Diese Methode kann für die Zerlegung von Schweinepankreas verwendet werden, die Verbindung, Zwölffingerdarm- und Milzlappen enthalten, und schließlich zur Dezellularisierung durch die Perfusion von Reinigungsmitteln bei kalten Temperaturen. Obwohl diese Methode der Dezellularisierung Einblicke in die Schweinebauchspeicheldrüse bietet, kann sie auch auf Pankreata von anderen großen Tieren angewendet werden. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie das intakte Abrufen eines komplizierten Organs, wie der Bauchspeicheldrüse, für weitere Gewebetechnik-Anwendungen erleichtert.
Im Allgemeinen, Personen neu zu dieser Methode, werden sie kämpfen, weil Die Sezieren der intakten Bauchspeicheldrüse während der Identifizierung und Ligaung aller umliegenden Blutgefäße erfordert eine Menge Übung zu meistern. Bevor Sie mit dem Verfahren beginnen, verbinden Sie den Waschmittelbehälter mit einem drei mal fünf Millimeter großen Silikonrohr mit der Peristaltikpumpe und ein zweites drei mal fünf Millimeter großes Silikonrohr, um die peristaltische Pumpe über den Entgaser mit der Orgelkammer zu verbinden. Verbinden Sie einen männlichen Luer mit dem freien Ende des zweiten Rohres und verwenden Sie ein drittes drei mal fünf Millimeter großes Silikonrohr, um die Organkammer über die Peristaltikpumpe mit dem Waschmittelsammelbehälter zu verbinden.
Schließlich eine zwei Millimeter unbeschriftete Pipette an die freien Enden der Rohre im Waschmittelbehälter und den Waschmittelsammelbehälter anschließen. Platzieren Sie dann die Dezellularisierungseinrichtung bei vier Grad Celsius. Um die Bauchspeicheldrüse zu ernten, legen Sie ein heparinisiertes, 45-Kilogramm-weibliches Schwein auf einen Dissektionstisch in der Supine-Position, und verwenden Sie ein Skalpell, um einen 40-Zentimeter-Mittellinienschnitt vom xiphoiden Prozess bis zum Schambein zu machen, um die Bauchorgane freizulegen.
Nachdem Sie die Milz-, Duodenal- und Verbindungslappen identifiziert haben, suchen Sie die hauptbeuge Zwölffingerpapille und verwenden Sie zwei einzelne Nähte, um das Zwölffingerdarm von der Website oral zu ligieren. Ligate die unterlegene Speiseröhre mit zusätzlichen Nähten, und schneiden zwischen den Ligaturen mit der Schere, um die Entfernung des Magens zu erleichtern. Trennen Sie das Bindegewebe vom Dickdarm, um den Dünndarm zu erreichen, und trennen Sie das Bindegewebe des Dickdarms, der sich an den Milzlappen der Bauchspeicheldrüse anheftet.
Der Dünndarm wird durch Bindegewebe am Milzlappen an der Bauchspeicheldrüse befestigt, umgibt aber auch die Bauchspeicheldrüse. Sie müssen sorgfältig dem Darmweg folgen, um das Bindegewebe zwischen Darm und Bauchspeicheldrüse zu entwirren und zu trennen. Nach dem Liganderdern der Arterien, entfernen Sie den Dickdarm aus dem Dünndarm.
Identifizieren Sie die minderwertige mesenterische Vene, den minderwertigen mesenterischen Arterienbaum, und ligaten Sie die Gefäße mit einer Naht kaudal an die Bauchspeicheldrüse und schneiden Sie mit einer Schere. Ligate die Milzarterie und Vene zusammen in der Hilum, in der Nähe der Milz, und schneiden distally mit der Schere, um die Milz zu entfernen. Folgen Sie dem Zwölffingerdarm, bis das Duodenal und die Verbindungslappen gelöscht sind, und ligaten Sie das Zwölffingerdarm am Ende mit zwei separaten Nähten.
Der Teil des Zwölffingerdarms, der in engem Kontakt mit der Verbindung und dendenalen Lappen ist, wird mit der Bauchspeicheldrüse entfernt, da die Ligation aller kleinen Blutgefäße zwischen den beiden Organen zu schwierig ist. Nach der Zersebung der Portalvene, ligate das Gefäß mit einer Naht, um blutaustritt aus der Leber zu verhindern, und sezieren und ligate die Gallengang und Leberarterie mit zwei Nähten. Dann schneiden Portal Vene, Leberarterie, und Gallengang mit Schere.
Suchen Sie die Aorta unter der Nierenvene und sezieren Sie die Aorta in Schädelrichtung vom Muskel und Bindegewebe, bis das Gefäß die Bauchspeicheldrüse erreicht. Nun, kippen Sie sanft die Bauchspeicheldrüse um, und sezieren Sie die Aorta, wobei die überlegene mesenterische Arterie und der Zöliakiestamm intakt bleiben. Schneiden Sie die Aorta Schädel auf den ZöliakieStamm, und stumpf sezieren Sie das verbleibende umgebende Gewebe, um die Ernte der Bauchspeicheldrüse zu ermöglichen.
