Deneysel organ bağışı modelleri genellikle ölüm süreciyle ilgili izole doku hasarı durumlarını ve/veya organın korunması ve implantasyonu ile ilgili olayları taklit eder. Bu modeller, bağış sayısını artırmayı ve sonuç olarak potansiyel alıcıların ağırlık listesini azaltmayı amaçlayan tedavilerin geliştirilmesinde çok faydalıdır. Buna bağlı olarak, beyin ölümüne neden olan ve dolaşım ölümünü tetikleyen modeller gibi farklı modellerin geliştirilmesi önemli hale gelmiştir.
Çünkü bu olaylar, bağışlanan organların ve dokuların işlevselliğini tehlikeye atan farklı zararlı süreçlerle ilişkilidir. Anestezi ve cerrahi öncesi hazırlık. Sıçanı bir ila dört dakika boyunca% 5 izofluran içeren kapalı bir odaya yerleştirin.
Ayak parmağı sıkıştırma refleksini kontrol ederek uygun anesteziyi onaylayın. Refleks reaksiyonların yokluğunda, pediatrik laringoskop yardımıyla orotrakeal entübasyon, 14 gauge Anjiyokat, gerçekleştirin. Önceden ayarlanmış bir mekanik ventilatör ve kilogram başına 10 mililitre, dakikada 90 döngü ve PEEP 3.0 santimetre H2O ile trakeal kateteri ventilatöre bağlayın ve anestezik konsantrasyonu %2'ye ayarlayın İlgilenilen bölgelerden, baş, boyun, göğüs ve karın bölgesinden kürkü çıkarın.
Daha sonra, gazlı bez kullanarak, cerrahi alanı ve hayvanın kuyruğunu alkollü bir Klorheksidin diglukonat çözeltisi ile temizleyin,% 2 Dezenfeksiyon işlemi üç kez tekrarlandı. Hayvanın kuyruğunun ucunu kesin, başparmağınızı ve işaret parmağınızı kuyruğun tabanına yerleştirin ve ardından bastırıp tabandan uzağa kaydırın. Toplam lökosit sayımı için kuyruktan 20 mikrolitre periferik kan örneği alın. Trakeostomi.
Boynun orta üçte birinden başlayarak suprasternal çentiğe kadar servikal trakeanın uzunlamasına diseksiyonunu yapın. Yaklaşık 1,5 santimetre kesi. Deri ve deri altı dokusunun kesilmesinden sonra, trakea açığa çıkana kadar servikal kasları inceleyin.
2.0 ipek bağı trakeanın altına yerleştirin. Mikro makas kullanarak, düzgün ventilasyon sağlamak için trakeanın üst üçte birini trakeostomi yapar. Metal bir kanülün çapını 3,5 santimetre olacak şekilde yerleştirmek için trakeayı iki kıkırdaklı halka arasında yatay olarak kesin.
Havalandırma tüpünü yerleştirin ve hazırlanan ligatürlerle sabitleyin. Havalandırma tüpünü küçük hayvan havalandırma sistemine bağlayın. Sıçanı kilogram başına 10 mililitre tidal hacim, dakikada 70 devir hızı ve 3 santimetre H2O PEEP ile havalandırın.
Femoral arter ve ven kateterizasyonu. Bu nedenle, femoral üçgeni kasık bölgesinde yaklaşık 1,5 santimetre olan küçük bir kesiden ortaya çıkarın. Femoral damarları tanımlayın ve izole edin.
Bu prosedür için, 3,2 kat büyütme stereo mikroskop kullanın. Kan damarlarının, damarın veya arterin altına, biri distal ve diğeri proksimal olmak üzere iki adet 4.0 ipek bağ yerleştirin. En distal ligatürü kapatın ve proksimal ligatüre önceden ayarlanmış bir düğüm yerleştirin ve çekin.
Kateteri damarlarda önceden oluşturulmuş küçük bir kesiden yerleştirin. Çıkığı önlemek için kanülü sabitleyin. MAP'ı kaydetmek için arter kateterini bir basınç dönüştürücüsüne ve bir yaşamsal belirti izleme sistemine bağlayın.
Dönüştürücü, hayvanın kalbi seviyesine yerleştirilmelidir. MAP'ı kaydetmek için okçuluk kateterini bir basınç dönüştürücüsüne ve yaşamsal belirti izleme sistemine bağlayın. Dönüştürücü, hayvanın kalbi seviyesine yerleştirilmelidir.
Şırınga kateterini damar içine 3 mililitre yerleştirin, gerektiğinde hidrasyon ve kan kaybını hedefleyin. Hemorajik şok indüksiyonu. Venöz eksen yoluyla ve heparinize bir şırınga ile, yaklaşık 50 milimetre cıva MAP değerlerine ulaşılana kadar küçük hacimlerde kanı çıkarın.
