يمكن استخدام هذه الطريقة لتشريح البنكرياس بورسين التي تحتوي على اتصال، الاثني عشري، والفصوص splenic و decellularization في نهاية المطاف عن طريق ضخ المنظفات في درجات الحرارة الباردة. على الرغم من أن هذه الطريقة من إزالة الخلايا يوفر نظرة ثاقبة البنكرياس بورسين، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على pancreata من الحيوانات الكبيرة الأخرى. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسهل استرجاع الجهاز المعقد ، مثل البنكرياس ، للتطبيقات الهندسية الإضافية للأنسجة.
عموما، الأفراد الجدد لهذه الطريقة، وأنها سوف النضال لأن تشريح البنكرياس سليمة في حين تحديد وربط جميع الأوعية الدموية المحيطة بها يتطلب الكثير من الممارسة لإتقان. قبل البدء في الإجراء ، استخدم أنبوب سيليكون واحد من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات لتوصيل حاوية المنظفات بالمضخة ال peristaltic وثاني أنبوب سيليكون ثلاثي في خمسة ملليمترات لتوصيل المضخة ال peristaltic إلى غرفة الجهاز عن طريق degasser. ربط ليتر ذكر إلى الطرف الحر من الأنبوب الثاني، واستخدام ثالث أنبوب سيليكون ثلاثة في خمسة ملليمترات لربط غرفة الجهاز لحاوية جمع المنظفات عن طريق مضخة ال peristaltic.
وأخيرا، قم بتوصيل ماصة غير مُدلى بها من عيارين إلى النهايات الحرة للأنابيب في حاوية المنظفات وحاوية جمع المنظفات. ثم ضع إعداد إزالة الخلية عند أربع درجات مئوية. لحصاد البنكرياس، ضع خنزيرًا أنثويًا يزن 45 كجم على طاولة تشريح في موضع الضم، واستخدم مشرطًا لصنع شق متوسط طوله 40 سنتيمترًا من عملية الـ xiphoid إلى عظم العانة لفضح أعضاء البطن.
بعد تحديد splenic، الاثني عشري، وفص اتصال، وتحديد موقع البابية الاثني عشر الرئيسية، واستخدام اثنين من الغرز الفردية لligate شفويا الاثني عشر من الموقع. Ligate المريء السفلي مع خياطة إضافية ، وقطع بين الأربطة مع مقص لتسهيل إزالة المعدة. افصل الأنسجة الضامة عن القولون للوصول إلى الأمعاء الدقيقة، وافصل النسيج الضام في القولون الذي يعلق على الفص الزنجي من البنكرياس.
يتم توصيل الأمعاء الدقيقة بالبنكرياس عن طريق النسيج الضام في الفص الزلي، ولكنها تحيط أيضًا بالبنكرياس. عليك أن تتبع بعناية مسار الأمعاء لفك و فصل النسيج الضام بين الأمعاء والبنكرياس. بعد ربط الشرايين، قم بإزالة القولون من الأمعاء الدقيقة.
تحديد الوريد الأدنى mesenteric، وأدنى شجرة الشريان المساريق، وligate الأوعية مع خياطة واحدةcaudal البنكرياس وقطع مع مقص. Ligate الشريان الجنبي والوريد معا في الحلوم، على مقربة من الطحال، وقطع distally مع مقص لإزالة الطحال. اتبع الاثني عشر حتى يتم مسح الفصوص الاثني عشر والاتصال ، وligate الاثني عشر في النهاية مع اثنين من الغرز منفصلة.
يتم إزالة الجزء من الاثني عشر الذي هو على اتصال وثيق مع اتصال وفصوص الاثني عشر مع البنكرياس، كما ربط جميع الأوعية الدموية الصغيرة بين الجهازين من الصعب جدا. بعد تشريح الوريد المدخل ، ligate السفينة مع خياطة واحدة لمنع أي تسرب الدم من الكبد ، وتشريح وligate القناة الصفراوية والشريان الكبدي مع اثنين من الغرز. ثم، وقطع الوريد المدخل، الشريان الكبدي، والقناة الصفراوية مع مقص.
حدد مكان الشريان الأورطي تحت الوريد الكلوي، وتشريح الشريان الأبهر في اتجاه الجمجمة من العضلات والأنسجة الضامة حتى يصل الوعاء إلى البنكرياس. الآن، بلطف قلب البنكرياس أكثر، وتشريح الشريان الأورطي، والحفاظ على الشريان المينارتيك متفوقة والجذع الاضطرابات الهضمية سليمة. قطع الشريان القحفي الأورطي إلى جذع الاضطرابات الهضمية، وحاد تشريح الأنسجة المحيطة المتبقية للسماح بالحصاد من البنكرياس.
