקסם את מהירות הרכישה) ולרכוש ב 1000 הרץ בכל שורה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את חריר ל &#39;דיסק אוורירי&#39; אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת (488 ננומטר) לייזר הכוח בין 25 ו 35% על AOTF; ערך זה trade-off בין הבהירות photobleaching. (האחרון להיות בעיה מסוימת במהלך הקלטות ארוך.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוכשת שש סדרות בכל אתר, 4-6 אתרים לכל &quot;טיפול&quot;. זה נפוץ לכוון לאותו צג שישה אתרים טרום תרופה (&quot;מלאה&quot; כלומר) ופוסט התרופה, למרות photobleaching משמעותי עלול לגרום הנסיין לסטות הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה חיוני עם Ca 2 + הדמיה כי &quot;שולטת זמן&quot; מבוצעות. </li></ol> חלק 6: הכנה לניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד והתקן J תמונה מתוך: http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html. הורד את הגרסה פלטפורמה ספציפית, ולאחר מכן לעדכן לגרסה העדכנית ביותר על ידי הורדת הקובץ imageJ.jar האחרונים http://rsb.info.nih.gov/ij/upgrade/ij.jar, להחליף את הקובץ הישן. Apple משתמשי מקינטוש: אם זה פועל לאט, ודא שאתה משתמש בגירסה העדכנית של מכונת ג&#39;אווה וירטואלית (JVM) זמין מ Apple (http://www.apple.com/macosx/features/java/). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד Excel_writer.jar מ: http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/excel-writer.html ולהתקין לתוך תוספים [מדריך]&gt; מדריך צנצנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העתק את הקבצים הבאים לתוך ספריית Plugins: Leica_SP2_Stacker.class; JNCT0.08Release.ijm. התקן כל התסריטים הללו באמצעות תוספים [תפריט]&gt; מאקרו&gt; התקן ... פונקציה של ImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו משתמשים SP2 לייקה מיקרוסקופ confocal, התוכנה (לייקה LCS) אשר מייצר כל סדרה כמו &quot;סרט&quot; יחיד לצפייה בתוך התוכנה, אבל חוסך כמו מסגרות בודדים. כדי לשחזר מסגרות לסדרה: (i) יש לוודא כי כל &quot;מסגרות&quot; להיות משוחזר הם בתיקייה אחת (למשל &quot;DataFolder&gt; המריבות&quot;). (Ii) בחירת תוספים [תפריט]&gt; מאקרו&gt; Leica_SP2_Stacker. בחר את ספריית השורש (למשל &quot;DataFolder &#39;). בחר את התיקיה הרצויה מהרשימה הנפתחת (&quot;המריבות /&quot; למשל). בחר את ספריית הפלט או ליצור אחד חדש (&quot;DataFolder&gt; סטאקס&quot; למשל). התסריט אז יהיה לשחזר סדרה של מסגרות בודדים. </li></ol> חלק 7: תיקון לתנועה למרות התנועה של האתר הדמיה עשויה להיות ממוזער עם מצמיד טוב רקמות באופן שווה, מתוח, כמה איברים התכווצויות שריר חלק תערוכה ספונטנית כי לא ניתן לבטל על ידי זהיר מצמיד לבד. כאן אנו מתארים את השימוש של אלגוריתם זמין באופן חופשי כי מיישרת גפרורים או מסגרות בתוך שורה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד &quot;StackReg&quot; (http://bigwww.epfl.ch/thevenaz/stackreg/) ו &#39;TurboReg &quot;(http://bigwww.epfl.ch/thevenaz/turboreg/). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן כל לתוך ספריית Plugins באמצעות תוספים&gt; פקודות מאקרו&gt; התקן ... </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען ערימה להיות מעובד (File&gt; Open ...) ולאחר מכן לעבור למסגרת זה מראה בבירור את תחום עניין. מסגרות אחרות יהיה מיושר מסגרת התייחסות זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספים&gt; סטאקס&gt; StackReg. נסו כל אחד &quot;טרנספורמציות&quot; שונים (תרגום כלומר, גוף קשיח, סיבוב Scaled, המאוחד) כדי לקבוע מה הוא היעיל ביותר. (פרטים נוספים: http://bigwww.epfl.ch/thevenaz/stackreg/) </li></ol> חלק 8: אלגוריתם זיהוי חלקיקים עבור כל &quot;אתר&quot; צילמו, גורמים משתנים המשפיעים על זיהוי של Ca 2 + הארעיים. באמצעות מדידת מאפיינים מסוימים של כל אתר (&#39;פרמטרים החלקיקים &quot;- להלן מפורט), תהליך הזיהוי הקל. לכן עבור כל אתר, אחת מחשבת &quot;סף מופחתים&quot;, &quot;סף יחס &#39;ו&#39; קצה תא הסף&quot;. