Z-Scores pour l’évaluation de la réserve ovarienne chez les jeunes patientes subissant une préservation de la fertilité

Résumé

Le présent protocole décrit une méthode d’évaluation de la réserve ovarienne chez les patientes de moins de 25 ans qui nécessitent une préservation de la fertilité par cryoconservation du tissu ovarien. Cette méthode implique : (1) l’évaluation histologique de la réserve ovarienne dans les échantillons corticaux, (2) la comparaison avec un ensemble de données de référence, et (3) le calcul des scores Z.

Résumé

Les femmes naissent avec un pool non renouvelable de follicules ovariens, appelé réserve ovarienne. Cette réserve se compose de follicules primordiaux dans les ovaires et peut être affectée par de nombreux facteurs, tels que des troubles génétiques et endocriniens, des interventions médicales et des perturbateurs endocriniens. La préservation de la fertilité est recommandée lorsque des traitements gonadotoxiques sont nécessaires. Les options préférées des femmes sont la cryoconservation des ovocytes et des embryons. Cependant, chez les patientes très jeunes et sexuellement immatures, la cryoconservation du tissu ovarien est la seule option. Connaître la densité folliculaire des échantillons de tissus cryoconservés est essentiel dans le conseil en fertilité pour les jeunes patients. Ce protocole démontre l’utilisation des Z-scores pour la densité folliculaire corticale comme outil d’évaluation de la qualité du tissu ovarien chez les filles et les jeunes femmes âgées de 25 ans et moins qui subissent une préservation de la fertilité. La densité folliculaire dans les échantillons de patients est comparée aux étalons de référence normalisés selon l’âge, développés par Hassan et al. pour estimer les écarts possibles par rapport à l’étalon. La densité folliculaire est mesurée par quantification histologique. Pour cela, un petit morceau de tissu cortical ovarien (~2 mm x 2 mm x 2 mm) est fixé dans une solution de Bouin ou de formaldéhyde, noyé dans de la paraffine, sectionné à 4 μm d’épaisseur, coloré à l’hématoxyline et à l’éosine, et numérisé à l’aide d’un scanner de lames. Les stades folliculaires présents dans le cortex vont des follicules primordiaux aux follicules primaires. La zone corticale était à 1 mm de l’épithélium de surface sur les coupes histologiques. La densité folliculaire est calculée à l’aide d’une formule modifiée présentée par Schmidt et al., et le score Z est déterminé à l’aide de la moyenne de référence et de l’écart-type. Le score Z indique dans quelle mesure la valeur mesurée s’écarte de la moyenne de référence, déterminant la réserve ovarienne réduite (<-1,7 score Z). Avec cette méthode, les densités folliculaires peuvent être utilisées comme une mesure précieuse de la réserve ovarienne pour les jeunes patientes nécessitant une préservation de la fertilité.

Introduction

L’ovaire est un organe dynamique, actif sur le plan endocrinologique, composé d’un cortex externe et d’une moelle épinière interne. Les follicules sont répartis de manière hétérogène dans les ovaires, qui contiennent l’ovocyte gonadique entouré de cellules de la granulosa stromale¹. Tous les follicules sont déjà formés au cours du développement fœtal, culminant vers 20 semaines d’âge gestationnel, suivi d’un déclin exponentiel. À la naissance, 1 à 2 millions de follicules primordiaux restent dans le cortex, et seulement quelques centaines de milliers de follicules survivent jusqu’à la puberté^2....

Protocole

Toutes les procédures menées ont été approuvées par l’Autorité suédoise d’examen éthique (patients Sveafertil, Dnr : 2019-03802) et par le Comité d’éthique de l’hôpital universitaire d’Helsinki (patients HCH, Dnr 340/13/03/03/2015). Des informations écrites et orales sur l’étude ont été fournies par les infirmières de recherche, et le consentement éclairé a été obtenu conformément à la Déclaration d’Helsinki. Pour les patients de moins de 18 ans, le consentement éclairé a été obtenu des tuteurs légaux. Tous les échantillons ont été pseudonymisés et traités conformément au règlement général européen sur la protection des données (RGPD)....

Discussion

Les femmes naissent avec un nombre limité d’ovocytes, qui ne peuvent pas être reconstitués. La réserve ovarienne est un déterminant clé du potentiel reproductif d’une femme. Cet article décrit une méthode de quantification histologique de la densité folliculaire et sa comparaison avec des étalons de référence à l’aide des scores Z des densités de follicules corticaux ovariens chez les patientes jeunes et les femmes jusqu’à 25 ans.

Dans c.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline	Thermo Fisher	14190144
1x Phosphate Buffered Saline w/ CaCl2, MgCl2, 1 g/L D-glucose, 36 mg/L pyruvate	Thermo Fisher	14287-080
37% Hydrochloric acid	Sigma-Aldrich	1.09057.1000
70% ethanol	Histolabs	01370.01L
95% ethanol	Fisher scientific	10572143
Absolute ethanol	Histolabs	01399.01L
Bouin's solution	Sigma-Aldrich	HT10132-1L
Eosin Y Free acid	Sigma-Aldrich	E4009-5G
Formaldehyde	Thermo Fisher	28908
Haematoxylin solution according to Delafield	Sigma-Aldrich	03971-250ML
ImageJ
Microsoft Excel
Microtome
Pertex mounting solution	Histolabs	00840-05
Propofol	Baxter Holding B.V.	N01AX10	ATC-code provided instead of catalog number
QuPath			https://qupath.github.io/
Rocuronium bromide	B. Braun Melsungen AG	M03AC09	ATC-code provided instead of catalog number
Scott's tap water substitute concentrate	Sigma-Aldrich	S5134-6x100ml
Sevoflurane	Baxter Medical AB	N01AB08	ATC-code provided instead of catalog number
Slide scanner
Sufentanil	Hameln Pharma gmbh	N01AH03	ATC-code provided instead of catalog number
Sugammadex	Baxter Holding B.V.	V03AB35	ATC-code provided instead of catalog number
SuperFrost plus white	Histolabs	06400
SuperFrost Plus White microscope slides	Histolabs	06400
Xylene	Saveen Werner	131769.1611