Il finanziamento fornito dal National Institutes of Health (NIH) per R01-HL088424; Veterans merito affari premio a PPY.

1. Sponge Preparazione <ol><li> Spugne idrato di agitazione per una notte a 0,9% (w / v) soluzione acquosa di cloruro di sodio. </li><li> Sterilizzare in autoclave spugne idratati loro. Per 75 mL, autoclave per 25 minuti a 121 ° C. </li></ol> Nota: spugne caricamento con un trattamento come descritto di seguito è opzionale. <ol start="3"><li> In una cappa sterile con strumenti sterili, prendere una spugna dalla soluzione utilizzando una pinzetta. Comprimere la spugna con le pinzette e usare una punta vuoto per rimuovere la soluzione più possibile dalla spugna. Posizionare la spugna ben strizzato in un piatto di coltura tissutale, facendo attenzione a lasciare uno spazio tra le spugne. Più pozzetti può essere utilizzato per separare diversi trattamenti. </li><li> Pipettare la soluzione di trattamento direttamente sul centro di una spugna. Premere delicatamente la spugna con la punta della pipetta dopo la soluzione è stata posta sulla spugna, questo aiuta la spugna assorbire la soluzione. Nota: Il 6 millimetridiametro da 2,75 mm di spessore spugne che impieghiamo in grado di contenere un massimo di 25 pl. </li><li> Una volta che tutte le spugne sono stati caricati, la piastra sono in possono essere conservati in ghiaccio fino a che vengono impiantati nel topo. </li></ol> 2. Procedura chirurgica <ol><li> Opportunamente anestetizzare animali e amministrare pre-emptive analgesico. L&#39;intera procedura durerà circa 20 minuti per ogni animale. Per un mouse 30 g di 1,5 litri al minuto di ossigeno con il 1,5% isoflurano viene usato per indurre e mantenere l&#39;anestesia. Quando animale non è più sensibile alla prova reflex pinch, posto in cono in posizione supina. Utilizzare un rasoio elettrico per radere uno da 1 pollice da 1 pollice area sul lato inferiore ventrale sotto la gabbia toracica. Pulire taglio di capelli. </li><li> Sterilizzare l&#39;area rasata pulendo con Betadine seguita dal 70% di alcol. Ripetere questa betadine-alcol pulizia tre volte. </li><li> Tenendo la pelle ha insegnato, usare il bisturi per fare una incisione verticale 1,5-2 volte il diametrometro delle spugne da inserire, essendo attenzione a non tagliare attraverso la cavità del corpo. </li><li> Utilizzare una pinzetta per tenere il bordo della pelle e lentamente cominciato a separare la pelle dal muscolo su entrambi i lati dell&#39;incisione usando forbici Metzembaum. La tasca dovrebbe attraversare la larghezza del mouse e la gabbia toracica alle gambe posteriori. </li><li> Utilizzare una pinzetta per raccogliere la spugna primo essere messi in animali da pizzicandola dai lati. Trasferire la spugna ad una pinzetta rettilinei in modo che si svolge dalla parte superiore e inferiore. </li><li> Utilizzare pinzette per tenere il bordo della pelle e sollevare in modo che la spugna può essere inserito. Inserire lentamente la spugna cercando di evitare di toccare la pelle o sotto il muscolo, come la spugna sarà difficile muoversi una volta che ha toccato i tessuti. Ripetere l&#39;operazione per tutte le spugne. </li><li> Una volta che tutte le spugne sono state inserite, posto due o tre suture per chiudere l&#39;incisione. Utilizzare un paio di pinzette per tenere entrambi i lati della incisione insieme e infilare il Suturi attraverso entrambi gli strati di pelle. Stringere il primo tiro quel tanto che basta per chiudere i bordi cutanei. Termina il nodo quadrato con un altro tiro dalla direzione opposta, questa volta tirando il nodo stretto. Poi legare due nodi più quadrati per terminare la sutura (figura 2). Porre suture supplementari per chiudere l&#39;incisione intero. Altri metodi di incollaggio della ferita può essere utilizzato come dermabond, clip ferita, o graffette. </li><li> Rimuovere animale dal sistema per anestesia e controllare, mentre la coscienza è ripreso. Animal dovrebbe iniziare rapidamente deambulazione e tornare al pre-op mobilità. Assicurarsi che siano in grado di raggiungere sufficiente cibo e acqua. Alcuni alimenti inumidito può essere collocato sul fondo della gabbia contribuire al recupero. Continuare a monitorare giorno per animale segni di sofferenza o disagio, e controllare il sito di incisione per l&#39;infezione, infiammazione e deiscenza. Prendere misure adeguate se eventuali complicazioni al recupero si trovano. </li></ol> 3. Iniezione opzionale <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Nota: Una volta che le spugne sono stati impiantati nella animale possono essere iniettati con una soluzione di cellule, farmaci, fattori di crescita ecc Ciò