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספים [תפריט]&gt; מאקרו&gt; התקן ... ובחר &#39;JNCT0.08Release.ijm &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספים [תפריט]&gt; מאקרו&gt; לטעון מחסנית (קיצור: l). בחר סדרה ולחשב פרמטרים החלקיקים: <ol style="list-style:none;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> א סף מופחתים (רקע =) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר ROI מלבני על מה שאתה מאמין להיות &quot;רקע&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד (קיצור: מ &#39;). הערה למטה מתכוון. <ol style="list-style:none;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב חישוב סף עבור יחס </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר מלבניההחזר על ההשקעה באזור שטוח אופטית של התא (ים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד (קיצור: מ &#39;). הערה סטייה ממוצעת ומטה סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור נוספת פעמיים או שאתה יכול לצייר שלוש קופסאות בבת אחת על ידי לחיצה על &quot;שינוי&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב לרשום סף עבור יחס = (1 + SD / אומר) x 32, ממוצע הערכים משלושת משכפל / אתרים. <ol style="list-style:none;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ג קצה סלולריים הסף </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונה&gt; סטאקס&gt; Z פרויקט ... בחר את סוג הקרנה: &quot;ממוצע עוצמת&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונה&gt; התאם סף&gt;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר שחור ולבן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת &quot;תחת&quot; (המחוון העליון) להגביל לרשום את הערך המתאים (מימין המחוון). רק אירועים המתרחשים באזורים שחור ייספרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &#39;איפוס&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את ערימות (קיצור: 2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר רק סדרה אחת בשלב זה, כלומר &quot;הקובץ הראשון &#39;ו&#39; הקובץ האחרון&quot; צריך להיות זהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן ערכים של &#39;הסף מחוסר&#39; סף עבור יחס &#39;ו&#39; קצה תא הסף &quot;. עזוב הגדרות אחרות ב ערכי ברירת המחדל שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האלגוריתם יהיה לייצר חלון כפול חלונית שבה סדרה מעובד מוצג משמאל המקורית בצד ימין. בזהירות לעבור את זה כדי להעריך את מספר תוצאות חיוביות שגויות לבין מקרים שבהם האירועים, נראה בעין, לא זוהו. כדי לקבל זיהוי מדויק יותר של Ca 2 + הארעיים ייתכן שיהיה צורך להתאים במקצת חלק מה &#39;פרמטרים החלקיקים &quot;. אמנם התהליך עשוי להיראות &quot;פגע להחמיץ&quot; קצת על הניסיון הראשון, אחד במהירות מקבל תחושה לגבי מה הפרמטרים הם המפתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל סדרה, האלגוריתם מייצר קובץ Excel פרטים מאפיינים של האירוע זיהה (כגון אזור משרעת, ואת המיקום). &quot;תוצאות חיוביות שגויות&quot; - מזוהה על ידי בדיקת קבצי תמונה כי פלטי אלגוריתם (למשל צעד 8.17) - ניתן להסיר, ביד, זה מקובץ Excel. </li></ol>