Verwenden Sie dann eine 50-Milliliter-Spritze, die mit einer Vier-Millimeter-Arteriotomiekanüle verbunden ist, um das Organ mit Lösung zwei durch die Aorta zu spülen, bis das gesamte Organ durchgepeitscht ist oder bis das ganze Organ kalt wird. Legen Sie die Lösung zwei durchfundierte Bauchspeicheldrüse auf eine Metallschale auf Eis, mit Aorta nach oben, und verwenden Sie eine Schere, um die Nähte aus dem Zwölffingerdarm zu schneiden. Verwenden Sie eine 25-Milliliter-Pipette, um das Zwölffingerdarm mit 50 bis 150 MilliliterRinpurem zu spülen und das Gewebe mit frischen Nähten umzuligieren.
Ligate ein Ende der Aorta und alle Zweige, mit Ausnahme der überlegenen mesenterischen Arterie und des Zöliakie-Stamms, um Leckagen zu verhindern, und legen Sie eine Vier-Millimeter-Arteriotomie-Kanüle in das andere Ende der Aorta. Als nächstes legen Sie die Bauchspeicheldrüse in die Orgelkammer und verbinden Sie die Kanüle in der Bauchspeicheldrüse mit einem männlichen Luer. Dann durchdringen Sie die Bauchspeicheldrüse mit Lösung drei für eine Stunde bei 20 Milliliter pro Minute, und frieren Sie die doppelt durchsetzte Bauchspeicheldrüse bei minus 20 Grad Celsius in Lösung vier bis zum Beginn der Dezellularisierung ein.
Am Tag des Beginns der Dezellularisierung, tauen Sie die Bauchspeicheldrüse bei vier Grad Celsius, und legen Sie die aufgetaute Bauchspeicheldrüse in der Dezellularisierung Organkammer. Verbinden Sie das Waschmittel-Einlassrohr mit der Aorta der Bauchspeicheldrüse und waschen Sie die Bauchspeicheldrüse mit Lösung drei mit 20 Millilitern pro Minute über Nacht bei vier Grad Celsius. Am nächsten Morgen, dekantieren Sie jede Lösung in der Orgelkammer, und durchdringen Sie die Bauchspeicheldrüse für 30 Minuten bei 20 Milliliter pro Minute in Lösung fünf bei vier Grad Celsius.
Am Ende der Lösung fünf Perfusion, durchdringen die Bauchspeicheldrüse für acht Stunden bei 20 Milliliter pro Minute in Lösung sechs und vier Grad Celsius, gefolgt von einer 96-Stunden-Waschanlage in frischer Lösung fünf bei 20 Milliliter pro Minute und vier Grad Celsius. Ersetzen Sie die Wäsche durch 500 Milliliter DPBS, ergänzt durch Kalzium und Magnesium für 30 Minuten bei 37 Grad Celsius, gefolgt von einer Perfusion mit 250 Milliliter Lösung sieben für vier Stunden bei 20 Millilitern pro Minute und 37 Grad Celsius. Dann waschen Sie das Organ für weitere 120 Stunden mit frischer Lösung fünf bei 20 Milliliter pro Minute und vier Grad Celsius, und lagern Sie die Orgel in Lösung acht.
Hier kann die grobe Morphologie einer normalen Bauchspeicheldrüse beobachtet werden, die hellrosa erscheint und Milz-, Verbindungs- und Zwölffingerdarmlappen enthält. Nach der Dezellularisierung geht die rosa Farbe verloren, und die verarbeitete Bauchspeicheldrüse erscheint blassweiß. In einer normalen Bauchspeicheldrüse sind viele blaue Kerne durch H- und E-Färbung sichtbar, während in einer dezellularisierten Bauchspeicheldrüse die Kerne nicht mehr visualisiert werden können, was ihren Verlust bestätigt.
Die isolierte intakte Schweinebauchspeicheldrüse, nach diesem Verfahren, wird es eine vollständige Perfusion und erfolgreiche Dezellularisierung ermöglichen, während die Struktur erhalten und auch einige extrazelluläre Matrixproteine erhalten werden können. Die dezellularisierte Bauchspeicheldrüse kann zur Entwicklung von Ganzorganrezellularisierungsstrategien in Bioreaktorsystemen mit relevanten Zelltypen eingesetzt werden. Nach rezellulärisierender Stammzellen kann die gewebegefertigte Bauchspeicheldrüse für klinische Anwendungen und Arzneimitteltests verwendet werden.
Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Triton X-100 und SDC extrem gefährlich sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen, wie das Tragen von Handschuhen und die Vorbereitung der Lösungen unter Rauchhaube, immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.