consente di analisi degli effetti della sostanza iniettata durante i tempi di consegna diversi e amministrazione regimi. Se le iniezioni vengono effettuate un controllo deve essere sempre utilizzato. <ol><li> Per iniettare la spugna con una soluzione desiderata, prima di determinare la quantità di sostanza da somministrare il mouse. La sostanza deve essere concentrata in modo che il volume di iniezione è inferiore alla metà del volume totale della spugna può contenere. </li><li> Preparare una siringa per l&#39;iniezione (per i topi che usiamo un 28 ago G). </li><li> Posizionare l&#39;animale a ricevere le iniezioni in anestesia. </li><li> Quando l&#39;animale non risponde più alla prova pinch l&#39;iniezione può essere dato. </li><li> Per dare l&#39;iniezione spingere l&#39;ago con un angolo di 45 ° completa la cute al centro della spugna. Poi spingere l&#39;ago nella spugna solo andando a metà stradaattraverso il suo spessore. L&#39;obiettivo è quello di iniettare nel centro esatto della spugna. </li><li> Per verificare che l&#39;ago è in spugna, sollevare lentamente l&#39;ago verticalmente. Se l&#39;ago è in spugna, la spugna deve spostarsi con l&#39;ago. </li><li> Iniettare lentamente nella spugna e rimuovere l&#39;ago. Se ci sono spugne multiple che richiedono iniezioni è possibile che parte del fluido iniettato fuoriuscirà dei precedenti siti di iniezione. </li></ol> 4. Sponge rimozione Nota: Durante la rimozione spugna, gestire la spugna con estrema cautela. Evitare di penetrare la spugna con gli strumenti chirurgici e prevenire il sanguinamento eccessivo nella spugna evitando le arterie più importanti di tutto il tessuto circostante. <ol><li> Dopo che l&#39;animale è eutanasia, rimuovere la spugna tenendo la pelle con una pinzetta e fare un&#39;incisione chiudere la spugna. </li><li> Separare con attenzione le spugne dalla capsula che circonda un<html> nd evitare la raccolta tessuto aggiuntivo che circonda la spugna. Per i saggi, quali la somministrazione di farmaci o di morfometria, meno precisione è necessaria per escissione. </li></ol> 5. Risultati rappresentativi Spugne rimossi possono essere immagazzinati in condizioni diverse a seconda del tipo di analisi che verrà effettuata. Per sezionamento, le spugne recuperati possono essere incorporati in un mezzo per congelamento come temperatura di taglio ottimale (OCT) composto o collocato in formalina al 10% per l&#39;incorporamento e sezionamento in blocchi di paraffina (Figura 3A e B). I migliori risultati si ottengono quando il sezionamento la spugna viene tagliato a metà lungo il diametro e incorporato tagliare superficie basso (Figura 4A e B). Sezioni della spugna deve essere presa in modo che intera larghezza della spugna è presente. Figura 3A mostra due spugne, la spugna sinistra è stato incorporato / sezionato in modo errato e la spugna destra è stato elaborato correttamente. ent &quot;&gt; Per l&#39;analisi, spugne può essere collocato in un tubo Eppendorf e conservati a -20 ° C fino al momento per l&#39;elaborazione Per RNA e quantitativa in tempo reale spugne analisi PCR deve essere collocato in un tubo Eppendorf, istantaneamente congelati e conservati a. - 80 ° C. Inoltre, un conservante RNA, come RNAlater da QIAGEN, può essere usato per stabilizzare l&#39;RNA per uno stoccaggio sicuro alle alte temperature. fluido della ferita può essere raccolti premendo le spugne su un tubo, e mettendo in comune il fluido dal spugne multiplo per ottenere un campione rappresentativo. cellule vive, quali fibroblasti, macrofagi e linfociti, possono anche essere estratto dalle spugne. Dopo la rimozione dall&#39;animale, spugne può essere posto in un mezzo appropriate per il tipo desiderato di cellule. spugne possono essere trattati per liberare le cellule fisiche (cioè camminando) o enzimatica (ad esempio collagenasi) metodi. <img alt="Figura 1." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig1.jpg" /> Figura 1. DisidratazioneTed PVA dischi di pan di Spagna in tre diverse dimensioni. <img alt="Figura 2." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig2.jpg" /> Figura 2. Immagine del mouse guarigione delle ferite modello che mostra la posizione della ferita laterale e quattro spugne PVA. <img alt="Figura 3." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig3.jpg" /> Figura 3. (A) H &amp; E colorazione a 4x e (B) colorazione tricromica a 10x di spugne paraffina sezionati embedded. <img alt="Figura 4." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig4.jpg" /> Figura 4. (A) Immagine di taglio spugna a metà lungo il diametro. (B) PVA mezzo spugna, incorporato la parte tagliata verso il basso in ottobre

