Espressione di transgeni in cellule in coltura utilizzando vettori virali adeno-associati ricombinanti non purificati

La terapia genica utilizza un capside virale per introdurre il DNA nelle cellule, e quindi le cellule elaborano quel DNA attraverso meccanismi che non sono completamente compresi. Studiando il modo in cui le cellule elaborano il DNA dell'AAV, speriamo di migliorare la sicurezza, l'efficacia e la longevità delle terapie geniche con l'AAV. Studiare l'elaborazione del DNA AAV a livello di tessuto o di organismo è stato piuttosto difficile.

E mentre stavamo sviluppando protocolli di trasduzione di colture cellulari per la visualizzazione di AAV tramite microscopia a super risoluzione, abbiamo scoperto che la semplicità di produzione e utilizzo di preparati AAV non purificati in coltura cellulare non è ben nota. Questo metodo semplice per l'espressione transitoria può essere vantaggioso per i ricercatori in numerosi campi. La creazione di preparati AAV grezzi è abbastanza semplice e hanno una lunga durata di conservazione F4C, che consente loro di essere utilizzati in numerosi esperimenti.

La loro applicazione è semplice, il che li rende un'alternativa efficace in termini di tempo ed economia ai reagenti di trasfezione standard. Spesso i preparati grezzi AAV sono più efficienti e meno tossici della trasfezione. La vettrologia ha due bracci, la produzione e la trasduzione, ed entrambi dipendono interamente dal macchinario cellulare dell'ospite.

La nostra ricerca futura mira a identificare i meccanismi cellulari coinvolti in questi processi e i modi per manipolarli in modo da poter migliorare l'efficienza della produzione e della trasduzione. Comprendere la biologia di base alla base di entrambi i rami della vetrologia è fondamentale per il successo delle terapie geniche.