실험적 장기 기증 모델은 일반적으로 사망 과정 및/또는 장기의 보존 및 이식과 관련된 사건과 관련된 조직 손상의 고립된 상황을 모방합니다. 이러한 모델은 기증 횟수를 늘리고 결과적으로 잠재적 수혜자의 가중치 목록을 줄이려는 치료법 개발에 매우 유용합니다. 따라서 뇌사 유도 및 순환사 유도 모델과 같은 다양한 모델을 개발하는 것이 중요해졌습니다.
이러한 사건은 기증된 장기와 조직의 기능을 손상시키는 다른 해로운 과정과 관련이 있기 때문입니다. 마취 및 수술 전 준비. 쥐를 5%의 이소플루란이 있는 밀폐된 챔버에 1-4분 동안 둡니다.
발가락 꼬집기 반사를 확인하여 적절한 마취를 확인합니다. 반사 반응이 없는 경우 소아 후두경의 도움으로 구강 기관 삽관, 14게이지 혈관 삽관을 수행합니다. 이전에 조정된 기계식 인공호흡기와 일회 호흡량 킬로그램당 10밀리리터, 분당 90사이클, PEEP 3.0cm H2O를 사용하여 기관 카테터를 인공호흡기에 연결하고 마취 농도를 2%로 조정합니다.
그런 다음 거즈를 사용하여 클로르헥시딘 디글루코네이트의 알코올 용액으로 수술 부위와 동물의 꼬리를 세척하고 2%소독 절차를 3회 반복했습니다. 동물의 꼬리 끝을 자르고 엄지와 검지를 꼬리 밑면에 놓은 다음 눌러서 꼬리에서 밀어냅니다. 말초 혈액 샘플을 수집하여 꼬리를 통해 20마이크로리터를 측정하여 총 백혈구 수를 계산합니다. 기관절개술.
목의 중간 1/3에서 시작하여 흉골 상부 노치까지 경추 기관의 세로 절개를 수행합니다. 약 1.5센치 절개. 피부와 피하 조직을 절개한 후 기관이 노출될 때까지 경추 근육을 절개합니다.
기관 아래에 2.0 실크 합자를 놓습니다. 마이크로 가위를 사용하여 기관의 위쪽 1/3을 기관절개하여 균일한 환기를 달성합니다. 금속 캐뉼라의 직경인 3.5cm를 수용하기 위해 두 개의 연골 고리 사이의 기관을 수평으로 자릅니다.
환기 튜브를 삽입하고 준비된 합자로 고정하십시오. 환기 튜브를 작은 동물 환기 시스템에 연결합니다. 킬로그램당 10밀리리터의 일회 호흡량, 분당 70사이클의 속도, 3센티미터 H2O의 PEEP로 쥐를 환기시킵니다.
대퇴 동맥 및 정맥 카테터 삽입. 따라서 사타구니 부위에서 약 1.5cm의 작은 절개를 통해 대퇴골 삼각형을 노출시킵니다. 대퇴부 혈관을 식별하고 격리합니다.
이 절차에서는 3.2배 배율의 실체 현미경을 사용합니다. 혈관, 정맥 또는 동맥 아래에 두 개의 4.0 실크 합자를 하나는 원위에, 다른 하나는 근위부에 배치합니다. 가장 원위 합자를 닫고 근위 합자에 미리 조정된 매듭을 놓고 당깁니다.
혈관에 미리 형성된 작은 절개를 통해 카테터를 삽입합니다. 탈구를 방지하기 위해 캐뉼라를 고정하십시오. 동맥 카테터를 압력 변환기 및 생체 신호 모니터링 시스템에 연결하여 MAP을 기록합니다.
변환기는 동물의 심장 높이에 위치해야 합니다. 양궁 카테터를 압력 변환기 및 생체 신호 모니터링 시스템에 연결하여 MAP를 기록합니다. 변환기는 동물의 심장 높이에 위치해야 합니다.
주사기 카테터를 정맥에 3mL 넣고 필요한 경우 수분 공급과 배출을 목표로 합니다. 출혈성 쇼크 유도. 정맥 축을 통해 헤파린화 주사기를 사용하여 약 50mm의 수은의 MAP 값에 도달할 때까지 소량의 혈액을 제거합니다.