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	<li>Efron, D. T., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+sponge+models.">Subcutaneous sponge models.</a> Methods Mol. Med. 78, 83-93 (2003).</li><li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue.">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair. 8, 83-96 (2000).</li><li>Sprugel, K. H., McPherson, J. M., Clowes, A. W., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+growth+factors+in+vivo.+I.+Cell+ingrowth+into+porous+subcutaneous+chambers.">Effects of growth factors in vivo. I. Cell ingrowth into porous subcutaneous chambers.</a> Am. J. Pathol. 129, 601-613 (1987).</li><li>Alaish, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+polyvinyl+alcohol+sponge+and+expanded+polytetrafluoroethylene+subcutaneous+implants+as+models+to+evaluate+wound+healing+potential+in+human+beings.">Comparison of the polyvinyl alcohol sponge and expanded polytetrafluoroethylene subcutaneous implants as models to evaluate wound healing potential in human beings.</a> Wound Repair. 3, 292-298 (1995).</li><li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+wound+repair.">Animal models for wound repair.</a> Arch. Dermatol. Res. 290, 1-11 (1998).</li><li>Alfaro, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=sFRP2+suppression+of+bone+morphogenic+protein+(BMP)+and+Wnt+signaling+mediates+mesenchymal+stem+cell+(MSC)+self-renewal+promoting+engraftment+and+myocardial+repair.">sFRP2 suppression of bone morphogenic protein (BMP) and Wnt signaling mediates mesenchymal stem cell (MSC) self-renewal promoting engraftment and myocardial repair.</a> J. Biol. Chem. 285, 35645-35653 (2010).</li><li>Andrade, S. P., Ferreira, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sponge+implant+model+of+angiogenesis.">The sponge implant model of angiogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 467, 295-304 (2009).</li><li>Diegelmann, R. F., Lindblad, W. J., Cohen, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subcutaneous+implant+for+wound+healing+studies+in+humans.">A subcutaneous implant for wound healing studies in humans.</a> J. Surg. Res. 40, 229-237 (1986).</li><li>Efron, D. T., Most, D., Shi, H. P., Tantry, U. S., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+of+studying+wound+healing.">A novel method of studying wound healing.</a> J. Surg. Res. 98, 16-20 (2001).</li><li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies.">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li></ol>

Non abbiamo nulla da rivelare.