<ol>
	<li>Haugland, R. P., Gregory, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indicators+for+Ca2+,+Mg2+,+Zn2++and+other+metal+ions.">Indicators for Ca2+, Mg2+, Zn2+ and other metal ions.</a> Handbook of fluorescent probes and research products. , 771-826 (2002).</li><li>Boland, B., Himpens, B., Gillis, J. M., Casteels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+force+and+Ca2++in+anococcygeal+and+vas+deferens+smooth+muscle+cells+of+the+mouse.">Relationship between force and Ca2+ in anococcygeal and vas deferens smooth muscle cells of the mouse.</a> Pflugers Arch. 421, 43-51 (1992).</li><li>Hashitani, H., Fukuta, H., Takano, H., Klemm, M. F., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+propagation+of+spontaneous+excitation+in+smooth+muscle+of+the+guinea-pig+urinary+bladder.">Origin and propagation of spontaneous excitation in smooth muscle of the guinea-pig urinary bladder.</a> J Physiol. 150, 273-286 (2001).</li><li>Heppner, T. J., Bonev, A. D., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elementary+purinergic+Ca2++transients+evoked+by+nerve+stimulation+in+rat+urinary+bladder+smooth+muscle.">Elementary purinergic Ca2+ transients evoked by nerve stimulation in rat urinary bladder smooth muscle.</a> J. Physiol. 564, 201-212 (2005).</li><li>Brain, K. L., Jackson, V. M., Trout, S. J., Cunnane, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+ATP+release+from+nerve+terminals+elicits+focal+smooth+muscle+Ca2++transients+in+mouse+vas+deferens.">Intermittent ATP release from nerve terminals elicits focal smooth muscle Ca2+ transients in mouse vas deferens.</a> J. Physiol. 541, 849-862 (2002).</li><li>Fleichman, M., Schneider, T., Fetscher, C., Michel, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+underlying+carbachol-induced+contraction+of+rat+urinary+bladder+II.+Protein+kinases.">Signal transduction underlying carbachol-induced contraction of rat urinary bladder II. Protein kinases.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 308, 54-58 (2004).</li><li>Young, J. S., Meng, E., Cunnane, T. C., Brain, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+purinergic+neurotransmission+in+the+mouse+urinary+bladder.">Spontaneous purinergic neurotransmission in the mouse urinary bladder.</a> J. Physiol. 586, 5743-5755 (2008).</li><li>Nelson, M. T., Cheng, H., Rubart, M., Santana, L. F., Bonev, A. D., Knot, H. J., Lederer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relaxation+of+arterial+smooth+muscle+by+calcium+sparks.">Relaxation of arterial smooth muscle by calcium sparks.</a> Science. 270, 633-637 (1995).</li><li>Th&#233;venaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Trans. Image Process. 7, 27-41 (1998).</li></ol>