따라서 출혈성 쇼크를 설정합니다. 혈액 분취액은 10분 간격으로 채취해야 합니다. 약 50분 동안 약 360mm의 수은에서 압력을 안정적으로 유지합니다.
이렇게하려면 압력이 각각 증가하거나 감소하는 경우 혈액 분취액을 제거하거나 추가하십시오. 저체온증을 피하기 위해 근처에 열원을 두십시오. 프로토콜이 끝나면 수집을 위해 총 폐활량에서 폐 블록을 채취하고 액체 질소에서 급속 동결하거나 추가 연구를 위해 고정 용액에 넣습니다.
순환 사망 유도. 순환계 사멸을 유도하려면 정맥 라인을 통해 티오펜탈나트륨 킬로그램당 150mg을 투여합니다. 그런 다음 환기 시스템을 끕니다.
MAP의 점진적인 감소에 주목하십시오. 동물은 실온에서 180분 동안 온열 허혈 상태를 유지해야 합니다. 프로토콜이 끝나면 폐를 기계식 인공호흡기에 다시 연결하고 수집을 위해 총 폐활량으로 폐 차단을 채취합니다.
그리고 액체 질소에서 급속 동결하거나 추가 연구를 위해 고정 용액에 넣으십시오. 뇌사 유도. 쥐를 엎드린 자세로 놓습니다.
수술용 가위를 사용하여 두개골에서 피부를 제거합니다. 시상 봉합사에 1mm 구경 시추공, 전방 2.8mm, 복부 10mm, 측면 1.5mm를 뚫습니다. 전체 풍선 카테터를 두개강에 삽입하고 풍선에 식염수(500마이크로리터)가 미리 채워져 있는지 확인합니다.
주사기를 사용하여 카테터를 빠르게 팽창시킵니다. 갑작스런 MAP 상승을 관찰하여 뇌사를 확인합니다. 쿠싱 반사, 반사 신경의 부재, 양측 산동증 및 무호흡증.
확인 후 마취를 중단하고 360분 동안 동물을 기계 환기 상태로 유지하십시오. 저체온증을 피하기 위해 근처에 열원을 두십시오. 프로토콜이 끝나면 수집을 위해 총 폐활량에서 폐 블록을 채취합니다. 결과.
카테터 삽입 후 뇌사 그룹은 혈압 수치가 급격히 상승했습니다. 고혈압 피크는 두개내압 상승과 관련된 특이한 사건이며 뇌사 확립의 첫 번째 증거로 간주 될 수 있습니다. 이 피크 압력 이후 MAP의 급격한 감소가 뒤따랐습니다.
저혈압은 약 50분 동안 지속되었고, 그 후 MAP 수치는 기준선에 가까운 값으로 돌아왔습니다. 뇌사 그룹과 달리 출혈성 쇼크 그룹에서 MAP의 감소는 실험의 처음 10분 동안 혈액 부분 표본의 철수와 관련이 있습니다. 저혈량성 쇼크는 360분 동안 유지되었다.
출혈성 쇼크가 시작된 지 6시간 후, 동물은 폐 조직 저항이 증가하고, 호흡기 순응도가 감소했다. 폐부종의 변화를 평가하기 위해 습식 중량과 건식 중량 비율을 조사했습니다. 이러한 맥락에서 뇌사는 출혈성 쇼크 및 순환기 사망 그룹에 비해 더 큰 부종을 보였다.
마지막으로, 출혈성 쇼크 그룹은 기준선 값에 비해 전신 백혈구의 총 수가 증가한 것과 관련이 있었고, 뇌사 그룹과 관련이 있었다. 이는 순환기 사망군보다 뇌사 그룹과 출혈성 쇼크 그룹에서 IL1 베타 발현 수치가 증가한 것으로 나타났다. 출혈성 쇼크 그룹은 뇌사 그룹과 순환기 사망 그룹에 비해 TNF 알파 수치가 더 높았다.
여기에 설명된 장기 기증자 모델은 다양한 이식편 적출 방법론과 관련된 변화를 연구하는 데 잠재적인 도구이며, 이식 후 결과에 대한 이러한 장기의 품질에 미치는 영향을 완전히 이해할 수 있는 수단을 제공할 수 있습니다. 여기에 제시된 방법론의 재현성과 신뢰성을 감안할 때.
