Murine Модель ишемической травмы сетчатки индуцированных переходных двусторонних общих сонной артерии окклюзии

Резюме

Здесь мы описываем мышь модель ишемии сетчатки путем переходных двусторонних общих сонной артерии окклюзии с помощью простых швов и зажима. Эта модель может быть полезна для понимания патологических механизмов ишемии сетчатки, вызванной сердечно-сосудистыми аномалиями.

Аннотация

Разнообразные сосудистые заболевания, такие как диабетическая ретинопатия, окклюзия вен сетчатки или артерий и ишемический синдром глаз могут привести к ишемии сетчатки. Для исследования патологических механизмов ишемии сетчатки необходимо разработать соответствующие экспериментальные модели. Анатомически основным кровоснабжающим сосудом сетчатки является офтальмологическая артерия (OpA), а ОпА происходит от внутренней сонной артерии общей сонной артерии (CCA). Таким образом, нарушение CCA может эффективно вызвать ишемию сетчатки. Здесь мы создали мышь модель ишемии сетчатки путем переходных двусторонних общих сонной артерии окклюзии (tBCCAO), чтобы связать правый CCA с 6-0 шелковых швов и окклюзии левой CCA переходный в течение 2 секунд через зажим, и показал, что tBCCAO может вызвать острую ишемию сетчатки, ведущих к дисфункции сетчатки. Нынешний метод снижает зависимость от хирургических инструментов только с помощью хирургических игл и зажима, сокращает время окклюзии, чтобы свести к минимуму неожиданную смерть животных, которая часто наблюдается в мышиных моделях окклюзии средней мозговой артерии, и поддерживает воспроизводимость общих ишемических выводов сетчатки. Модель может быть использована для исследования патофизиологии ишемической ретинопатии у мышей и далее может быть использована для скрининга препарата in vivo.

Введение

Сетчатка является нейросенсорной тканью для зрительной функции. Так как значительное количество кислорода необходимо для зрительной функции, сетчатка известна как один из самых высоких кислорода требовательных тканей в организме¹. Сетчатка подвержена сосудистым заболеваниям, так как кислород доставляется через кровеносные сосуды. Различные типы сосудистых заболеваний, таких как диабетическая ретинопатия и сетчатки кровеносных сосудов (вен или артерий) окклюзии, может вызвать ишемию сетчатки. Для исследования патологических механизмов ишемии сетчатки необходимы воспроизводимые и клинически значимые экспериментальные модели ишемии сетчатки. Окклю....

протокол

Все методы, описанные здесь, были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию (IACUC) Медицинской школы Университета Кейо.

1. Подготовка хирургических инструментов и животных

1. Автоклав хирургических инструментов и держать их в 70% этилового спирта. Перед каждой новой хирургической процедурой, чистые хирургические инструменты тщательно используя 70% этилового спирта.
2. Подготовка самцов мышей BALB/cAJc1 (6 недель, 26-28 кг) в комнате, свободной от конкретных патогенов (SPF), для поддержания стерильных условий до, во время и после операции.

2. Переходные двусторон....

Результаты

После системной циркуляции FITC-декстрана в течение 2 минут были обследованы сосуды сетчатки левой и правой сетчатки у фиктивных мышей и мышей, управляемых tBCCAO(Дополнительный рисунок 1). FITC-декстран был полностью виден в обеих сетчатках у фиктивных мышей и левой сетчатки у мышей, .......

Обсуждение

В исследовании мы показали, что tBCCAO, используя простые швы и зажим, может вызвать ишемию сетчатки и сопутствующие дисфункции сетчатки. Кроме того, мы продемонстрировали наш текущий протокол для разработки мышиной модели ишемии сетчатки проще и быстрее по сравнению с другими предыдущим.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Atipamezole hydrochloride	Zenoaq	Antisedan	For anti-anesthesia
Applied Biosystems 7500 Fast	Applied Biosystems	-	For qPCR
Butorphanol tartrate	Meiji Seika Pharma	Vetorphale	For anesthesia
BZ-II Analyzer	KEYENCE	-	For an image merge
BALB/cAJc1	CLEA	-	Mouse strain
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb	CST	3700	For western blot
Clamp Forcep	World Precision Instruments	WPI 500451	For surgery
Dumont forceps #5	Fine Science Tools	11251-10	For surgery
DAPI solution	Dojindo	340-07971	For IHC
Envisu SD-OCT system	Leica	R4310	For OCT
FITC-dextran	Merk	FD2000S	For retinal blood perfusion
Fluorescence microscope	KEYENCE	BZ-9000	For fluorescence detection
Gatifloxacin hydrate	Senju Pharmaceutical	Gachifuro	For anti-bacterial infection
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)	Thermo	13-0300	For IHC
Heating pad	Marukan	RH-200	For surgery
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb	CST	36169	For western blot
ImageQuant LAS 4000 mini	GE Healthcare	-	For chemiluminescence
Midazolam	Sandoz K.K	SANDOZ	For anesthesia
Microtome Tissue-Tek TEC 6	Sakura	-	For sectioning
Medetomidine	Orion Corporation	Domitor	For anesthesia
Needle holder	Handaya	HS-2307	For surgery
PuREC	MAYO Corporation	-	For ERG
Scissor	Fine Science Tools	91460-11	For surgery
Sodium hyaluronate	Santen Pharmaceutical	Hyalein	For eye lubrication
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride	Santen Pharmaceutical	Mydrin-P	For mydriasis
6-0 silk suture	Natsume	E12-60N2	For surgery