Il Wellcome Trust per il finanziamento Open Access all&#39;Università di Oxford. Robert Deacon è un membro del gruppo OXION Oxford, finanziato dal Wellcome Trust concessione WT084655MA.

1. Metodo 1.1 Apparato L&#39;apparato vicoli successiva consiste di quattro successive vicoli linearmente connesse di putativamente crescente carattere ansiogeno ed è in legno verniciato (vedi figura 1 e, per confronto, la Figura 2 di un plus-maze). I dettagli sono riportati nella tabella 1: <table border="1"><tbody><tr><td> Vicolo </td><td> Lunghezza </td><td> Larghezza </td><td> Altezza della parete </td><td> Colore </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 25,0 </td><td> 8.5 </td><td> 25,0 </td><td> Nero </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 25,0 </td><td> 8.5 </td><td> 5.0 </td><td> Grigio </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 25,0 </td><td> 3.5 </td><td> 0.8 </td><td> Bianco </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 25,0 </td><td> 1.2 </td><td> 0.2 </td><td> Bianco</td></tr></tbody></table> Tabella 1. Dettagli di costruzione per l&#39;apparato vicoli successivo. Tutte le misure sono in cm. L&#39;apparato è elevato circa 50 cm dal piano di fissaggio posteriore-estesa di vicolo 1 ad un banco di laboratorio, mensola o altro supporto. L&#39;estremità aperta del vicolo 1 deve essere di almeno 10 cm di distanza dal supporto per evitare che i topi che cercano di salire su di esso. Fornire imbottitura adeguata e ampio sotto i vicoli in caso di un mouse cade. Il razionale per le diverse altezze di muro era: quelli di vicolo 1 bisogno di essere elevato al fine di massimizzare le sue proprietà non ansiogeni. Anche alti pareti creano un ambiente più scuro finché la sorgente di luce di laboratorio non è immediatamente sovraccarico. Le pareti del vicolo 2 sono stati giudicati per esperienza di apparire meno sicuri di vicolo 1 a topi, ma di fornire ancora un certo grado di protezione. Vicoli 3 e 4 avevano appena sufficiente altezza per massimizzare l&#39;ansia, ma ancorafornire una presa se il mouse è in pericolo di cadere. In pratica le cadute sono rare, e non più frequenti che sul plus-maze. L&#39;apparecchio deve essere maneggiato con cura come il vicolo stretto 4 è particolarmente suscettibile a danni. Se fissato saldamente, l&#39;apparecchio non deve vibrare quando il mouse passa sopra. Per minimizzare entrambi questi potenziali problemi, l&#39;apparecchio potrebbe essere dato un rafforzamento extra &quot;spine&quot; abbracciano sua lunghezza sotto il pavimento. Un apparato vicoli consecutiva per i ratti può essere fatta anche. I dettagli sono riportati nella Tabella 2: <table border="1"><tbody><tr><td> Vicolo </td><td> Lunghezza </td><td> Larghezza </td><td> Altezza della parete </td><td> Colore </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 45.0 </td><td> 9.0 </td><td> 29.0 </td><td> Nero </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 45.0 </td><td> 9.0 </td><td> 2.5 </td><td> Grigio </td&gt; </tr><tr><td> 3 </td><td> 45.0 </td><td> 6.7 </td><td> 0.5 </td><td> Bianco </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 45.0 </td><td> 3.5 </td><td> 0.3 </td><td> Bianco </td></tr></tbody></table> Tabella 2. Dettagli di costruzione per l&#39;apparato vicoli consecutiva per i ratti. Tutte le misure sono in cm. 1.2 Procedura * Portare i topi nella stanza sperimentale 5-20 minuti prima del test per garantire che essi siano adatti alla camera e sono a un livello moderato di eccitazione. * Come per tutti gli esperimenti in cui gli animali vengono testati una volta per comportamento spontaneo su un romanzo apparato, è buona norma per i vicoli da dare prima un odore di topo; posto topi non-sperimentali sul apparecchio per alcuni minuti, poi pulire l&#39;apparato come durante l&#39;esperimento principale. L&#39;obiettivo è quello di garantire un leggero ma uniforme sfondo odore del mouse, sulla base del fatto che è impossibile rimuovere totalmente l&#39;odore degli animali (per non parlare di dimostrare che questo è stato raggiunto). * Collocare il mouse alla fine del vicolo chiuso 1 rivolto verso il muro. Avvio timer 1) per la durata complessiva della prova + latenza di entrare armi, e 2) il tempo trascorso in vicolo 1. Quando il mouse si posiziona tutti e 4 i piedi al prossimo vicolo che si considera entrato. Registra il tempo totale trascorso in ogni vicolo (tutti e quattro i piedi) e il numero di voci (sia in avanti che indietro). Registrare il numero di boli fecali e se si è verificato alcun minzione. * Durata della prova: 5 min. (Questo è il tempo normale, se si sa o si sospetta che gli animali si stanno testando non sarà molto in ansia, riduzione del periodo di prova di 3 minuti può essere vantaggioso Si noti che ora si fa uso.). * Un contatore / timer evento combinato un valore inestimabile per questo lavoro e per programmare il calendario di plus-maze. Abbiamo un unico portatile a batteria con quattro pulsanti, ognuno culo<html> ociated con un contatore di eventi e di un timer (1/10 s), costruita nel reparto di Psicologia. Premendo il tasto 1 registra un evento (entrata in vicolo 1) e avvia un timer. Rilasciando il pulsante si ferma il timer. Tasto 2 registra una voce vicolo 2 e inizia vicolo 2 timer, ecc, tuttavia, si deve sottrarre una voce dal numero totale di voci registrate sul vicolo 1 come prima voce è stata avviata dallo sperimentatore, non il mouse. * Per riassumere, per ogni record vicolo: la latenza di entrarvi (a parte vicolo 1 naturalmente), il numero di voci in esso e il tempo totale trascorso lì. * Se un mouse cade, fermare l&#39;orologio e sostituirlo sul vicolo da cui è caduto, di fronte a vicolo 1. * Tutte urina e feci vengono rimossi tra animali e l&#39;apparato pulite con un panno umido, seguita da un tessuto asciutto. E &#39;importante pulire e disinfettare le attrezzature tra ogni mouse testato. contenuto &quot;&gt; * Inoltre, indossare sempre i guanti quando si maneggiano i roditori.

