이 방법은 연결, 십이지장 및 비장 엽및 추운 온도에서 세제의 관류를 통해 최종 탈세포화를 포함하는 돼지 췌장의 해부에 사용될 수 있다. 탈세포화의 이 방법은 돼지 췌장에 대한 통찰력을 제공하지만, 다른 큰 동물의 췌장에도 적용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 추가 조직 엔지니어링 응용 프로그램에 대한 췌장과 같은 복잡한 장기의 그대로 검색을 용이하게한다는 것입니다.
일반적으로, 이 방법에 새로운 개인, 그들은 식별 하 고 주변 혈관의 모든 리그 동안 그대로 췌장의 해부 마스터 연습을 많이 필요로 하기 때문에 투쟁 할 것 이다. 시술을 시작하기 전에 3mm 5mm 실리콘 튜브 하나를 사용하여 세제 용기를 연동 펌프에 연결하고 두 번째 3-5mm 실리콘 튜브를 사용하여 연막 펌프를 데가저를 통해 기관 챔버에 연결합니다. 남성 루어를 제2 튜브의 자유 끝에 연결하고, 세 번째 3mm 5mm 실리콘 튜브를 사용하여 연동 펌프를 통해 세제 수집 용기에 오르간 챔버를 연결합니다.
마지막으로, 2밀리미터의 라벨이 없는 파이펫을 세제 용기와 세제 수집 용기의 튜브의 자유 끝에 연결합니다. 그런 다음 탈세포 화 설정을 섭씨 4도에 놓습니다. 췌장을 수확하려면, 척추 위치에 있는 해부 테이블에 헤패린, 45킬로그램, 암컷 돼지를 놓고, 메스를 사용하여 심포이드 공정에서 음모뼈까지 40센티미터 의 중간 절개를 하여 복부 장기를 노출시한다.
비장, 십이지장 및 연결 엽을 식별 한 후, 주요 십이지장 유두를 찾아, 구두 사이트에서 십이지장을 리게이트하는 두 개의 개별 봉합사를 사용합니다. 열등한 식도를 추가 봉합사로 리게이트하고 위금으로 합자 사이를 잘라 위장제거를 용이하게 합니다. 결장에서 결합 조직을 분리하여 소장에 도달하고 췌장의 비장 엽에 부착되는 결장의 결합 조직을 분리합니다.
소장은 비장 엽에서 결합 조직에 의해 췌장에 부착되지만 췌장을 둘러싸고 있습니다. 창자와 췌장 사이의 결합 조직을 분리하고 분리하기 위해 장 경로를 신중하게 따라야합니다. 동맥을 결찰한 후 소장에서 결장제거합니다.
열등한 장분 정맥, 열등한 장분 동맥 나무를 식별하고, 배장에 한 봉합사 소달로 혈관을 리게이트하고 가위로 자른다. 비장 동맥과 정맥을 일럼에서 함께 리게이트하고 비장 가까이에 있으며 비장을 제거하기 위해 가위로 절단합니다. 십이지장과 연결 로브가 지워질 때까지 십이지장(duodenum)을 따라가며, 끝에 두 개의 별도 봉합사로 십이지장(duodenum)을 분리한다.
두 장기 사이의 모든 작은 혈관의 결찰이 너무 어렵기 때문에 연결 및 십이지장 엽과 밀접한 접촉하는 십이지장 부위는 췌장과 함께 제거됩니다. 포털 정맥을 해부 한 후, 간에서 혈액 누출을 방지하기 위해 하나의 봉합사로 혈관을 리계하고, 두 봉합사와 담관과 간 동맥을 해부하고 리폰. 그런 다음, 가위로 포털 정맥, 간 동맥 및 담관을 잘라냅니다.
신장 정맥 아래 대동맥을 찾아 혈관이 췌장에 도달 할 때까지 근육과 결합 조직에서 두개골 방향으로 대동맥을 해부합니다. 이제 췌장을 부드럽게 뒤집어 대동맥을 해부하여 우수한 장간 동맥과 체강 트렁크를 그대로 유지합니다. 대동맥 두개골을 체강 트렁크에 자르고, 남은 주변 조직을 무뚝뚝하게 해부하여 췌장의 수확을 허용합니다.