<p class="jove_content"&gt; Il modello spugna di guarigione delle ferite ha molteplici varianti, che può essere eseguita in molte specie diverse compresi gli esseri umani e le spugne possono anche essere impiantati dorsalmente<sup&gt; 1,2,8</sup&gt;. Per studi su esseri umani e alcune altre specie, spugne può essere necessario essere collocati in un tubo di silicone porosa per impedire la spugna venga incapsulato e per consentire facilità di rimozione<sup&gt; 4,8</sup&gt;. La posizione della spugna impianto può essere modificata in base ai risultati desiderati e l&#39;abilità del tecnico. L&#39;impianto dorsale può permettere le spugne di muoversi sotto la pelle, mentre gli impianti ventrali sono più difficili a causa della probabilità di tagliare fino alla cavità addominale. Le spugne può essere impostato con un catetere in modo che la somministrazione di farmaci è costante e controllata, eliminando la necessità di iniezioni multiple<sup&gt; 9</sup&gt;. Più piccole, spugne tubolari possono anche essere iniettato attraverso un ago<sup&gt; 8</sup&gt;. Spugne composizione non è limitata a solo alcool polivinilico. Essi possono essere preparati da materiali diversi esclusivamente o in combinazione<sup&gt; 7</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; E &#39;fondamentale per la preparazione e la collocazione in spugna l&#39;animale ad essere coerenti e ben compreso. Se spugne sono ricavati da fogli devono essere di peso simile per la comparabilità. Se la spugna deve essere caricato con cellule o un trattamento, la quantità collocato in ogni spugna deve essere esatto. Il processo di guarigione può variare in base alla posizione del posizionamento della spugna nell&#39;animale e guarigione diminuisce all&#39;aumentare della distanza dal all&#39;aumentare testa<sup&gt; 1,10</sup&gt;.</p

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> PVA Sponge </td><td> Medtronic </td><td> CF120 </td><td> Le dimensioni e porosità della spugna dipende dell&#39;esperimento </td></tr><tr><td> Dimensioni lama Scalpel 15 </td><td> Mediale BD </td><td> 371115 </td><td></td></tr><tr><td> Metzembaum forbici </td><td> Thermo Scientific </td><td> 79-211 </td><td></td></tr><tr><td> Pinza emostatica </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> 13004-14 </td><td></td></tr><tr><td> Porta aghi </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> 12004-16 </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 nylon sutura </td><td> Ethilon </td><td> 698 </td><td></td></tr><tr><td> Ottobre compound </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr></tbody></table>

the polyvinyl alcohol sponge model implantation

La guarigione delle ferite è un complicato processo multistep che coinvolge molti tipi di cellule, fattori di crescita e composti 1-3. A causa di questa complessità, studi di guarigione delle ferite è più completa se effettuata nel vivo. Ci sono molti modelli in vivo disponibile a studiare la guarigione delle ferite acute, tra cui incisionale, escissionale, spazio morto e ustioni. Modelli di spazio morto sono artificiali, impianti porosi che vengono utilizzati per studiare la formazione del tessuto e gli effetti delle sostanze sulla ferita. Alcuni dei modelli comunemente usati spazio morto includono alcool polivinilico (PVA) spugne, cilindri di acciaio rete metallica, politetrafluoroetilene espanso (ePTFE) materiali, e il 1,2 Cellstick. Ogni modello spazio morto ha i suoi limiti basate sulla composizione materiale e il suo impianto metodi. Il filo di acciaio modello maglia cilindro ha una fase di latenza di infiltrazione dopo l&#39;impianto e richiede una quantità di tempo prima della formazione di tessuto di granulazione Begins 1. Le fasi successive di guarigione delle ferite è meglio analizzati utilizzando i 1,4 ePTFE modello. Il Cellstick è una spugna di cellulosa in un modello tubo in silicone che è tipicamente usata per studiare ferite chirurgia umana e avvolto fluido 2. La spugna PVA è limitata a studi acuti, perché inizia con il tempo per provocare una risposta da corpo estraneo che provoca una reazione a cellule giganti nell&#39;animale 5. A differenza di altri materiali, spugne PVA sono facili da inserire e rimuovere, realizzate con materiali inerti e non biodegradabili, eppure sono morbidi abbastanza per essere sezionato per l&#39;analisi istologica 2,5. Nella guarigione della ferita la spugna PVA è molto utile per analizzare la formazione di tessuto di granulazione, deposizione di collagene, la composizione fluida della ferita, e gli effetti delle sostanze sul processo di guarigione 1,2,5. Oltre al suo impiego in studio di una vasta gamma di attributi di guarigione delle ferite, la spugna PVA è stato utilizzato anche in molti altri tipi di studi. Si hcome state utilizzate per indagare l&#39;angiogenesi tumorale, la consegna della droga e la sopravvivenza delle cellule staminali e attecchimento 1,2,6,7. Con la sua alterabilità grande, una precedente utilizzazione estensiva, e risultati riproducibili, la spugna PVA è un modello ideale per molti studi 1,2. Qui, verrà descritto l&#39;, impianto preparazione e il recupero di PVA dischi spugna (Figura 1) in un modello murino di guarigione delle ferite.