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

In conclusione, il test vicoli successivo produce risultati generalmente simili al plus-labirinto in cui sono fatte le lesioni del complesso ippocampale o corteccia prefrontale mediale, ma è necessario un ulteriore lavoro per valutare gli effetti delle lesioni in altre aree cerebrali pensato per essere collegato ad ansia comportamento simile. Di tanto in tanto, i risultati sul plus-maze differenziano nettamente da quelli nei vicoli successive, un esempio di questo è il nostro lavoro su Kir6.2 topi KO 14. Quando sono stati testati su entrambe le apparecchiature, ci ha permesso di dimostrare che i topi KO non hanno mostrato un cambiamento unidirezionale generale nel comportamento di ansia-simile, dal momento che hanno speso più tempo rispetto ai topi wild-type sulle braccia plus-maze aperti (mostrando meno ansia comportamento-come), ma più tempo in vicolo uno dei vicoli successive (che mostrano una maggiore ansia comportamento simile). Pertanto, l&#39;uso combinato di più-labirinto e successive vicoli può eliminare falsi positivi o falsi negativi, dal momento che le due prove, anche sesimile non sono funzionalmente identici. Come nel plus-maze, iperattività non porta ad un aumento non selettiva del numero di vicoli inseriti. Studi hanno dimostrato che l&#39;organizzazione del comportamento nei topi varia indipendentemente accesso 28. Medial ratti lesionati del setto, che sono stati dimostrato di essere nettamente iperattivo in un test separato in photobeam gabbie di monitoraggio di attività hanno mostrato solo significativamente maggiori entrate in vicoli 2 e 3;. Voci in vicoli 1 e 4 non erano differenti a controlli 5 Così il meno ansioso del setto ratti lesionati erano spola avanti e indietro tra le due aree moderatamente ansiogeni dei vicoli successive, mostrando ciò che l&#39;apparato è stato progettato per rilevare, cioè la loro posizione su uno spettro di ansia. Se fossero stati anche meno ansioso, un aumento di incroci tra vicoli 3 e 4 sarebbe stato visto. Altra prova che l&#39;iperattività non porta a<html> un falso positivo nel test di vicoli successivo è che i ratti con lesioni dell&#39;ippocampo dorsale sono iperattivi, ma non mostrano effetti ansiolitici nei vicoli successivi 7. In un test relativo ad apparecchi lineari, la prova di vicolo nero-bianco, GluRA topi KO femmine mostrano invece un comportamento più ansia-come rispetto ai controlli, mentre i maschi sono simili ai controlli, ma entrambi i sessi sono nettamente iperattivo 3. Kir6.2 topi KO sono stati più attivi nelle loro gabbie a casa rispetto ai topi wild-type, ma hanno mostrato les ansia nei vicoli successive 14. In particolare, 8 KO saltato o è caduto il plus-maze ma nessuno dai vicoli successive. Una limitazione del test vicoli successive come attualmente utilizzato è che, dato il colore variabile del pavimento, sistemi di video-tracciamento sarebbe difficile da usare. Tuttavia, il pavimento potrebbe probabilmente essere verniciato un colore uniforme come colore è soltanto uno dei fattori nel apparato che genera ansia. nt &quot;&gt; Il test vicoli successiva è improbabile, tuttavia, non soffre dei problemi di variabilità associate a simili prove etologicamente based come il plus-maze 10,23, ma la prova di un lotto di animali su entrambi i compiti potrebbe aiutare a chiarire un inconcludente test di plus-maze 30,31,37; un approccio multi-prova può avere vantaggi quando si prova ansia comportamento simile.