ثم، استخدام حقنة 50 ملليلتر متصلة قنية استئصال الشرايين أربعة ملليمتر لطرد الجهاز من خلال الشريان الأبهر مع الحل الثاني حتى يتم perfused الجهاز كله أو حتى يصبح الجهاز كله الباردة. وضع الحل اثنين من البنكرياس perfused على صينية معدنية على الجليد، مع الشريان الأورطي التي تواجه، واستخدام مقص لقطع الغرز من الاثنيع. استخدام ماصة 25 ملليلتر لطرد الاثني عشر مع 50 إلى 150 ملليلتر من الماء فائقة البور، religate الأنسجة مع الغرز الطازجة.
Ligate نهاية واحدة من الشريان الأورطي وجميع الفروع، باستثناء الشريان المسنتيبيرية العليا والجذع الاضطرابات الهضمية، لمنع التسرب، وإدراج قنية استئصال الشرايين أربعة ملليمترات في الطرف الآخر من الشريان الأبهر. بعد ذلك، ضع البنكرياس في غرفة الأعضاء، وربط القنية في البنكرياس بـ Luer ذكر. ثم، اثقب البنكرياس بالمحلول ثلاثة لمدة ساعة واحدة عند 20 ملليلتر في الدقيقة، وتجميد البنكرياس المزدوج عند ناقص 20 درجة مئوية في محلول أربعة حتى بداية إزالة الخلايا.
في يوم بدء إزالة الخلايا ، ذوبان البنكرياس عند أربع درجات مئوية ، ووضع البنكرياس المذاب في غرفة الجهاز نزع الخلية. قم بتوصيل أنبوب مدخل المنظفات إلى الشريان الأورطي للبنكرياس، وغسل البنكرياس بالمحلول الثالث بمعدل 20 ملليلترًا في الدقيقة بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. في صباح اليوم التالي، إلغاء أي حل المتبقية في غرفة الجهاز، وثقب البنكرياس لمدة 30 دقيقة في 20 ملليلتر في الدقيقة الواحدة في حل خمسة في أربع درجات مئوية.
في نهاية محلول خمسة ضخ, ضخ البنكرياس لمدة ثماني ساعات في 20 ملليلتر في الدقيقة في حل ست وأربع درجات مئوية, تليها 96 ساعة غسل في محلول جديد خمسة في 20 ملليلتر في الدقيقة وأربع درجات مئوية. استبدل الغسل بـ 500 ملليلتر من DPBS مكمّلة بالكالسيوم والمغنيسيوم لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تليها الضخ مع 250 ملليلتر من الحل سبعة لأربع ساعات بمعدل 20 ملليلتر في الدقيقة و37 درجة مئوية. ثم، وغسل الجهاز لمدة 120 ساعة أخرى مع حل جديد خمسة في 20 ملليلتر في الدقيقة وأربع درجات مئوية، وتخزين الجهاز في الحل ثمانية.
هنا ، يمكن ملاحظة المورفولوجيا الإجمالية للبنكرياس العادي ، والتي تظهر باللون الوردي الفاتح وتحتوي على splenic ، والاتصال ، والفصوص الاثني عشرية. بعد إزالة الخلية، يتم فقدان اللون الوردي، والبنكرياس معالجتها يظهر أبيض شاحب في اللون. في البنكرياس العادي، العديد من النوى الزرقاء واضحة من قبل H وE تلطيخ، في حين في البنكرياس غير الخلوية لم يعد من الممكن تصور النوى، مما يؤكد فقدانها.
البنكرياس بورسين سليمة معزولة, بعد هذا الإجراء, وسوف تسمح ضخ كامل وفك الخلايا الناجحة مع الحفاظ على هيكل وأيضا السماح بعض البروتينات مصفوفة خارج الخلية يمكن الحصول عليها. يمكن استخدام البنكرياس المزيل الخلية لتطوير استراتيجيات إعادة الخلية في الجهاز كله في أنظمة مفاعلات حيوية مع أنواع الخلايا ذات الصلة. بعد إعادة الخلية مع الخلايا الجذعية المتلقية، يمكن استخدام البنكرياس الأنسجة هندسيا للتطبيقات السريرية واختبار المخدرات.
لا ننسى أن العمل مع تريتون X-100 وSDC يمكن أن تكون خطرة للغاية، وأن الاحتياطات، مثل ارتداء القفازات وإعداد الحلول تحت غطاء محرك الدخان، ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