Böylece, hemorajik şok oluşturmak. Unutmayın, kan alikotları 10 dakikalık aralıklarla alınmalıdır. Basıncı 360 dakikalık bir süre boyunca yaklaşık 50 milimetre cıvada sabit tutun.
Bunu yapmak için, basınç sırasıyla artar veya azalırsa, kan alikotlarını çıkarın veya ekleyin. Hipotermiyi önlemek için yakına bir ısı kaynağı koyun. Protokolün sonunda, pulmoner bloğu toplama için toplam akciğer kapasitesinde hasat edin ve sıvı nitrojen içinde hızlı dondurma veya daha ileri çalışmalar için sabitleme solüsyonuna yerleştirin.
Dolaşım ölümü indüksiyonu. Dolaşım ölümünü indüklemek için, venöz hattan kilogram sodyum tiyopental başına 150 miligram uygulayın. Ardından havalandırma sistemini kapatın.
MAP'deki aşamalı düşüşe dikkat edin. Hayvan, oda sıcaklığında 180 dakika boyunca ılık iskemi içinde kalmalıdır. Protokolün sonunda, akciğerleri mekanik ventilatöre yeniden bağlayın ve pulmoner bloğu toplama için toplam akciğer kapasitesinde toplayın.
Ve ya sıvı nitrojen içinde flaş dondurulur ya da daha ileri çalışmalar için fiksasyon çözeltisine yerleştirilir. Beyin ölümü indüksiyonu. Fareyi yüzüstü pozisyona getirin.
Cerrahi makas kullanarak cildi kafatasından çıkarın. Sagital sütürün 1 milimetre kalibreli bir sondaj deliği, 2.8 milimetre ön ve 10 milimetre ventral ve 1.5 milimetre lateral delin. Tüm balon kateterini kraniyal boşluğa yerleştirin ve balonun 500 mikrolitre salin ile önceden doldurulduğundan emin olun.
Bir şırınga yardımıyla, kateteri hızla şişirin. Ani MAP yükselmesini gözlemleyerek beyin ölümünü doğrulayın. Cushing refleksi, reflekslerin yokluğu, bilateral midriyazis ve apne.
Onaylandıktan sonra anesteziyi bırakın ve hayvanı 360 dakika mekanik ventilasyonda tutun. Hipotermiyi önlemek için yakına bir ısı kaynağı yerleştirin. Protokolün sonunda, toplama için toplam akciğer kapasitesinde pulmoner bloğu hasat edin. Sonuç -ları.
Kateter insüflasyonundan sonra, beyin ölümü grubu kan basıncı seviyelerinde ani bir artış yaşadı. Hipertansif pik, kafa içi basıncın artmasıyla ilgili tuhaf bir olaydır ve beyin ölümünün oluşumunun ilk kanıtı olarak kabul edilebilir. Bu pik basıncı MAP'de hızlı bir düşüş izledi.
Hipotansiyon yaklaşık 50 dakika devam etti, bundan sonra MAP seviyeleri başlangıçtakilere yakın değerlere geri döndü. Beyin ölümü grubundan farklı olarak, hemorajik şok grubunda MAP'deki azalma, deneyin ilk 10 dakikasında kan alikotlarının geri çekilmesi ile ilişkilidir. Hipovolemik şok 360 dakika sürdürüldü.
Hemorajik şokun başlamasından altı saat sonra, hayvanlar akciğer dokusu direncinde artış ve ardından solunum sistemi uyumunda azalma sergiledi. Akciğer ödemindeki değişiklikleri değerlendirmek için yaş ve kuru ağırlık oranı incelendi. Bu bağlamda, beyin ölümü hemorajik şok ve dolaşım ölümü grubuna göre daha fazla ödem gösterdi.
Son olarak, hemorajik şok grubu, başlangıç değerlerine kıyasla artmış toplam sistemik lökosit sayısı ve beyin ölümü grubu ile ilişkili olarak ilişkilendirildi. Buna, beyin ölümü grubunda ve hemorajik şok grubunda dolaşım ölümüne göre artmış IL1 Beta ekspresyon seviyeleri eşlik etti. Hemorajik şok grubu ayrıca beyin ölümü grubu ve dolaşım ölümü grubuna kıyasla daha yüksek TNF Alfa seviyeleri gösterdi.
Burada açıklanan organ bağışı modelleri, farklı greft toplama metodolojileri ile ilişkili değişikliklerin incelenmesinde potansiyel araçlardır ve bu organların kalitesinin transplantasyon sonrası sonuçlar üzerindeki etkisinin tam olarak anlaşılmasını sağlayan araçlar sağlayabilir. Burada sunulan metodolojilerin tekrarlanabilirliği ve güvenilirliği göz önüne alındığında.