그런 다음, 4밀리미터 동맥 캐뉼라에 연결된 50밀리리터 주사기를 사용하여 전체 기관이 퍼질 때까지 또는 전체 장기가 차가워질 때까지 용액 2개로 대동맥을 통해 장기를 플러시합니다. 용액 2개의 퍼퓨즈 췌장을 얼음 위에 금속 트레이에 놓고 대마가 위로 향하도록 하고 가위를 사용하여 십이지장에서 봉합사를 자른다. 25밀리리터 파이펫을 사용하여 50~150밀리리터의 초순수로 십이지장을 플러시하고, 새로운 봉합사로 조직을 다시 굴절시하십시오.
대동맥과 모든 가지의 한쪽 끝을 리게이트하여 우수한 막질 동맥과 체강 트렁크를 제외한 모든 가지를 누설을 방지하고 대동맥의 다른 쪽 끝에 4밀리미터 동맥 절제술 캐뉼라를 삽입합니다. 다음으로 췌장을 장기 챔버에 넣고 췌장의 캐뉼라를 남성 루어에 연결합니다. 그런 다음 분당 20 밀리리터에서 1시간 동안 3시간 동안 용액으로 췌장을 인페드하고, 탈세포화가 시작될 때까지 용액 4도에서 영하 20도의 이중 퍼퓨즈 췌장을 동결한다.
탈세포화를 시작하는 날에췌장을 섭씨 4도에서 해동하고 탈세포화 기관실에 해동된 췌장을 놓습니다. 세제 입구 튜브를 췌장의 대어타에 연결하고 췌장 3을 분당 20 밀리리터에서 섭씨 4도에서 씻어내십시오. 다음 아침, 장기 챔버에 남아있는 모든 용액을 데수, 4 섭씨에서 5 용액5분당 20 밀리리터에서 30 분 동안 췌장을 perfuse.
용액 5관류의 끝에서, 용액 6섭씨 6도와 섭씨 4도에서 분당 20 밀리리터에서 8시간 동안 췌장을 허용하고, 분당 20밀리리터와 섭씨 4도에서 96시간 세척을 제공합니다. 세척을 섭씨 37도에서 30분 동안 칼슘과 마그네슘으로 보충한 DPBS 500밀리리터로 세척을 교체하고, 분당 20밀리리터와 섭씨 37도에서 4시간 동안 250밀리리터의 용액을 7시간 동안 세척합니다. 그런 다음 분당 20 밀리리터와 섭씨 4도에서 신선한 용액 5로 장기를 120시간 더 씻고 오르간을 용액 8에 보관합니다.
여기서, 밝은 분홍색으로 나타나고 비장, 연결 및 십이지장 엽을 포함하는 일반 췌장의 총 형태를 관찰 할 수 있습니다. 탈세포화 후 분홍색 색상이 손실되고 처리 된 췌장이 옅은 흰색으로 나타납니다. 일반적인 췌장에서, 많은 파란 핵은 H와 E 염색에 의해 명백합니다, 탈세포화한 췌장에서 핵은 더 이상 그들의 손실을 확인하는, 시각화될 수 없는 동안.
이 절차에 따라 분리된 전소 적 돼지 췌장은 구조를 보존하고 일부 세포 외 매트릭스 단백질을 얻을 수 있도록하면서 완전한 관류 및 성공적인 탈세포화를 허용할 것입니다. 탈세포화된 췌장은 관련 세포 모형을 가진 생물 반응기 시스템에 있는 전체 기관 재세포화 전략을 개발하는 데 사용될 수 있습니다. 수령인 줄기 세포를 이용한 재세포화에 이어, 조직 엔지니어링 췌장은 임상 응용 및 약물 검사에 사용될 수 있다.
Triton X-100 및 SDC와 함께 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 장갑을 착용하고 연기 후드 아래에서 솔루션을 준비하는 것과 같은 예방 조치는 항상 이 절차를 수행하는 동안 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.
