שיטה זו יכולה לשמש עבור ניתוח של לבלב פורצ'ין המכיל חיבור, התריסוריות, ואונות טחול ובסופו של דבר decellularization באמצעות זלוב של חומרי ניקוי בטמפרטורות קרות. למרות שיטה זו של דקלולריזציה מספק תובנה לתוך הלבלב החזירי, זה עשוי להיות מיושם גם על הלבלב מבעלי חיים גדולים אחרים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מקלה על אחזור שלם של איבר מסובך, כגון הלבלב, עבור יישומים נוספים להנדסת רקמות.
בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו, הם יתקשו כי ניתוח של הלבלב שלם תוך זיהוי ו קשירה של כל כלי הדם שמסביב דורש הרבה תרגול לשלוט. לפני תחילת ההליך, השתמש בצינור סיליקון אחד של שלושה על חמישה מילימטרים כדי לחבר את מיכל הדטרגנט למשאבה ההיסטנטית וצינור סיליקון שני של שלושה על חמישה מילימטרים כדי לחבר את המשאבה ההיסטנטית לתא האיברים באמצעות הדגסר. חבר לולר זכר לקצה החופשי של הצינור השני, ולהשתמש שלישי שלושה על חמישה מילימטר צינור סיליקון לחבר את תא האיברים למיכל איסוף חומר ניקוי באמצעות המשאבה peristaltic.
לבסוף, לחבר פיפטה שני מילימטר ללא חגורה לקצוות החופשיים של הצינורות במיכל הדטרגנט ואת מיכל איסוף חומר הניקוי. לאחר מכן, מניחים את מערך ההדקה בארבע מעלות צלזיוס. כדי לקצור את הלבלב, מניחים חזיר נקבה בעל הפריניזציה של 45 ק"ג על שולחן ניתוח בתצורת העל-חלל, ולהשתמש באזמל כדי לבצע חתך של 40 ס"מ בקו האמצע מתהליך השיפויד לעצם הערווה כדי לחשוף את איברי הבטן.
לאחר זיהוי האונות הטחול, התריסיון והחיבור, אתרו את האפיפיורות התריסורית העיקרית, ולהשתמש בשני תפרים בודדים כדי לקשר בעל פה את התריסיון מהאתר. Ligate הוושט הנחות עם תפרים נוספים, לחתוך בין הקשירה עם מספריים כדי להקל על הסרת הבטן. הפרד את רקמות החיבור מהמעי הגס כדי להגיע למעי הדק, והפרד את רקמת החיבור של המעי הגס המתחברת לאונה הטחולה של הלבלב.
המעי הדק מחובר ללבלב על ידי רקמת חיבור על האונה הטחול, אלא גם מקיף את הלבלב. אתה צריך בזהירות לעקוב אחר נתיב המעי כדי להתיר ולהפריד את רקמת החיבור בין המעי ללבלב. לאחר קשירה העורקים, להסיר את המעי הגס מהמעי הדק.
זהה את הוריד הקסנטרי הנחות, את עץ העורק הקסנטרי הנחות, וצרף את כלי הדם בתפר אחד ללבלב וחתוך במספריים. Ligate את העורק הטחול ואת וריד יחד hilum, קרוב הטחול, לחתוך distally עם מספריים כדי להסיר את הטחול. עקבו אחר התריסירה עד שהתריסריונים ואונות החיבור ינוקו, וקשרו את התריסירה בסוף עם שני תפרים נפרדים.
החלק של התריסום כי הוא במגע הדוק עם החיבור ואת האונות התריסוריות מוסר עם הלבלב, כמו קשירה של כל כלי הדם הקטנים בין שני האיברים קשה מדי. לאחר ניתוח וריד הפורטל, יש ללקט את הכלי בתפר אחד כדי למנוע דליפת דם מהכבד, ול לנתח וללקט את צינור המרה ואת עורק הכבד עם שני תפרים. לאחר מכן, לחתוך וריד פורטל, עורק בהפטרה, צינור מרה עם מספריים.
אתר את האב העורקים מתחת לווריד הכליה, ו לנתח את האב העורקים בכיוון הגולגולתי מן השריר ואת רקמת החיבור עד הכלי מגיע הלבלב. עכשיו, בעדינות להפוך את הלבלב מעל, ול לנתח את העורקים, שמירה על העורק mesenteric מעולה ואת גזע הצליאק שלם. חותכים את גולגולת העורקים לתא המטען של הצליאק, ובוטה לנתח את הרקמה שמסביב הנותרת כדי לאפשר קציר של הלבלב.