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The Polyvinyl Alcohol Sponge Model Implantation

Uno strumento utile per analizzare gli effetti di farmaci, fattori di crescita, e / o cellule manipolate in un modello animale di riparazione della ferita viene descritta. Questa tecnica utilizza le proprietà di un alcool polivinilico (PVA) spugna per fornire e contenere il trattamento desiderato e forniscono anche una piattaforma da asportare e analizzati.

L&#39;alcool polivinilico Sponge impianto modello

Wound healing is a complicated, multistep process involving many cell types, growth factors and compounds1-3. Because of this complexity, wound healing ...

the-polyvinyl-alcohol-sponge-model-implantation

Research

JoVE Journal

Medicine

19.7K Views.  Vanderbilt University School of Medicine. Uno strumento utile per analizzare gli effetti di farmaci, fattori di crescita, e / o cellule manipolate in un modello animale di riparazione della ferita viene descritta. Questa tecnica utilizza le proprietà di un alcool polivinilico (PVA) spugna per fornire e contenere il trattamento desiderato e forniscono anche una piattaforma da asportare e analizzati.

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Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Valutare i cambiamenti teratogeni in un modello di Zebrafish di esposizione alcolica fetale

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

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Medicina

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Despite the considerable progress made in the stent development in the last decades, cardiovascular diseases remain the main cause of death in western countries. Beside the benefits offered by the development of different drug-eluting stents, the coronary revascularization bears also the life-threatening risks of in-stent thrombosis and restenosis. Research on new therapeutic strategies is impaired by the lack of appropriate methods to study stent implantation and restenosis processes. Here, we describe a rapid and accessible procedure of stent implantation in mouse carotid artery, which offers the possibility to study in a convenient way the molecular mechanisms of vessel remodeling and the effects of different drug coatings.

A model of stent implantation in mouse carotid artery is described. Compared to other similar methods, this procedure is very rapid, simple and accessible, offering the possibility to study in a convenient way the vascular wall reaction to different drug-eluting stents and the molecular mechanisms of restenosis.

Un modello murino di impianto di stent a livello dell&#39;arteria carotidea per lo Studio della restenosi

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Implantation of the Syncardia Total Artificial Heart

With advances in technology, the use of mechanical circulatory support devices for end stage heart failure has rapidly increased. The vast majority of such patients are generally well served by left ventricular assist devices (LVADs). However, a subset of patients with late stage biventricular failure or other significant anatomic lesions are not adequately treated by isolated left ventricular mechanical support. Examples of concomitant cardiac pathology that may be better treated by resection and TAH replacement includes: post infarction ventricular septal defect,&#160;aortic root aneurysm / dissection, cardiac allograft failure, massive ventricular thrombus, refractory malignant arrhythmias (independent of filling pressures), hypertrophic / restrictive cardiomyopathy, and complex congenital heart disease. Patients often present with cardiogenic shock and multi system organ dysfunction. Excision of both ventricles and orthotopic replacement with a total artificial heart (TAH) is an effective, albeit extreme, therapy for rapid restoration of blood flow and resuscitation. Perioperative management is focused on end organ resuscitation and physical rehabilitation. In addition to the usual concerns of infection, bleeding, and thromboembolism common to all mechanically supported patients, TAH patients face unique risks with regard to renal failure and anemia. Supplementation of the abrupt decrease in brain natriuretic peptide following ventriculectomy appears to have protective renal effects. Anemia following TAH implantation can be profound and persistent. Nonetheless, the anemia is generally well tolerated and transfusion are limited to avoid HLA sensitization. Until recently, TAH patients were confined as inpatients tethered to a 500 lb pneumatic console driver. Recent introduction of a backpack sized portable driver (currently under clinical trial) has enabled patients to be discharged home and even return to work. Despite the profound presentation of these sick patients, there is a 79-87% success in bridge to transplantation.