נעשו מאמצים לצמצם את מספר בעלי החיים המשמשים והסבל שלהם; כל הניסויים בוצעו בהתאם בעלי חיים בבריטניה (הליכים מדעיים) Act 1986 ואת הקהילה האירופית Council Directive 86/09/EEC.

הבחירה של פלורסנט Ca 2 + אינדיקטור אורגון גרין 488 BAPTA-01:00 נבחר Ca 2 + אינדיקטור כי (i) הוא בהיר לעומת אינדיקטורים אחרים (למשל Fluo-4 ו הירוק סידן) 1 (ii) הוא רגיש לשינויים פיזיולוגיים ריכוז Ca 2 + עם ד K בסדר גודל דומה 1 אל תאיים Ca 2 + בריכוז [Ca 2 +] i (למשל של מוליכי הזרע 2) (iii) המון תאים רבים שריר חלק, מה שמאפשר לתא השריר החלק צימוד להיות במעקב. עם זאת, אורגון גרין 488 BAPTA-01:00 הוא לא ratioable Ca 2 + אינדיקטור, וככזה לא יכול בקלות לשמש כדי לקבוע המוחלט [Ca 2 +] אני. יתר על כן, היא עשויה גם חיץ Ca 2 + אם בריכוזים גבוהים הופך רווי שינויים משרעת גבוהה [Ca 2 +] אני. עיכוב של contractility ספונטני Contractility ספונטנית של איברים שריר חלק עשוי להיות מופחת פרמקולוגית, כגון על ידי חסימת התנועה של Ca 2 + דרך סוג L-Ca 2 + ערוצי (למשל על ידי: nifedipine 3; diltiazem 4). שים לב כי תרופות אלו יהיה לצמצם במידה ניכרת את המשרעת של כל תא Ca 2 + גלי / הארעיים. התכווצות של הזרע הזרע נובע משילוב של עצבית purinergic בעיקר noradrenergic. מיקוד Ca 2 + הארעיים ברקמה זו, עם זאת, רגישות המצור קולטן noradrenergic (למשל α 1 adrenoceptor, על ידי prazosin 5), כך התנועה עשוי להיות מופחת מבלי להשפיע על מוקדי Ca 2 + הארעיים. לחילופין, ניתן למנוע התכווצות &#39;במורד הזרם&#39; דרך עיכוב של שרירן למשל שרשרת אור קינאז ידי wortmannin 6. מסקנות ניטור Ca 2 + הקרינה בבית submicron רזולוציה היא טכניקה רבת עוצמה כדי לחקור את הפוסט junctional ההשפעות של שחרור הנוירוטרנסמיטר 5,7 ו שחרורו של Ca 2 + מחנויות פנימיים (למשל &quot;ניצוצות&quot; 8). הניתוח של Ca 2 + הארעיים באמצעות מתודולוגיה המפורטים כאן היא חסכונית בהשוואה, זמין מסחרית חבילות ניתוח התמונה ומאפשר תפורים אישית באמצעות ניתוח בכתב plugins Java עבור ImageJ.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Oregon Green 488 BAPTA-1 AM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>O6807</td>
<td>10 x 50 &mu;g</td>
</tr>
<tr>
<td>Pluronic F-127 solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P3000MP</td>
<td>20% solution in DMSO</td>
</tr>
<tr>
<td>Leica SP2 upright confocal microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Air table (&#x2018;vibration isolated workstation&#x2019;)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Newport</td>
<td>M-VW-3046-OPT-012140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 elastomer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

focal ca2+ transient detection in smooth muscle

Ca 2 + הדמיה של שריר חלק מספק תובנה מנגנוני הסלולר כי לא עלולה לגרום לשינויים של פוטנציאל הממברנה, כמו שחרורו של Ca 2 + מחנויות פנימי, ומאפשר מספר תאים בו זמנית כדי להיות במעקב על מנת להעריך, למשל, צימוד סינסיציאלי רקמות. Subcellular Ca 2 + הארעיים נפוצים שריר חלק, אך קשה למדוד במדויק בגלל הבעיות שנגרמות על ידי התרחשות סטוכסטיים שלהם, על פני שדה רחב של נוף לעתים קרובות, באיבר שהוא נוטה להתכווץ. כדי להתגבר על בעיה זו, פיתחנו סדרה של פרוטוקולים הדמיה רוטינות ניתוח לרכוש ולאחר מכן לנתח, באופן אוטומטי, את תדירות, מיקום משרעת של אירועים כאלה. בעוד גישה זו ניתן להחיל בהקשרים אחרים, העבודה שלנו כרוך זיהוי של המקומיים purinergic Ca 2 + הארעיים לאיתור לשחרר משדר עם רזולוציה submicron. ה-ATP משוחרר כמו cotransmitter מן העצבים האוטונומית, שם הוא נקשר לקולטנים P2X1 על השריר החלק של detrusor ואת הזרע הזרע. Ca 2 + מזין את השרירים החלקים, וכתוצאה מכך purinergic neuroeffector Ca 2 + הארעיים (NCTs). מוקד Ca 2 + הארעיים לאפשר ניטור אופטי של שחרור הנוירוטרנסמיטר באופן יש יתרונות רבים על electrophysiology. מלבד ההחלטה מרחבית השתפרו מאוד, הקלטה אופטי יש יתרון נוסף המאפשר הקלטה של ​​שחרור משדר להבדיל מאתרים רבים בו זמנית. יתר על כן, מטוס אופטי של המוקד הוא קל יותר לתחזק או לתקן במהלך סדרת הקלטה ארוך יותר הוא מחדש של microelectrode חד תאיים. לסיכום, שיטת הדמיה של Ca 2 + הקרינה מתוארת בו פרטים הכנת הרקמה, ורכישת וניתוח של נתונים. אנו המתאר את השימוש של מספר תסריטים לניתוח כזה Ca 2 + הארעיים.