Il elevated plus-maze è stato derivato dalla produzione giovanile di Montgomery. 27 Egli ha osservato che i ratti tendono a evitare le braccia aperte di un labirinto, preferendo quelli chiusi. Handley e Mithani e File et al. 22,29 effettuato i primi studi sul design plus-labirinto che usiamo oggi, e nel 1987 Lister pubblicò un progetto per l&#39;utilizzo con i topi 25. Ora è un test standard per trattamenti ansiolitici 23, e diversi protocolli sono stati pubblicati 36,24 <a href="http://www.jove.com/video/1088" target="_blank">http://www.jove.com/video/1088</a> ; <a href="http://currentprotocols.com/protocol/ph0538" target="_blank">http://currentprotocols.com/protocol/ph0538</a> . Il elevated plus-maze consiste di due bracci opposti opposte aperte e chiuse due intersecano in una zona centrale, nella forma di un + in costruzione. Percentuale di tempo speso, e le voci nelle percentuali, le braccia aperte sono un indicedi ansia comportamento simile; l&#39;questi indici più bassi, il più ansioso il mouse è. In alternativa, un mouse che passa la maggior parte del suo tempo tra le braccia chiuse è classificato come ansioso. L&#39;analisi fattoriale ha evidenziato che mentre gli indici di apertura braccio di carico di attività fortemente su un fattore designati come ansia comportamento simile, e le voci del braccio chiusi riflettono in larga misura l&#39;attività motoria, i confini tra i fattori non sono definitivi; anche altri fattori come l&#39;esplorazione, la valutazione dei rischi e decisionali comprendono il profilo del comportamento sul plus-maze, 12,32. Tempo nella zona centrale è più problematico da interpretare, anche se il tempo trascorso qui è stato classificato come &quot;processo decisionale&quot; 32. Anche se i topi passano la maggior parte del loro tempo tra le braccia chiuse, e relativamente poco tempo sulle braccia aperte, in molti studi molto tempo viene speso nella zona centrale dove i bracci si uniscono. Anche se questo può rappresentare il processo decisionale 32, è ambiguo in terms di ansia comportamento simile, sebbene topi altamente ansiosi possa attendere da evitare la zona centrale e le braccia aperte. Un primo tentativo di eliminare questa zona centrale ambiguo era di costruire un labirinto circolare con due quadranti chiusi alternati a due scoperti 33. In questo &quot;zero-maze&quot; un animale è inequivocabilmente in un open (ansiogeno) o una zona chiusa (nonanxiogenic). Tuttavia, anche se utilizzata da più gruppi, non è mai stato così ampiamente adottato come il plus-maze. Nel nostro laboratorio abbiamo scoperto che mentre il plus-maze (e vicoli successivi) ha mostrato effetti ansiolitici in dell&#39;ippocampo ratti lesionati, questi non sono stati visti in un labirinto a zero costruita esattamente come quella di Pastore et al 13. L&#39;apparato vicoli successivo è stato quindi messo a punto con l&#39;obiettivo principale di eliminare la zona centrale del plus-maze. Secondariamente, gli elementi di altri test di ansia comportamento simile stati incorporati. Avviando l&#39;animale nel vicolo 1 allegata, un componente emergere stata introdotta, simile a quella in prova &quot;stovepipe&quot; di pietra 34. Il colore dei vicoli cambia da nero (Vicolo 1) attraverso il grigio (vicolo 2) al bianco (vicoli 3 e 4). Questa ha origine dall&#39;osservazione che i topi preferiscono zone più scure, come esemplificato nella prova di dialogo luce-buio 11. Le pareti dei vicoli successivi anche lentamente diminuiscono in altezza, a differenza del plus-labirinto in cui vi è una brusca transizione tra alte pareti e senza muri. La larghezza dei vicoli diminuisce progressivamente di aumentare gradualmente l&#39;esposizione del mouse per la posizione elevata del labirinto, di concerto con la graduale diminuzione della altezza della parete. Tutti questi fattori sono stati incorporati in un tentativo di aumentare la sensibilità del test ed estendersi su una gamma più ampia di comportamenti ansia-come quello plus-maze fa. L&#39;apparato vicoli successivo fu un tentativo di staffa di una più ampia gamma di linee di base dei comportamenti ansia-simili, nella stessa way che le quattro condizioni di base del test di interazione sociale come originariamente eseguita da File 17 rilevazione permesso di sottili modifiche di comportamenti ansia-like. File, in uno studio degli effetti della nicotina, solo visto differenze nelle due condizioni comportamenti ansia-come intermedio, non il più alto o più basso di 20. Nonché il plus-maze, un altro test ampiamente usato di ansia comportamento simile è la scatola luce-buio 11. I risultati del dialogo luce-buio e il plus-maze non sono sempre correlate con l&#39;altro 35. Si ritiene ora che il comportamento di ansia-come non è un fenomeno unitario 19. Il test vicoli successiva può quindi ben dare risultati diversi da quelli ottenuti utilizzando la casella di chiaro-scuro, e in teoria anche dal plus-labirinto, dal momento che è sottilmente diverso da quest&#39;ultimo, tuttavia, i risultati tra il primo e il secondo ci si aspetterebbe di essere sostanzialmente simile. 8,21 Può essere che esponendo un animale al plus-maze seguito dai vicoli successive elimina la variazione del tipo di ansia comportamento simile misurato se il test plus-maze viene ripetuto. Un esempio di questo è stato visto quando le plus-labirinto e successive vicoli sono stati usati per testare mediale prefrontale topi cortex-lesionati e controllo in maniera temporalmente controbilanciato. I topi lesionati mostravano comportamenti ansia-come significativamente più bassa in entrambi i tipi di apparecchi, indipendentemente se si è verificato con prove vicoli successive o il plus-maze prima 15. È anche possibile che l&#39;uso sequenziale dei plus-maze e successive vicoli potrebbe compromettere la sensibilità ai farmaci ansiolitici osservati quando il test plus-maze viene ripetuto. 18 I ratti possono essere testati su una versione più grande dei vicoli successive. La procedura è esattamente tegli stesso che per i topi. Come nel caso di test di hyponeophagia, la precedente esperienza generale degli animali, a parte labirinto elevata ansia-come test comportamento di per sé, può influenzare il risultato. 1,16

