הערכת רעילות כימית במלנוגסטר דרוזופילה למבוגרים

הפרוטוקול מייצג צעד חשוב לביסוס דרוזופילה כמודל סטנדרטי לבדיקות בטיחות כימיות ולפיתוח מתודולוגיות גישה חדשות הנקראות בדרך כלל NAMs. הפרוטוקול מתאר שיטה יעילה וזולה המשתמשת במדיה נוזלית כדי להעריך את השפעות הרעלים הכימיים על יכולת הקיום של דרוזופילה מלנוגסטר בוגר. התחל על ידי ערימת ארבעה גיליונות של נייר כרומטוגרפיה תאית דרגה אחת וחיתוך אותם לרצועות ברוחב שני אינץ '.

נקב החוצה תוספות נייר פילטר בצורת פרח באמצעות ניקוב נייר בגודל 1.5 אינץ' המכיל צבע בצורת פרח. דחפו את ערימת נייר הסינון לתחתית בקבוקון פוליפרופילן בקוטר 28.5 מילימטר באמצעות מגבת עץ ללא לכה בגודל 22 על 220 מילימטרים. ודא שהערימה ממוקמת היטב בתחתית הבקבוקון.

אחסנו את הבקבוקונים המוכנים במגשי פלסטיק או קרטון והניחו את המגשים בשקיות ניילון גדולות עד לשימוש. פתחו את בקבוקון הזכוכית המכיל את הזבובים, הניחו אותו על פי בקבוקון הפלסטיק המוכן והעבירו זבובים ממוינים תואמי מין לבקבוקון הרעב על ידי הקשה על תחתית בקבוקון הפלסטיק כנגד ראש ספסל. סגור את בקבוקון הפלסטיק עם תקע אצטט תאית או פלוג ורשום את כל הזבובים שאבדו בהעברה זו.

סמן את בקבוקוני הרעב המכילים נקבות זבובים עם פס. כדי למנוע ערבוב בשוגג, השאירו את הבקבוקונים עם זבובי הדואר לא מסומנים. הכינו את תא הלחות לחשיפה למשך הלילה על ידי הנחת שש מגבות נייר סטנדרטיות בתחתית.

לאחר מכן השרו את מגבות הנייר ב-100 מיליליטר מים והניחו את רשת הפלסטיק מעל המגבות הרטובות כדי להבטיח שהבקבוקונים לא יבואו במגע עם מגבות הנייר הרוויות. לאחר הנחת מגשי בקבוקוני הרעב במצב אופקי בתוך תא הלחות, מעבירים את תא הלחות לאינקובטור של 25 מעלות צלזיוס לדגירת לילה. כדי להכין את בקבוקוני החשיפה הכימית, העבירו ארבעה בקבוקונים של נקבות זבובים מורעבות המכילים 20 זבובים בכל בקבוקון לארבעה בקבוקוני חשיפה מכל ריכוז כימי.

תייגו בקבוקונים אלה כנקבה. הכינו בקבוקוני חשיפה כימית המכילים צבע כחול על ידי העברת בקבוקון של נקבות זבובים מורעבות לבקבוקון חשיפה כחול לכל ריכוז כימי. תייגו בקבוקון זה כנקבה.

רשום את מספר הזבובים שהיו בכל בקבוקון לאחר ההעברה וציין את מספר הזבובים שמתו או ברחו. בדרך כלל, כל 20 הזבובים צריכים לשרוד רעב לילה והעברה. הניחו את בקבוקוני החשיפה אופקית בתא לחות טרי שהוכן לפני הנחת התא באינקובטור של 25 מעלות צלזיוס עם כ-60% לחות ומחזור אור של 12 עד 12 שעות הוא למחזור חשוך.

יש לבחון את בקבוקוני החשיפה 24 ו-48 שעות לאחר תחילת החשיפה לכימיקלים. ספרו ותיעדו את הזבובים המתים בכל בקבוקון בכל נקודת זמן. כדי לקבוע אם זבובים חשופים צרכו את מדיית החשיפה הכחולה בבקבוקוני החשיפה הכחולים לאחר 24 שעות מהחשיפה הכימית, בדקו את דפנות הבקבוקון לסימנים של צואה כחולה המופיעות כנקודות קטנות בצד בקבוקון החשיפה והפלוג.

לאחר מכן, להרדים את הזבובים באמצעות פחמן דו חמצני לפני בדיקת הבטן עבור נוכחות של צבע כחול. בדקו את הזבובים להתנהגויות אכילה חריגות כגון רגורגיטציה, התנפחות יבולים והתמוטטות תפקוד מחסום המעי. לאחר שתסיים, השליכו את כל הבקבוקונים המזוהמים, נייר הסינון, התקעים והזבובים במיכלי הפסולת הכימית המתאימים.

אם נשארים זבובים חיים בבקבוקונים, הקפיאו את הבקבוקונים לפני השלכתם במיכל הפסולת המתאים. יעילות הפרוטוקול נקבעה על ידי חשיפת איברים בוגרים או זבובים זכרים ונקבות לטווח ריכוזי הצתת נתרן מאפס עד שני מילימולרים כדי להשיג את הקטלניות לאחר 48 שעות של חשיפה. בניסויים הבאים נבחרו ריכוזים של אפס עד חמישה מילימולרים שהגדירו בצורה מדויקת יותר את עקומת התגובה למינון של נתרן ארסוניט.

בהתבסס על מודל זה, המינון הקטלני הסופי, או LD 10, LD 25 ו-LD 50 של זבובים זכרים שניזונו מנתרן ארסוניט היה 0.30 מילימולר, 0.50 מילימולרי ו-0.65 מילימולרי בהתאמה. ערכים אלה היו מעט גבוהים יותר עבור נקבות זבובים עם LD 10 של 0.30 מילימולר, LD 25 של 0.65 מילימולר ו- LD 50 של 0.90 מילימולר. בזבובים זכרים ונקבות שניזונו בכחול 1% F D ו-C המכילים תמיסות נתרן ארסוניט, המזון שנבלע הוחזר מדי פעם במינונים מעל 0.2 מילימולר לנקבות ו-0.5 מילימולר לזכרים, דבר המצביע על כך שרגורגיטציה עשויה למלא תפקיד מפתח בתגובת dross filia להרעלת ארסן.

בעקבות פרוטוקול חשיפה זה ניתן לאסוף זבובים בקלות לניתוח נוסף, כולל מחקרים גנומיים ומטבוליים. פרוטוקול זה הוא הצעד הראשון בביסוס זבוב הפירות drosophila melanogaster כמודל גנטי נפוץ לביצוע מחקרים בקנה מידה גדול של טוקסיקולוגיה מדויקת.