Watch this Scientific Journal Video about Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle at JoVE.com

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

פרטים שיטות ברזולוציה גבוהה Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; הדמיה של שריר חלק בתוך איברים מבודדים, לרבות: הכנת הרכישה, תמונה רקמות וניתוח נתונים.

מיקוד Ca 2 + איתור חלוף של שריר חלק

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

focal-ca2-transient-detection-in-smooth-muscle

Research

JoVE Journal

Biology

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

11.2K Views.  University of Oxford. פרטים שיטות ברזולוציה גבוהה Ca 2 + הדמיה של שריר חלק בתוך איברים מבודדים, לרבות: הכנת הרכישה, תמונה רקמות וניתוח נתונים.

Video: Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded and their collection does not imply any added risk to the newborn or mother s health. Moreover no ethical concerns are raised. The UC is composed by one vein and two arteries from which both endothelial cells (ECs) 1 and smooth muscle cells (SMCs) 2, two of the main cellular components of blood vessels, can be isolated. In this project the SMCs were obtained after enzymatic treatment of the UC arteries accordingly the experimental procedure previously described by Jaffe et al 3. After cell isolation they were kept in t-flash with DMEM-F12 supplemented with 5% of fetal bovine serum and were cultured for several passages. Cells maintained their morphological and other phenotypic characteristics in the different generations. The aim of this study was to isolate smooth muscle cells in order to use them as models for future assays with constrictor drugs, isolate and structurally characterize L-type calcium channels, to study cellular and molecular aspects of the vascular function 4 and to use them in tissue engineering.

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

The umbilical cords are used to isolate smooth muscle cells by different ways. In this work we used the enzymatic treatment to isolated smooth muscle cells.

בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in live cells. Here we describe the method used in our laboratories for loading suspensions of human sperm with Ca2+-reporting dyes and measuring the fluorescence signal during physiological stimulation. Motile cells are isolated by direct swim-up and incubated under capacitating conditions for 0-24 h, depending upon the experiment. The cell-permeant AM (acetoxy methyl ester) ester form of the Ca2+-reporting dye is then added to a cell aliquot and a period of 1 h is allowed for loading of the dye into the cytoplasm. We use visible wavelength dyes to minimize photo-damage to the cells, but this means that ratiometric recording is not possible. Advantages and disadvantages of this approach are discussed. During the loading period cells are introduced into an imaging chamber and allowed to adhere to a poly-D-lysine coated coverslip. At the end of the loading period excess dye and loose cells are removed by connection of the chamber to the perfusion apparatus. The chamber is perfused continuously, stimuli and modified salines are then added to the perfusion header. Experiments are recorded by time-lapse acquisition of fluorescence images and analyzed in detail offline, by manually drawing regions of interest. Data are normalized to pre-stimulus levels such that, for each cell (or part of a cell), a graph showing the Ca2+ response as % change in fluorescence is obtained.

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Stimulus-evoked [Ca2+]i signals of individual human sperm are assessed. Motile cells are loaded with Ca2+-sensitive fluorescent dye (AM-ester method) and immobilised in a perfusable chamber. Cells are imaged by time-lapse fluorescence microscopy and stimulated via the perfusing medium. Responses of single cells (or regions) are analysed offline using Excel.