the successive alleys test of anxiety in mice and rats

Il plus-maze è stato derivato dai primi lavori di Montgomery. Egli ha osservato che i ratti tendono a evitare le braccia aperte di un labirinto, preferendo quelli chiusi. Handley, Mithani e File<em&gt; Et al.</em&gt; Eseguito i primi studi sul design plus-labirinto che usiamo oggi, e nel 1987 Lister pubblicò un progetto per l&#39;utilizzo con i topi. Tempo speso, e le voci in, le braccia aperte sono un indice di ansia, il più basso di questi indici, il più ansioso il mouse è. In alternativa, un mouse che passa la maggior parte del suo tempo tra le braccia chiuse è classificato come ansioso. Uno dei problemi del plus-maze è che, mentre il tempo speso, e nelle voci, le braccia aperte è una misura abbastanza inequivocabile di ansia, tempo nella zona centrale è più difficile da interpretare, anche se il tempo trascorso qui è stato classificato come &quot;processo decisionale&quot;. In molti test tempo area centrale è una parte considerevole del tempo totale di prova. Pastore<em&gt; Et al.</em&gt; Prodotto un design ingegnoso per eliminare la zona centrale, che hanno chiamato il &quot;labirinto zero&quot;. Tuttavia, anche se utilizzata da più gruppi, non è mai stato così ampiamente adottato come il plus-maze. Nel presente articolo descrivo una modifica del disegno plus-maze che elimina non solo la zona centrale ma incorpora anche elementi di altre prove ansia, come ad esempio la scatola di luce-buio e prove emergere. Si tratta di una serie lineare di quattro vicoli, ogni hanno crescenti proprietà ansiogeni. Esso ha dato risultati simili al plus-maze in generale. Anche se non può essere più sensibile del plus-maze (sono necessari ulteriori dati prima che una conclusione può essere raggiunta a questo punto), fornisce una conferma utile di risultati di plus-labirinto che sarebbe utile quando, per esempio, solo un solo esempio di un topo mutante era disponibile, come, per esempio, nei programmi mutagenesi ENU-based.