The purpose of this manuscript is to briefly review indications, management, and outcomes for the total artificial heart. Video operative techniques for device implantation are presented.

L&#39;impianto di Cuore Artificiale Totale SynCardia

With advances in technology, the use of mechanical circulatory support devices for end stage heart failure has rapidly increased. The vast majority of ...

Implantation of Total Artificial Heart in Congenital Heart Disease

In patients with end-stage heart failure (HF), a total artificial heart (TAH) may be implanted as a bridge to cardiac transplant. However, in congenital heart disease (CHD), the malformed heart presents a challenge to TAH implantation. 
In the case presented here, a 17 year-old patient with congenital transposition of the great arteries (CCTGA) experienced progressively worsening HF due to his congenital condition. He was hospitalized multiple times and received an implantable cardioverter defibrillator (ICD). However, his condition soon deteriorated to end-stage HF with multisystem organ failure. 
Due to the patient's grave clinical condition and the presence of complex cardiac lesions, the decision was made to proceed with a TAH. The abnormal arrangement of the patient's ventricles and great arteries required modifications to the TAH during implantation.
With the TAH in place, the patient was able to return home and regain strength and physical well-being while awaiting a donor heart. He was successfully bridged to heart transplantation 5 months after receiving the device. This report highlights the TAH is feasible even in patients with structurally abnormal hearts, with technical modification.

This is a case report of a patient with congenitally corrected transposition of the great arteries (CCTGA) who received a total artificial heart (TAH) as a bridge to heart transplant. The TAH was successfully implanted with modifications to accommodate the patient's congenitally malformed heart.

L&#39;impianto di Cuore Artificiale Totale nelle cardiopatie congenite

In patients with end-stage heart failure (HF), a total artificial heart (TAH) may be implanted as a bridge to cardiac transplant. However, in congenital ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

L&#39;impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). At the most severe end of the spectrum is Fetal Alcohol Syndrome (FAS), characterized by growth retardation, craniofacial dysmorphology, and neurobehavioral deficits. Studies with animal models, including rodents, have elucidated many molecular and cellular mechanisms involved in the pathophysiology of FASDs. Ethanol administration to pregnant rodents has been used to model human exposure during the first and second trimesters of pregnancy. Third trimester ethanol consumption in humans has been modeled using neonatal rodents. However, few rodent studies have characterized the effect of ethanol exposure during the equivalent to all three trimesters of human pregnancy, a pattern of exposure that is common in pregnant women. Here, we show how to build vapor chambers from readily obtainable materials that can each accommodate up to six standard mouse cages. We describe a vapor chamber paradigm that can be used to model exposure to ethanol, with minimal handling, during all three trimesters. Our studies demonstrate that pregnant dams developed significant metabolic tolerance to ethanol. However, neonatal mice did not develop metabolic tolerance and the number of fetuses, fetus weight, placenta weight, number of pups/litter, number of dead pups/litter, and pup weight were not significantly affected by ethanol exposure. An important advantage of this paradigm is its applicability to studies with genetically-modified mice. Additionally, this paradigm minimizes handling of animals, a major confound in fetal alcohol research.

We demonstrate the construction of alcohol vapor chambers using readily available materials that simultaneously house 6 mouse cages. We further describe their use in a mouse model of fetal alcohol exposure equivalent to all 3&#160;trimesters of human pregnancy. This paradigm exposes animals during gestation and postnatal days 1-12.

Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante l&#39;equivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

Modello murino di dall&#39;arteria femorale Wire Injury con impianto di una Perivascolare Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of the role of the tumor microenvironment in treatment response, collectively point to the need for immune-competent orthotopic models for pre-clinical testing of these new therapies. This paper demonstrates how to establish an orthotopic immune-competent rat model of pleural malignant mesothelioma. Monitoring disease progression in orthotopic models is confounded by the internal location of the tumors. To longitudinally monitor disease progression and its effect on circulating immune cells in this and other rat models of cancer, a single tube flow cytometry assay requiring only 25 &#181;l whole blood is described. This provides accurate quantification of seven immune parameters: total lymphocytes, monocytes and neutrophils, as well as the T-cell subsets CD4 and CD8, B-cells and Natural Killer cells. Different subsets of these parameters are useful in different circumstances and models, with the neutrophil to lymphocyte ratio having the greatest utility for monitoring disease progression in the mesothelioma model. Analyzing circulating immune cell levels using this single tube method may also assist in monitoring the response to immune-based treatments and understanding the underlying mechanisms leading to success or failure of treatment.