טכניקות הדמיה Ca 2 + איתות זרע אנושי

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Contraction or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries determines the artery diameter and thereby controls flow of blood through the vessel and contributes to systemic blood pressure. The contraction process is regulated primarily by cytosolic calcium concentration ([Ca2+]cyt), which is in turn controlled by a variety of ion transporters and channels. Ion channels are common intermediates in signal transduction pathways activated by vasoactive hormones to effect vasoconstriction or vasodilation. And ion channels are often targeted by therapeutic agents either intentionally (e.g. calcium channel blockers used to induce vasodilation and lower blood pressure) or unintentionally (e.g. to induce unwanted cardiovascular side effects).
Kv7 (KCNQ) voltage-activated potassium channels have recently been implicated as important physiological and therapeutic targets for regulation of smooth muscle contraction. To elucidate the specific roles of Kv7 channels in both physiological signal transduction and in the actions of therapeutic agents, we need to study how their activity is modulated at the cellular level as well as evaluate their contribution in the context of the intact artery.
The rat mesenteric arteries provide a useful model system. The arteries can be easily dissected, cleaned of connective tissue, and used to prepare isolated arterial myocytes for patch clamp electrophysiology, or cannulated and pressurized for measurements of vasoconstrictor/vasodilator responses under relatively physiological conditions. Here we describe the methods used for both types of measurements and provide some examples of how the experimental design can be integrated to provide a clearer understanding of the roles of these ion channels in the regulation of vascular tone.

Measurements of Kv7 (KCNQ) potassium channel activity in isolated arterial myocytes (using patch clamp electrophysiological techniques) in parallel with measurements of constrictor/dilator responses (using pressure myography) can reveal important information about the roles of Kv7 channels in vascular smooth muscle physiology and pharmacology.

היכרות עם פונקצית עורקי שריר חלק Kv7 אשלגן ערוץ באמצעות אלקטרופיזיולוגיה קלאמפ תיקון וMyography לחץ

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling pathways involved in vascular smooth muscle contraction in PASMC from fetal sheep. While sheep make an excellent model of term pulmonary hypertension, they are very expensive and lack the advantage of genetic manipulation found in mice. Conversely, the inability to isolate PASMC from mice was a significant limitation of that system. Here we described the isolation of primary cultures of mouse PASMC from P7, P14, and P21 mice using a variation of the previously described technique of Marshall et al.26 that was previously used to isolate rat PASMC. These murine PASMC represent a novel tool for the study of signaling pathways in the neonatal period. Briefly, a slurry of 0.5% (w/v) agarose + 0.5% iron particles in M199 media is infused into the pulmonary vascular bed via the right ventricle (RV). The iron particles are 0.2 &#956;M in diameter and cannot pass through the pulmonary capillary bed. Thus, the iron lodges in the small pulmonary arteries (PA). The lungs are inflated with agarose, removed and dissociated. The iron-containing vessels are pulled down with a magnet. After collagenase (80 U/ml) treatment and further dissociation, the vessels are put into a tissue culture dish in M199 media containing 20% fetal bovine serum (FBS), and antibiotics (M199 complete media) to allow cell migration onto the culture dish. This initial plate of cells is a 50-50 mixture of fibroblasts and PASMC. Thus, the pull down procedure is repeated multiple times to achieve a more pure PASMC population and remove any residual iron. Smooth muscle cell identity is confirmed by immunostaining for smooth muscle myosin and desmin.

We have developed a novel and reproducible technique to isolate primary cultures of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) from mice as young as P7, thereby allowing better study of the signaling pathways involved in neonatal smooth muscle cell contraction and relaxation.

בידוד של תאי שריר חלקים עורק ריאה מעכברים ילודים

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Automated Analysis of Dynamic Ca2+ Signals in Image Sequences

Intracellular Ca2+ signals are commonly studied with fluorescent Ca2+ indicator dyes and microscopy techniques. However, quantitative analysis of Ca2+ imaging data is time consuming and subject to bias. Automated signal analysis algorithms based on region of interest (ROI) detection have been implemented for one-dimensional line scan measurements, but there is no current algorithm which integrates optimized identification and analysis of ROIs in two-dimensional image sequences. Here an algorithm for rapid acquisition and analysis of ROIs in image sequences is described. It utilizes ellipses fit to noise filtered signals in order to determine optimal ROI placement, and computes Ca2+ signal parameters of amplitude, duration and spatial spread. This algorithm was implemented as a freely available plugin for ImageJ (NIH) software. Together with analysis scripts written for the open source statistical processing software R, this approach provides a high-capacity pipeline for performing quick statistical analysis of experimental output. The authors suggest that use of this analysis protocol will lead to a more complete and unbiased characterization of physiologic Ca2+ signaling.