Ratti, complete delle lesioni dell&#39;ippocampo citotossici ventrali o dorsali hanno mostrato effetti ansiolitici moderati o parziale sul plus-labirinto, mentre ventrali, ma non dorsale, ratti lesionati hanno mostrato effetti ansiolitici nei vicoli successive 6,26. Tuttavia, in un altro laboratorio, elettrolitici lesioni dell&#39;ippocampo dorsale non hanno avuto effetti ansiolitici 35, questo non è improbabile che l&#39;ex studio ottenuto effetti ansiolitici solo parziale con le lesioni citotossiche dorsali, ed è l&#39;ippocampo ventrale che è pensato per svolgere un ruolo importante nella ansia comportamento simile 4,7. Le lesioni del setto mediale anche ridotto l&#39;ansia comportamento simile in ratti nei vicoli successivi 5. Al contrario, il labirinto a zero non ha rilevato alcun effetto ansiolitico di completo citotossici lesioni dell&#39;ippocampo 13. Topi C57BL/6JolaHsd trascorso un tempo più lungo sul più ansiogeno dei vicoli successivi (vicolo 4) rispetto ai topi 129S2/SvHsd 9.Al contrario, una chiara differenza ansia-come comportamento non è stato visto sul plus-maze, dove 129 topi trascorso più tempo in zona centrale, di conseguenza anche visto in un altro ceppo 129, 129/SvEvTac 2. Nel lavoro inedito su topi con lesioni complete, dorsale o ventrale dell&#39;ippocampo, c&#39;è stata una tendenza generale a osservare i risultati ansiolitico di lesioni complete. Tuttavia, questi sono stati in nessun posto vicino come contrassegnato come nei test hyponeophagia, dove l&#39;effetto ansiolitico di lesioni complete o ventrale era forte e affidabile. Ad esempio, i topi lesionati completi passato meno tempo nel chiuso braccia del plus-labirinto, ma non più a cielo aperto. Il test vicoli successivo è stato fatto due volte, solo sul secondo processo erano lì significativi effetti ansiolitici delle lesioni complete. Entrambi i vicoli successivi e il plus-maze fanno richieste sui processi di orientamento, in modo che gli animali possano essere lesionati prendendo più tempo per &quot;ottenere i loro cuscinetti&quot; e, quindi, il tempo a disposizione per dimostrare ansioliticoeffetti è ridotta. Quando i topi con lesioni della corteccia prefrontale mediale sono stati testati sui plus-labirinto e successive vicoli apparati con l&#39;ordine delle prove è controbilanciato, non vi è stato alcun effetto di cui è stato testato prima, ma chiari effetti ansiolitici erano presenti in entrambi i test rispetto ai controlli 15 (vedi figure 3 e 4). I topi lesionati fatte molte più voci in ogni vicolo dei vicoli successive rispetto ai controlli, e le braccia aperte del plus-maze, anche se è interessante notare voci negli chiuse braccia di quest&#39;ultimo non erano più alti rispetto ai controlli. In campo aperto i topi lesionati erano significativamente più attivo rispetto ai controlli, e marginalmente così in fotocellule gabbie di attività. Il test vicoli successiva ha anche dimostrato di essere sensibili agli effetti del clordiazepossido farmaco ansiolitico. In inedito lavoro di 12 mg / kg ipchlodiazepoxide (CDZP) ha dimostrato di essere attivo in topi maschi NIH, come usati da Lister nella descrizione originale del plus-labirinto per topi 25. I topi trattati con CDZP passato meno tempo rispetto ai controlli in Vicolo 1 (158 ± 12,1 vs 212 ± 14,8 s, p = 0,0108, e reso più voci in vicoli 2-4 (cfr. tabella 3). <table border="1"><tbody><tr><td> Vicolo </td><td> Controllare </td><td> CDZP </td><td> P </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 7.2 ± 1.2 </td><td> 18.4 ± 2.0 </td><td> 0.0001 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 1,0 (0-3,5) </td><td> 5,0 (2,5-12,3) </td><td> 0,0277 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0.0 (0.0-1.0) </td><td> 2,0 (0,0-5,0) </td><td> 0.0604 </td></tr></tbody></table> Tabella 3. Voci in vicoli 2-4 dell&#39;apparato vicoli successiva di topi trattati con 12 mg di. / Kg ip di CDZP o controlli Valori sono mediane e (range interquartile) o significa ± SEM a seconda che i dati erano non-parametrico o parametrico; Mann-Whitney U test o test t rispettivamente. N = 11/group. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/2705/2705fig1.jpg" /> Figura 1. Il mouse successiva apparato vicoli. E &#39;realizzato in legno dipinto e viene bloccato sulla panca. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/2705/2705fig2.jpg" /> Figura 2. Il mouse plus-maze. È fatto di legno nero verniciato con pareti in perspex trasparente sulle braccia chiusi. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/2705/2705fig3.jpg" /> Figura 3. L&#39;effetto ansiolitico di lesioni della corteccia prefrontale mediale (m) sul plus-maze compared ai controlli (C). * = p &lt;0,05 vs C m. I dati originariamente pubblicati nel riferimento 15. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/2705/2705fig4.jpg" /> Figura 4. L&#39;effetto ansiolitico di lesioni della corteccia prefrontale mediale (m) sui vicoli successive rispetto ai controlli (C). * = P &lt;0.05 vs C m. I dati originariamente pubblicati nel riferimento 15.

