In questo protocollo, la ricostruzione uretrale utilizzando un innesto di mucosa vestibolare viene sviluppata per la prima volta in un ambiente fisiopatologico locale, che è fondamentale per simulare la malattia. Questa tecnica ci permette di sviluppare terapie innovative e di studiarne i meccanismi molecolari e i vantaggi clinici in modo traslazionale. Per iniziare, applicare un gel protettivo per gli occhi su entrambi gli occhi del ratto anestetizzato.
Posizionare l'animale in posizione di decubito dorsale su un termoforo e posizionare un microscopio da dissezione sul ratto per la procedura chirurgica. Dopo aver ritirato il prepuzio del pene, posizionare dorsalmente una sutura superficiale a sette zeri sulle ghiandole del pene. Lasciare un supporto per aghi in posizione per mantenere il pene retratto.
Posizionare un catetere venoso calibro 22 nell'uretra per il cateterismo utilizzando gel lubrificante. Fai un'incisione ventrale lunga un centimetro nella pelle del pene con una lama di bisturi chirurgica. Sezionare gli strati di tessuto del pene con una pinza e una forbice a molla fino a quando l'uretra non è esposta a livello dell'asta centrale.
Applicare corrente con un dispositivo di elettrocauterizzazione su un lato laterale dell'uretra e ventralmente sull'asta centrale del pene. Chiudere l'incisione con una sutura a sei zeri riassorbibile. Rimuovere il catetere uretrale e la sutura di trazione peniena.
Posizionare il ratto in posizione di decubito ventrale e somministrare un'iniezione sottocutanea della soluzione antisedativa. Pulisci il labbro inferiore, la mucosa buccale, il pene e la pelle addominale di un ratto anestetizzato con iodio povidone. Posiziona tre punti di sutura a sette zeri su entrambi i lati e al centro del labbro inferiore.
Metti una zanzara in ciascuno per ritrarre il labbro ed esporre la mucosa interna. Usando forbici a molla e pinze appuntite, prelevare un innesto di quattro millimetri dalla mucosa buccale interna del labbro inferiore. Posizionare l'innesto in un piccolo recipiente con soluzione fisiologica sterile allo 0,9%.
Comprimere l'area donatrice con una spugna. Rimuovere le suture di soggiorno precedentemente posizionate del labbro inferiore ed esporre il pene. Posizionare un catetere venoso calibro 22 nell'uretra per la cauterizzazione utilizzando un gel lubrificante.
Usando le forbici a molla, fai un'incisione subcoronale circonferenziale e deglove il pene alla base. Sezionare gli strati rimanenti per esporre l'uretra. Praticare un'incisione ventrale longitudinale di quattro millimetri a circa tre millimetri distale dal solco coronale, spatolando l'uretra a livello della stenosi.
Posizionare due punti di sutura a sette zeri su ciascun lato della spatola. Lascia una zanzara in ciascuno per ritrarre l'uretra. Posizionare due suture seven-oh non assorbibili a ciascuna estremità della spatolazione.
Posizionare l'innesto di mucosa vestibolare in modo onlay ventrale con il lato della mucosa rivolto verso il lume uretrale. Passare una delle suture attraverso l'innesto ed eseguire una mezza ellisse con una sutura corrente. Rimuovere il catetere uretrale e riposizionare la pelle del pene.
Chiudere l'incisione sottocoronale circonferenziale con una sutura interrotta riassorbibile a sei zeri. Rimuovere la sutura di trazione del pene, quindi somministrare la soluzione antisedativa come dimostrato in precedenza. Il ratto sottoposto a induzione stenosi ha mostrato un diametro dell'uretere di 0,92 millimetri, che è migliorato a 1,59 millimetri due settimane dopo l'uretroplastica dell'innesto.
Il flusso sanguigno medio è stato significativamente ridotto dopo l'uretroplastica rispetto agli animali pre-uretroplastica. Troppa corrente può comportare il rischio di chiusura uretrale. L'innesto deve essere posizionato con la mucosa rivolta verso il lume uretrale con una sutura a tenuta stagna per evitare fistole.
Si può eseguire qualsiasi tipo di uretroplastica con innesti, si possono valutare diversi tipi di innesti. Questo modello sperimentale ci permette di ottimizzare l'uso degli innesti e di esplorare nuove strategie terapeutiche, come i materiali di ingegneria tissutale con un impatto sulla ricerca traslazionale per soddisfare le esigenze cliniche.