Automated Analysis of Dynamic Ca2+ Signals in Image Sequences

Here a novel region of interest analysis protocol based on sorting best-fit ellipses assigned to regions of positive signal within two-dimensional time lapse image sequences is demonstrated. This algorithm may enable investigators to comprehensively analyze physiological Ca2+ signals with minimal user input and bias.

ניתוח האוטומטי של דינמי Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; אותות ברצפי תמונות

Intracellular Ca2+ signals are commonly studied with fluorescent Ca2+ indicator dyes and microscopy techniques. However, quantitative analysis of Ca2+ ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues. While this technique has been implemented for over 100 years, the versatility, simplicity and reproducibility of this assay helps it to remain an indispensable tool for pharmacologists and physiologists alike. Tissue bath systems are available in a wide array of shapes and sizes, allowing a scientist to evaluate samples as small as murine mesenteric arteries and as large as porcine ileum &#8211; if not larger. Central to the isolated tissue bath assay is the ability to measure concentration-dependent changes to isometric contraction, and how the efficacy and potency of contractile agonists can be manipulated by increasing concentrations of antagonists or inhibitors. Even though the general principles remain relatively similar, recent technological advances allow even more versatility to the tissue bath assay by incorporating computer-based data recording and analysis software. This video will demonstrate the function of the isolated tissue bath to measure the isometric contraction of an isolated smooth muscle (in this case rat thoracic aorta rings), and share the types of knowledge that can be created with this technique. Included are detailed descriptions of aortic tissue dissection and preparation, placement of aortic rings in the tissue bath and proper tissue equilibration prior to experimentation, tests of tissue viability, experimental design and implementation, and data quantitation. Aorta will be connected to isometric force transducers, the data from which will be captured using a commercially available analog-to-digital converter and bridge amplifier specifically designed for use in these experiments. The accompanying software to this system will be used to visualize the experiment and analyze captured data.

This protocol describes the measurement of isometric contraction in an isolated smooth muscle preparation, using an isolated tissue bath system and computer-based data acquisition.

מדידה של תפקוד של שריר חלק ברקמות מבודדות אמבט-היישומים למחקר פרמקולוגיה

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on changes in intracellular calcium ([Ca2+]i) and nitric oxide (NO). In order to understand how [Ca2+]i, NO and downstream molecules are handled by a blood vessel in response to vasoconstrictors and vasodilators, we developed a novel technique that applies calcium-labeling (or NO-labeling) dyes with two photon microscopy to measure calcium handling (or NO production) in isolated blood vessels. Described here is a detailed step-by-step procedure that demonstrates how to isolate an aorta from a rat, label calcium or NO within the endothelial or smooth muscle cells, and image calcium transients (or NO production) using a two photon microscope following physiological or pharmacological stimuli. The benefits of using the method are multi-fold: 1) it is possible to simultaneously measure calcium transients in both endothelial cells and smooth muscle cells in response to different stimuli; 2) it allows one to image endothelial cells and smooth muscle cells in their native setting; 3) this method is very sensitive to intracellular calcium or NO changes and generates high resolution images for precise measurements; and 4) described approach can be applied to the measurement of other molecules, such as reactive oxygen species. In summary, application of two photon laser emission microscopy to monitor calcium transients and NO production in the endothelial and smooth muscle cells of an isolated blood vessel has provided high quality quantitative data and promoted our understanding of the mechanisms regulating vascular function.

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Vascular cell functiondepends on activity of intracellular messengers. Described here is an ex vivo two photon imaging method that allows the measurement of intracellular calcium and nitric oxide levels in response to physiological and pharmacological stimuli in individual endothelial and smooth muscle cells of an isolated aorta.