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The Successive Alleys Test of Anxiety in Mice and Rats

Le misure di plus-maze ansia comportamento simile nei roditori. Ci sono due opposte chiuso e due opposte le braccia aperte; roditori ansiose evitano le braccia aperte. La zona centrale è né completamente aperto né chiuso, così il tempo trascorso qui è ambigua e difficile da interpretare. Qui una modifica del protocollo plus-maze eliminando quest&#39;area è descritta.

Le successive Vicoli test di ansia nei topi e nei ratti

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones.  ...

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Research

JoVE Journal

Behavior

21.5K Views.  University of Oxford. Le misure di plus-maze ansia comportamento simile nei roditori. Ci sono due opposte chiuso e due opposte le braccia aperte; roditori ansiose evitano le braccia aperte. La zona centrale è né completamente aperto né chiuso, così il tempo trascorso qui è ambigua e difficile da interpretare. Qui una modifica del protocollo plus-maze eliminando quest'area è descritta.

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Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

Contestuali e Cued paura condizionata test utilizzando un sistema di video Analizzare in topi

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Ricerca

Comportamento

Using the Threat Probability Task to Assess Anxiety and Fear During Uncertain and Certain Threat

Fear of certain threat and anxiety about uncertain threat are distinct emotions with unique behavioral, cognitive-attentional, and neuroanatomical components. Both anxiety and fear can be studied in the laboratory by measuring the potentiation of the startle reflex. The startle reflex is a defensive reflex that is potentiated when an organism is threatened and the need for defense is high. The startle reflex is assessed via electromyography (EMG) in the orbicularis oculi muscle elicited by brief, intense, bursts of acoustic white noise (i.e., &#8220;startle probes&#8221;). Startle potentiation is calculated as the increase in startle response magnitude during presentation of sets of visual threat cues that signal delivery of mild electric shock relative to sets of matched cues that signal the absence of shock (no-threat cues). In the Threat Probability Task, fear is measured via startle potentiation to high probability (100% cue-contingent shock; certain) threat cues whereas anxiety is measured via startle potentiation to low probability (20% cue-contingent shock; uncertain) threat cues. Measurement of startle potentiation during the Threat Probability Task provides an objective and easily implemented alternative to assessment of negative affect via self-report or other methods (e.g., neuroimaging) that may be inappropriate or impractical for some researchers. Startle potentiation has been studied rigorously in both animals (e.g., rodents, non-human primates) and humans which facilitates animal-to-human translational research. Startle potentiation during certain and uncertain threat provides an objective measure of negative affective and distinct emotional states (fear, anxiety) to use in research on psychopathology, substance use/abuse and broadly in affective science. As such, it has been used extensively by clinical scientists interested in psychopathology etiology and by affective scientists interested in individual differences in emotion.

Potentiation of the startle reflex is measured via electromyography of the orbicularis oculi muscle during low (uncertain) and high (certain) probability electric shock threat in the Threat Probability Task. This provides an objective measure of distinct negative emotional states (fear/anxiety) for research on psychopathology, substance use/abuse, and broad affective science.

Utilizzando la Task minaccia Probabilità per valutare ansia e paura durante Threat incerto e Certain

Fear of certain threat and anxiety about uncertain threat are distinct emotions with unique behavioral, cognitive-attentional, and neuroanatomical ...

Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of the most commonly used platforms to measure behaviors in animal models. It is a fast and relatively easy test that provides a variety of behavioral information ranging from general ambulatory ability to data regarding the emotionality of the subject animal. As it relates to rodent models, the procedure allows the study of different strains of mice or rats both laboratory bred and wild-captured. The technique also readily lends itself to the investigation of different pharmacological compounds for anxiolytic or anxiogenic effects. Here, a protocol for use of the open field maze to describe mouse behaviors is detailed and a simple analysis of general locomotor ability and anxiety-related emotional behaviors between two strains of C57BL/6 mice is performed. Briefly, using the described protocol we show Wild Type mice exhibited significantly less anxiety related behaviors than did age-matched Knock Out mice while both strains exhibited similar ambulatory ability.

A protocol is provided to use an Open Field Maze to access general locomotor activity, anxiety and emotionality in a laboratory mouse model.