לאחר מכן, השתמש במזרק 50 מיליליטר המחובר לקאנולה עורקית של ארבעה מילימטרים כדי לשטוף את האיבר דרך העורקים עם פתרון שני עד האיבר כולו הוא חדור או עד האיבר כולו הופך קר. מניחים את הפתרון שני לבלב מנוון על מגש מתכת על קרח, עם aorta פונה כלפי מעלה, ולהשתמש מספריים לחתוך את התפרים מן התריסום. השתמש פיפטה 25 מיליליטר כדי לשטוף את התריסום עם 50 עד 150 מיליליטר של מים אולטרה חום, ולהשנות מחדש את הרקמה עם תפרים טריים.
Ligate קצה אחד של העורקים וכל הענפים, למעט העורק mesenteric מעולה גזע הצליאק, כדי למנוע דליפה, ולהכניס צינורית עורקים ארבעה מילימטר לתוך הקצה השני של העורקים. לאחר מכן, מניחים את הלבלב בתא האיברים, ולחבר את ה cannula בלבלב ל Luer זכר. לאחר מכן, לפנק את הלבלב עם פתרון שלוש במשך שעה אחת ב 20 מיליליטר לדקה, ולהקפיא את הלבלב כפול מנוון במינוס 20 מעלות צלזיוס בתתא ארבע עד תחילת decellularization.
ביום תחילת הדפלולריזציה, מפשירים את הלבלב בארבע מעלות צלזיוס, ומציבים את הלבלב המופשר בתא האיברים הדפלולריזציה. חבר את צינור המשרתת לאורטה של הלבלב, ולשטוף את הלבלב עם פתרון שלוש ב 20 מיליליטר לדקה לילה בארבע מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, תפזר כל פתרון שנותר בתא האיברים, ותתפלל בלבלב במשך 30 דקות ב-20 מיליליטר לדקה בפתרון חמש בארבע מעלות צלזיוס.
בסוף הפתרון חמש חליטות, לפנק את הלבלב במשך שמונה שעות ב 20 מיליליטר לדקה בתתכנון שש וארבע מעלות צלזיוס, ואחריו לשטוף 96 שעות בתתכנון טרי חמש ב 20 מיליליטר לדקה וארבע מעלות צלזיוס. החלף את הכביסה עם 500 מיליליטר של DPBS בתוספת סידן ומגנזיום במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, ואחריו חליטה עם 250 מיליליטר של פתרון שבע במשך ארבע שעות ב 20 מיליליטר לדקה ו 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, לשטוף את האיבר עוד 120 שעות עם פתרון טרי חמש ב 20 מיליליטר לדקה וארבע מעלות צלזיוס, ולאחסן את האיבר בתתיק שמונה.
כאן, ניתן לראות את המורפולוגיה הגולמית של לבלב רגיל, המופיע ורוד בהיר ומכיל טחול, חיבור ואונות התריסוריות. לאחר דקלולריזציה, הצבע הוורוד אובד, והלבלב המעובד נראה לבן חיוור בצבע. בלבלב רגיל, גרעינים כחולים רבים ניכרים על ידי כתמי H ו- E, ואילו בלבלב דקלולרי הגרעינים כבר לא ניתן לדמיין, המאשר את אובדנם.
הלבלב הפורצ'ין המבודד שלם, בעקבות הליך זה, הוא יאפשר זלוש מלא ודקלולריזציה מוצלחת תוך שמירה על המבנה וגם מאפשר כמה חלבוני מטריצה חוץ תאית להתקבל. הלבלב המפורק יכול לשמש לפיתוח אסטרטגיות מדקלולריזציה של איברים שלמים במערכות bioreactor עם סוגי תאים רלוונטיים. לאחר recellularization עם תאי גזע הנמען, הלבלב מהונדס רקמה עשוי לשמש עבור יישומים קליניים ובדיקות סמים.
אל תשכח כי עבודה עם טריטון X-100 ו SDC יכול להיות מסוכן מאוד, כי אמצעי זהירות, כגון ללבוש כפפות והכנת הפתרונות תחת מכסה המנוע אדים, תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.
