Monitoraggio delle oscillazioni circadiane con un reporter di bioluminescenza negli organoidi

Il nostro attuale scopo di ricerca è quello di indagare i ruoli dei ritmi circadiani nella proliferazione e differenziazione delle cellule epiteliali intestinali. Stiamo cercando di determinare se l'orologio circadiano regola la proliferazione e la differenziazione cellulare dalle cellule staminali intestinali. Questo protocollo presenta un metodo di monitoraggio in tempo reale per studi circadiani in organoidi tridimensionali utilizzando un saggio di bioluminescenza.

A differenza dell'esecuzione di saggi di bioluminescenza in una coltura cellulare bidimensionale convenzionale, questo approccio ci consente di studiare i ritmi circadiani e le loro funzioni in un modello di organoide fisiologicamente più rilevante. I nostri risultati mostrano ritmi circadiani interrotti in condizioni arricchite con cellule staminali, dimostrando robuste oscillazioni circadiane in organoidi intestinali umani differenziati, suggerendo un rimodellamento del meccanismo dell'orologio circadiano dalle cellule staminali alle cellule differenziate. L'uso di organoidi derivati da pazienti con reporter circadiani bioluminescenti ci aiuterà a migliorare la nostra comprensione dei ritmi circadiani negli organi periferici e nei diversi stati patologici.