妊孕性温存を受けている若年患者の卵巣予備能を評価するための Z スコア

要約

本プロトコルは、卵巣組織の凍結保存による妊孕性温存を必要とする 25 歳未満の患者の卵巣予備能を評価する方法を説明しています。この方法には、(1) 皮質サンプル中の卵巣予備能の組織学的評価、(2) 参照データセットとの比較、および (3) Z スコアの計算が含まれます。

要約

女性は、卵巣予備能と呼ばれる再生不可能な卵巣卵胞のプールを持って生まれます。この予備力は卵巣の原始卵胞で構成されており、遺伝性疾患や内分泌障害、医学的介入、内分泌かく乱物質など、多くの要因の影響を受ける可能性があります。性腺毒性治療が必要な場合は、生殖能力の保存が推奨されます。女性に好ましい選択肢は、卵子と胚の凍結保存です。しかし、非常に若く性的に未熟な患者では、卵巣組織の凍結保存が唯一の選択肢です。凍結保存された組織サンプルの卵胞密度を知ることは、若年患者の不妊治療カウンセリングに不可欠です。このプロトコルは、25 歳以下の少女および若年女性の卵巣組織の質を評価するためのツールとして、皮質卵胞密度の Z スコアの使用を示しています。患者サンプルの卵胞密度は、標準からの逸脱の可能性を推定するためにHassanらによって開発された年齢正規化された参照標準と比較されます。卵胞密度は、組織学的定量化によって測定されます。このために、卵巣皮質組織の小片(~2 mm x 2 mm x 2 mm)をブイン溶液またはホルムアルデヒド溶液に固定し、パラフィンに包埋し、厚さ4 μmで切片化し、ヘマトキシリンとエオシンで染色し、スライドスキャナーを使用してデジタル化します。皮質に存在する卵胞期は、原始卵胞から一次卵胞までさまざまです。皮質領域は、組織切片の表面上皮から1mmでした。卵胞密度は、Schmidtらによって提示された修正式を使用して計算され、Zスコアは参照平均と標準偏差を使用して決定されます。Zスコアは、測定値が参照平均からどれだけ逸脱しているかを示し、卵巣予備能の減少(<-1.7 Zスコア)を決定します。この方法により、卵胞密度は、妊孕性の維持を必要とする若い患者の卵巣予備能の貴重な尺度として使用できます。

概要

卵巣は、外側の皮質と内側の髄質からなる、動的で内分泌的に活動的な器官です。卵巣内に不均一に分布しているのは卵胞であり、卵胞には間質顆粒膜細胞¹に囲まれた性腺卵子が含まれています。すべての卵胞は胎児の発育中にすでに形成されており、妊娠期間の約20週でピークに達し、その後指数関数的に減少します。出生時には、100万〜200万個の原始卵胞が皮質内に残り、思春期まで生き残るのは数十万個の卵胞だけです²。成長していない卵胞プールは、卵巣予備能とも呼ばれ、他の要因の中でも特に女性の生殖能力に影響を与えます。卵巣予備能は皮質内に存在し、卵胞が成長して成熟するにつれて髄質に移動します。一部の研究者は、卵巣予備能が原始卵胞のみで構成されていると認識していますが、他の研究者はすべての単層卵胞(すなわち、原始卵胞、中間卵胞、および^一次卵胞)を含む3,4,5,6。女性の生涯の間に、300〜400個の卵胞だけが成熟し、最終的に排卵を経験するために生き残ります。更年期障害は、卵胞の数が約1000に減少したときに始まり、通常は約50歳

プロトコル

実施されたすべての手続きは、スウェーデンの倫理審査機関 (Sveafertil 患者、Dnr: 2019-03802) およびヘルシンキ大学病院の倫理委員会 (HCH 患者、Dnr 340/13/03/03/2015) によって承認されました。研究に関する書面および口頭での情報は、研究看護師によって提供され、ヘルシンキ宣言に従ってインフォームドコンセントが得られました。18歳未満の患者については、法定後見人からインフォームドコンセントが得られました。すべてのサンプルは仮名化され、欧州一般データ保護規則(GDPR)に従って処理されました。本試験で使用した試薬および装置の詳細は、 材料表に記載されています。

1. 卵巣組織の採取と処理

注:不妊症のリスクが高いまたは非常に高い兆候がある場合は、不妊症の予防に適格なすべての患者を特定します 地域のガイドライン(例:北欧、ヨーロッパ、または国際的な特定のガイドライン)。ヨーロッパでは、不妊治療研究プログラムの一環としてのみ未成年の患者を募集します。不妊症のリスクを判断するには、お住まいの国の妊孕性維持に関するガイドラインをご覧ください。

1. 全身麻酔下で外科的処置を行います。麻酔導入のために、プロポフォール(2 mg / kg)、....

ディスカッション

女性は生まれつき有限の卵子のプールを持っており、それを補充することはできません。卵巣予備能は、女性の生殖能力の重要な決定要因です。この記事では、卵胞密度の組織学的定量方法と、若年患者と 25 歳までの女性における卵巣皮質卵胞密度の Z スコアを使用した参照標準との比較方法について概説します。

このプロトコルでは、卵巣組.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline	Thermo Fisher	14190144
1x Phosphate Buffered Saline w/ CaCl2, MgCl2, 1 g/L D-glucose, 36 mg/L pyruvate	Thermo Fisher	14287-080
37% Hydrochloric acid	Sigma-Aldrich	1.09057.1000
70% ethanol	Histolabs	01370.01L
95% ethanol	Fisher scientific	10572143
Absolute ethanol	Histolabs	01399.01L
Bouin's solution	Sigma-Aldrich	HT10132-1L
Eosin Y Free acid	Sigma-Aldrich	E4009-5G
Formaldehyde	Thermo Fisher	28908
Haematoxylin solution according to Delafield	Sigma-Aldrich	03971-250ML
ImageJ
Microsoft Excel
Microtome
Pertex mounting solution	Histolabs	00840-05
Propofol	Baxter Holding B.V.	N01AX10	ATC-code provided instead of catalog number
QuPath			https://qupath.github.io/
Rocuronium bromide	B. Braun Melsungen AG	M03AC09	ATC-code provided instead of catalog number
Scott's tap water substitute concentrate	Sigma-Aldrich	S5134-6x100ml
Sevoflurane	Baxter Medical AB	N01AB08	ATC-code provided instead of catalog number
Slide scanner
Sufentanil	Hameln Pharma gmbh	N01AH03	ATC-code provided instead of catalog number
Sugammadex	Baxter Holding B.V.	V03AB35	ATC-code provided instead of catalog number
SuperFrost plus white	Histolabs	06400
SuperFrost Plus White microscope slides	Histolabs	06400
Xylene	Saveen Werner	131769.1611