The generation of an orthotopic rat model of pleural malignant mesothelioma by implantation of II-45 mesothelioma cells into the pleural cavity of immune competent rats is presented. A flow cytometric method to analyze seven immune cell subsets in these animals from a 25 &#181;l&#160;blood sample is also described.

Ortotopico impianto e periferico immunitario monitoraggio cellulare nel Modello II-45 Singenico Rat mesotelioma

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

Surgical Training for the Implantation of Neocortical Microelectrode Arrays Using a Formaldehyde-fixed Human Cadaver Model

This protocol describes a procedure to assist surgeons in training for the implantation of microelectrode arrays into the neocortex of the human brain. Recent technological progress has enabled the fabrication of microelectrode arrays that allow recording the activity of multiple individual neurons in the neocortex of the human brain. These arrays have the potential to bring unique insight onto the neuronal correlates of cerebral function in health and disease. Furthermore, the identification and decoding of volitional neuronal activity opens the possibility to establish brain-computer interfaces, and thus might help restore lost neurological functions. The implantation of neocortical microelectrode arrays is an invasive procedure requiring a supra-centimetric craniotomy and the exposure of the cortical surface; thus, the procedure must be performed by an adequately trained neurosurgeon. In order to provide an opportunity for surgical training, we designed a procedure based on a human cadaver model. The use of a formaldehyde-fixed human cadaver bypasses the practical, ethical and financial difficulties of surgical practice on animals (especially non-human primates) while preserving the macroscopic structure of the head, skull, meninges and cerebral surface and allowing realistic, operating room-like positioning and instrumentation. Furthermore, the use of a human cadaver is closer to clinical daily practice than any non-human model. The major drawbacks of the cadaveric simulation are the absence of cerebral pulsation and of blood and cerebrospinal fluid circulation. We suggest that a formaldehyde-fixed human cadaver model is an adequate, practical and cost-effective approach to ensure proper surgical training before implanting microelectrode arrays in the living human neocortex.

We designed a procedure in which a formaldehyde-fixed human cadaver is used to assist neurosurgeons in training for the implantation of microelectrode arrays into the neocortex of the human brain.

Training chirurgico per l'impianto di microelettrodi Neocortical utilizzando un modello di cadavere umano formaldeide-fisso

This protocol describes a procedure to assist surgeons in training for the implantation of microelectrode arrays into the neocortex of the human brain. ...

Cochlear Implantation in the Guinea Pig

Cochlear implants are highly efficient devices that can restore hearing in subjects with profound hearing loss. Due to improved speech perception outcomes, candidacy criteria have been expanded over the last few decades. This includes patients with substantial residual hearing that benefit from electrical and acoustical stimulation of the same ear, which makes hearing preservation during cochlear implantation an important issue. Electrode impedances and the related issue of energy consumption is another major research field, as progress in this area could pave the way for fully implantable auditory prostheses. To address these issues in a systematic way, adequate animal models are essential. Therefore, the goal of this protocol is to provide an animal model of cochlear implantation, which can be used to address various research questions. Due to its large tympanic bulla, which allows easy surgical access to the inner ear, as well as its hearing range which is relatively similar to the hearing range of humans, the guinea pig is a commonly used species in auditory research. Cochlear implantation in the guinea pig is performed via a retroauricular approach. Through the bullostomy a cochleostomy is drilled and the cochlear implant electrode is inserted into the scala tympani. This electrode can then be used for electrical stimulation, determination of electrode impedances and the measurement of compound action potentials of the auditory nerve. In addition to these applications, cochlear implant electrodes can also be used as drug delivery devices, if a topical delivery of pharmaceutical agents to the cells or fluids of the inner ear is intended.

The goal of this protocol is to provide an animal model of cochlear implantation, which can be used to address a multitude of research questions. Potential applications include the evaluation of pharmaceutical interventions or electrical stimulation for beneficial effects on hearing thresholds or electrode impedances.