L&#39;uso del campo aperto Maze misurare Locomotore e ansia-come comportamento nei topi

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure multiple dimensions of unconditioned behavior in small laboratory mammals (e.g., mice, rats, tree shrews and small primates). This paradigm is a valuable alternative for the use of a behavioral test battery, since a broad behavioral spectrum of an animal&#8217;s behavioral profile can be investigated in one single test.
The apparatus consists of a box, representing the &#8216;protected&#8217; area, separated from a group compartment. A board, on which small cylinders are staggered in three lines, is placed in the center of the box, representing the &#8216;unprotected&#8217; area of the set-up. The cognitive abilities of the animals can be measured by baiting some cylinders on the board and measuring the working and reference memory. Other unconditioned behavior, such as activity-related-, anxiety-related- and social behavior, can be observed using this paradigm. Behavioral flexibility and the ability to habituate to a novel environment can additionally be observed by subjecting the animals to multiple trials in the mHB, revealing insight into the animals&#8217; adaptive capacities.
Due to testing order effects in a behavioral test battery, na&#239;ve animals should be used for each individual experiment. By testing multiple behavioral dimensions in a single paradigm and thereby circumventing this issue, the number of experimental animals used is reduced. Furthermore, by avoiding social isolation during testing and without the need to food deprive the animals, the mHB represents a behavioral test system, inducing if any, very low amount of stress.

This protocol describes the modified hole board, which is a behavioral test set-up that comprises the characteristics of an open field and a traditional hole board. This set-up enables the differential analysis of unconditioned behavior of small laboratory mammals as well as the analysis of cognitive abilities.

The Hole Consiglio Modified - Behavior, Cognition e l&#39;interazione sociale in topi e ratti di misura

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Determining Ultrasonic Vocalization Preferences in Mice using a Two-choice Playback Test

Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, sex, condition, and genetic background of the emitting animal. Although many studies have characterized these differences, whether receiver mice can discriminate among objectively different USVs and show preferences for particular sound traits remains to be elucidated. To determine whether mice can discriminate between different characteristics of USVs, a playback experiment was developed recently, in which preference responses of mice to two different USVs could be evaluated in the form of a place preference.
First, USVs from mice were recorded. Then, the recorded USVs were edited, trimmed accordingly, and exported as stereophonic sound files. Next, the USV amplitudes generated by the two ultrasound emitters used in the experiment were adjusted to the same sound pressure level. Nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitters were used to play the USVs back. Finally, to investigate the preference of subject mice to selected USVs, pairs of two differing USV signals were played back simultaneously in a two-choice test box. By repeatedly entering a defined zone near an ultrasound emitter and searching the wire mesh in front of the emitter, the mouse reveals its preference for one sound over another. This model allows comparing the attractiveness of the various features of mouse USVs, in various contexts.

Ultrasonic vocalizations (USVs) in mice differ depending on age, sex, condition, and genetic background. Using two ultrasound emitters broadcasting simultaneously in different locations, this two-choice test can evaluate murine recognition and preference responses to different characteristics of USVs.

Determinazione Preferenze ultrasuoni vocalizzazione nei topi utilizzando un test di riproduzione a due scelta

Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations supportive behavior of other people as well as positive social relationships can act as powerful resources to cope with stress. In order to study the interplay between these variables, this protocol describes two effective experimental manipulations of social relationships and supportive behavior in the laboratory. In the present article, these two manipulations are implemented in the Trier Social Stress Test (TSST)&#8212;a standard stress induction paradigm in which participants are subjected to a simulated job interview. More precisely, we propose (a) a manipulation of the relationship between different protagonists in the TSST by making a shared social identity salient and (b) a manipulation of the behavior of the TSST-selection committee, which acts either supportively or unsupportively. These two experimental manipulations are designed in a modular fashion and can be applied independently of each other but can also be combined. Moreover, these two manipulations can also be integrated into other stress protocols and into other standardized social interactions such as trust games, negotiation tasks, or other group tasks.

Previous research on the social dimension of stress has focused on two important variables: social identity and social support. This protocol introduces an effective experimental manipulation of these two social variables and describes their implementation in a standard stress induction paradigm (Trier Social Stress Test).

La dimensione sociale dello stress: manipolazioni sperimentali di sostegno sociale e identità sociale nella Trier Social Stress Test

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article describes a rodent version of the PVT&#8212;termed the &#34;rPVT&#34;&#8212;that measures similar aspects of attention (i.e., performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention). Data are presented that demonstrate both the short- and long-term usefulness of the rPVT when employed with laboratory rats. Rats easily learn the rPVT, and learning to perform the basic procedure takes less than two weeks of training. Once acquired, rat performances in the rPVT show a high degree of similarity to these same performance measures in the human PVT, including similarities in, lapses in attention, reaction times, vigilance decrements across session time (i.e., the human &#34;time-on-task&#34; effects), and the response-stimulus interval (RSI) effect described for humans. Thus the rPVT can be an extremely valuable tool for assessing the effects of a wide range of variables on sustained attention quite similar to human PVT performances, and thus can be useful for developing novel treatments for neurobehavioral dysfunctions.