הדמיה שני פוטונים של תאיים Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; תאי טיפול ותחמוצת חנקן ייצור בהאנדותל ושריר חלק של עכברוש אב העורקים מבודדים

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall health. A significant portion of intracellular Ca2+ content is found within the SR stores in VSMCs. As the only intracellular organelle with a close association to the surrounding extracellular space through plasma membrane-SR junctions, the SR can be considered to constitute the first line of response to any irregularity in Ca2+ transients, or stress experienced by the cell. Among its many functions, one of the most important is its role in the transmission of Ca2+-regulated signals throughout the cell to induce further cell-wide reactions downstream. The more common use of cytoplasmic Ca2+ indicators in this regard is overall insufficient for research into the highly dynamic changes to the intraluminal SR Ca2+ store that have yet to be fully characterized. Here, we provide a detailed protocol for the direct and clear measurement of luminal SR Ca2+. This tool is useful for investigation into the nuanced changes in SR Ca2+ that have significant subsequent effects on the normal function and health of the cell. Fluctuations in SR Ca2+ content specifically can provide us with a significant amount of information pertaining to cellular responses to disease or stress conditions experienced by the cell. In this method, a modified version of a SR-targeted Ca2+ indicator, D1SR, is used to detect Ca2+ fluctuations in response to the introduction of agents to cultured rat aortic smooth muscle cells (SMCs). Following incubation with the D1SR indicator, confocal fluorescence microscopy and fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based imaging are used to directly observe changes to intraluminal SR Ca2+ levels under control conditions and with the addition of agonist agents that function to induce intracellular Ca2+ movement.

Currently, most available calcium indicators are used to quantify cytoplasmic calcium transients as indirect measures of calcium released from the sarcoplasmic reticulum in cultured smooth muscle cells. This protocol describes the use of a specific FRET-based indicator that allows direct measurement of calcium signals within the sarcoplasmic reticulum lumen.

מדידת תנודות סידן בתוך הרטיקולום sarcoplasmic של בתאי שריר חלק בתרבית באמצעות מבוססי סריג הדמיה Confocal

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

בידוד של תאי שריר חלק Murine כלילית דם

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation. Common murine models study small vessels such as the carotid and femoral arteries. Herein we describe an in vivo system in which both VSMC proliferation and endothelial barrier function can be simultaneously assessed in a large vessel. We studied the infrarenal aortic response to injury in C57BL/6 mice. The aorta was injured from the left renal vein to the aortic bifurcation by 30 transmural crushes of 5-seconds duration with a cotton-tipped applicator. Morphological changes were assessed with conventional histology. Aorta wall thickness was measured from the luminal surface to the adventitia. EdU integration and counter staining with DAPI and alpha-actin was used to demonstrate VSMC proliferation. Activation of ERK1/2, a known moderator of intimal hyperplasia formation, was determined by Western Blot analysis. The effect of inflammation was determined by immunohistochemistry for B-cells, T-cells, and macrophages. En face sections of endothelium were visualized with scanning electron microscopy (SEM). Endothelial barrier function was determined with Evans Blue staining. Transmural injury resulted in aortic wall thickening. This injury induced VSMC proliferation, most prominently at 3 days after injury, and early activation of ERK1/2 and decreased p27kip1 expression. Injury did not result in increased B-cells, T-cells, or macrophages infiltration in the vessel wall. Injury caused partial endothelial cell denudation and loss of cell-cell contact. Injury resulted in a significant loss of endothelial barrier function, which returned to baseline after seven days. The murine transmural blunt aortic injury model provides an efficient system to simultaneously study both VSMC proliferation and endothelial barrier function in a large vessel.

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Restenosis following cardiovascular procedures (bypass surgery, angioplasty, or stenting) is a significant problem reducing the durability of these procedures. An ideal therapy would inhibit smooth muscle cell (VSMC) proliferation while promoting regeneration of the endothelium. We describe a model for simultaneous assessment of VSMC proliferation and endothelial function in vivo.

Murine אבי העורקים למחוץ פגיעה: יעיל<em&gt; בויבו</em&gt; מודל של תאים שרירים חלקה תפוצת ו אנדותל פונקציה

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...