Un modello murino di lesione retinica ischemica indotta dall'occlusione dell'arteria carotide comune transiente

Riepilogo

Qui, descriviamo un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione bilaterale transitoria comune dell'arteria carotide usando suture semplici e un morsetto. Questo modello può essere utile per comprendere i meccanismi patologici dell'ischemia retinica causati da anomalie cardiovascolari.

Abstract

Diverse malattie vascolari come la retinopatia diabetica, l'occlusione delle vene o delle arterie retiniche e la sindrome ischemica oculare possono portare all'ischemia retinica. Per studiare i meccanismi patologici dell'ischemia retinica, è necessario sviluppare modelli sperimentali pertinenti. Anatomicamente, un principale vaso di alimentazione del sangue retinica è l'arteria oftalmica (OpA) e OpA ha origine dall'arteria carotide interna della comune arteria carotide (CCA). Pertanto, l'interruzione del CCA potrebbe effettivamente causare ischemia retinica. Qui, abbiamo stabilito un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione dell'arteria carotide comune bilaterale transitoria (tBCCAO) per legare il CCA destro con suture di seta 6-0 e per occludere il CCA sinistro transitoriamente per 2 secondi tramite un morsetto, e abbiamo dimostrato che tBCCAO potrebbe indurre ischemia retinica acuta che porta alla disfunzione retinica. L'attuale metodo riduce la dipendenza dagli strumenti chirurgici utilizzando solo aghi chirurgici e un morsetto, riduce i tempi di occlusione per ridurre al minimo la morte animale inaspettata, che è spesso vista nei modelli di topo dell'occlusione dell'arteria cerebrale media e mantiene la riproducibilità dei comuni risultati ischemici retinali. Il modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia delle retinopatie ischemiche nei topi e ulteriormente può essere utilizzato per lo screening in vivo dei farmaci.

Introduzione

La retina è un tessuto neurosensoriale per la funzione visiva. Poiché è necessaria una notevole quantità di ossigeno per la funzione visiva, la retina è conosciuta come uno dei tessuti più esigenti di ossigeno nel corpo¹. La retina è suscettibile alle malattie vascolari poiché l'ossigeno viene fornito attraverso i vasi sanguigni. Vari tipi di malattie vascolari, come la retinopatia diabetica e il vaso sanguigno retinale (vene o arterie) occlusione, possono indurre ischemia retinica. Per studiare i meccanismi patologici dell'ischemia retinica, sono considerati necessari modelli sperimentali riproducibili e clinicamente rilevanti di ischemia reti....

Protocollo

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Keio University School of Medicine.

1. Preparazione di strumenti chirurgici e animali

1. Autoclave strumenti chirurgici e tenerli in 70% alcol etilico. Prima di ogni nuova procedura chirurgica, pulire accuratamente gli strumenti chirurgici utilizzando il 70% di alcol etilico.
2. Preparare topi BALB/cAJc1 maschi (6 settimane, 26-28 kg) in una stanza priva di agenti patogeni specifici (SPF) per mantenere condizioni sterili prima, durante e dopo l'intervento chirurgico.

2. Occlusione del....

Risultati

Dopo la circolazione sistemica del FITC-dextran per 2 minuti, sono state esaminate le vasculure retiniche delle retine sinistra e destra nei topi azionati da sham e nei topi azionati da tBCCAO (Figura complementare 1). Fitc-dextran era completamente visibile sia nelle retine nei topi a farsa che nella retina sinistra nei topi azionati da tBCCAO, mentre era parzialmente rilevabile nella retina destra nei topi azionati da tBCCAO.

Dopo il tBCCAO, è stato esaminato lo sbavatura d.......

Discussione

Nello studio, abbiamo dimostrato che il tBCCAO, utilizzando suture semplici e un morsetto, potrebbe indurre ischemia retinica e conseguente disfunzione retinica. Inoltre, abbiamo dimostrato che il nostro attuale protocollo per lo sviluppo di un modello di topo di ischemia retinica è più facile e veloce rispetto ad altri protocolli precedenti per lo sviluppo di modelli di lesioni ischemiche retiniche^2,3,7.

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Atipamezole hydrochloride	Zenoaq	Antisedan	For anti-anesthesia
Applied Biosystems 7500 Fast	Applied Biosystems	-	For qPCR
Butorphanol tartrate	Meiji Seika Pharma	Vetorphale	For anesthesia
BZ-II Analyzer	KEYENCE	-	For an image merge
BALB/cAJc1	CLEA	-	Mouse strain
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb	CST	3700	For western blot
Clamp Forcep	World Precision Instruments	WPI 500451	For surgery
Dumont forceps #5	Fine Science Tools	11251-10	For surgery
DAPI solution	Dojindo	340-07971	For IHC
Envisu SD-OCT system	Leica	R4310	For OCT
FITC-dextran	Merk	FD2000S	For retinal blood perfusion
Fluorescence microscope	KEYENCE	BZ-9000	For fluorescence detection
Gatifloxacin hydrate	Senju Pharmaceutical	Gachifuro	For anti-bacterial infection
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)	Thermo	13-0300	For IHC
Heating pad	Marukan	RH-200	For surgery
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb	CST	36169	For western blot
ImageQuant LAS 4000 mini	GE Healthcare	-	For chemiluminescence
Midazolam	Sandoz K.K	SANDOZ	For anesthesia
Microtome Tissue-Tek TEC 6	Sakura	-	For sectioning
Medetomidine	Orion Corporation	Domitor	For anesthesia
Needle holder	Handaya	HS-2307	For surgery
PuREC	MAYO Corporation	-	For ERG
Scissor	Fine Science Tools	91460-11	For surgery
Sodium hyaluronate	Santen Pharmaceutical	Hyalein	For eye lubrication
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride	Santen Pharmaceutical	Mydrin-P	For mydriasis
6-0 silk suture	Natsume	E12-60N2	For surgery