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

A rat version of the human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is described that measures aspects of attention similar to those measured with the human PVT, including aspects of human vigilance such as performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention.

Il roditore psicomotorio vigilanza Test (rPVT): un metodo per la valutazione delle prestazioni neurocomportamentali in ratti e topi

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little research to reveal the possible mechanisms behind these effects. To investigate the effect of acupuncture on epilepsy and sleep, several issues need to be addressed. The first is to identify the acupoints, which correspond between humans, rats, and mice. Furthermore, the depth of insertion of the acupuncture needle, the degree of needle twist in manual needle acupuncture, and the stimulation parameters for electroacupuncture (EA) need to be determined. To evaluate the effects of acupuncture on epilepsy and sleep, a feasible model of epilepsy in rodents is required. We administer pilocarpine into the left central nucleus of the amygdala (CeA) to simulate focal temporal lobe epilepsy (TLE) in rats. Intraperitoneal (IP) injection of pilocarpine induces generalized epilepsy and status epilepticus (SE) in rats. Five IP injections of pentylenetetrazol (PTZ) with a one-day interval between each injection successfully induces spontaneous generalized epilepsy in mice. Recordings of electrocorticograms (ECoGs), electromyograms (EMGs), brain temperature, and locomotor activity are used for sleep analysis in rats, while ECoGs, EMGs, and locomotor activity are employed for sleep analysis in mice. ECoG electrodes are implanted into the frontal, parietal, and contralateral occipital cortices, and a thermistor is implanted above the cerebral cortex by stereotactic surgery. EMG electrodes are implanted into the neck muscles, and an infrared detector determines locomotor activity. The criteria for categorizing vigilance stages, including wakefulness, rapid eye movement (REM) sleep, and non-REM (NREM) sleep are based on information from ECoGs, EMGs, brain temperature, and locomotor activity. Detailed classification criteria are stated in the text.

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms ECoGs and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

This paper demonstrates the performance of acupuncture, epilepsy models, and the analysis of sleep in rodents. The acupuncture procedure and the identification of acupoints are described. Pilocarpine or pentylenetetrazol (PTZ) is used to induce epilepsy. Electrocorticogram (ECoG), electromyogram (EMG), brain temperature, and locomotor activity recordings are employed for sleep analysis.

Manipolazione di epilettiforme Electrocorticograms (ECoGs) e sonno in ratti e topi con l&#39;agopuntura

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little ...

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is fairly simple and can be completed over 3 days: habituation day, training day, and testing day. During training, the mouse is allowed to explore 2 identical objects. On test day, one of the training objects is replaced with a novel object. Because mice have an innate preference for novelty, if the mouse recognizes the familiar object, it will spend most of its time at the novel object. Due to this innate preference, there is no need for positive or negative reinforcement or long training schedules. Additionally, the ORT can also be modified for numerous applications. The retention interval can be shortened to examine short-term memory, or lengthened to probe long-term memory. Pharmacological intervention can be used at various times prior to training, after training, or prior to recall to investigate different phases of learning (i.e., acquisition, early or late consolidation, or recall). Overall, the ORT is a relatively low-stress, efficient test for memory in mice, and is appropriate for the detection of neuropsychological changes following pharmacological, biological, or genetic manipulations.

The object recognition test (ORT) is a simple and efficient assay for evaluating learning and memory in mice. The methodology is described below.

Test di riconoscimento di oggetto romanzo per l'indagine di apprendimento e memoria in topi

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

Reducing State Anxiety Using Working Memory Maintenance

The purpose of this protocol is to explain how to examine the relationship between working memory processes and anxiety by combining the Sternberg Working Memory (WM) and the threat of shock paradigms. In the Sternberg WM paradigm, subjects are required to maintain a series of letters in the WM for a brief interval and respond by identifying whether the position of a given letter in the series matches a numerical prompt. In the threat of shock paradigm, subjects are exposed to alternating blocks where they are either at risk of receiving unpredictable presentations of a mild electric shock or are safe from the shock. Anxiety is probed throughout the safe and threat blocks using the acoustic startle reflex, which is potentiated under threat (Anxiety-Potentiated Startle (APS)). By conducting the Sternberg WM paradigm during the threat of shock and probing the startle response during either the WM maintenance interval or the intertrial interval, it is possible to determine the effect of WM maintenance on APS.

This protocol demonstrates how to measure anxiety-potentiated startle during the Sternberg Working Memory paradigm.

Ridurre l&#39;ansia di Stato utilizzando la manutenzione della memoria di lavoro

The purpose of this protocol is to explain how to examine the relationship between working memory processes and anxiety by combining the Sternberg Working ...