この新しいプロトコルは、プロポフォール麻酔を使用したマウスの外科的麻酔について説明しています。この方法は、疾患のマウスモデルにおけるプロポフォール麻酔の研究を可能にします。このプロトコルは、全静脈内麻酔の評価を可能にし、揮発性麻酔の使用を回避します。
このプロトコルは、プロポフォール麻酔が疾患関連の結果にどのように影響するかを調べるために使用できます。たとえば、ここでは、腫瘍を切除するための手術後の短期および長期の癌転帰を評価します。はじめに、10%FBSおよび200ミリモルグルタミンを含むαMEM培地でホタルルシフェラーゼを発現するように安定に形質導入されたCL4みらい乳癌細胞を66個培養する。
摂氏37度で細胞をインキュベートしますが、5%二酸化炭素。細胞が約80%コンフルエントに達したときに細胞を継代培養します。細胞がEDTA溶液中に2ミリリットルの滴下を伴う対数増殖期にあるとき、接着細胞を持ち上げ、血球計算盤を使用して細胞をカウントする。
次に、細胞をPBSで希釈し、マウスが注射の準備ができるまで希釈した細胞懸濁液を氷上に置いておきます。マウスが完全に麻酔をかけられたら、4番目の左乳腺脂肪パッド領域を使い捨てアルコール綿棒で拭き取り、注射部位を準備します。滅菌25ゲージの皮下注射針に取り付けられた27マイクロリットルのハミルトン注射器に癌細胞懸濁液を入れます。
鉗子を使用して皮膚を持ち上げて固定します。5番目の細胞に10回、乳首から約1ミリメートル離れた4番目の左乳脂肪パッドに20マイクロリットルのPBSを注入します。細胞がルシフェラーゼでタグ付けされている場合は、30ゲージの皮下注射針を備えた0.5ミリリットルのインスリン注射器を使用して、麻酔をかけたマウスの外側尾静脈に100マイクロリットルのD-ルシフェリンを注射します。
注射の2分後、マウスを乳腺脂肪パッドを上に向けて生物発光イメージングシステムに入れ、10秒間画像をキャプチャします。イメージング後、マウスを清潔なケージに入れ、麻酔から回復させます。キャリパーを使用して原発腫瘍の成長を監視します。
腫瘍の体積を計算し、原発腫瘍が80〜90立方ミリメートルの体積に達したら腫瘍を切除します。2%プロポフォール製剤を含む30ゲージの1ミリリットルインスリンシリンジで自動シリンジポンプをセットアップします。3%のセボフルランまたはイソフルランを含む誘導チャンバーで麻酔を誘発します。
次に、麻酔をかけたマウスを摂氏37度の加熱パッドに移し、ノーズコーンを使用して2〜3%のセボフルランまたはイソフルランで麻酔を維持します。静脈内カニューレ挿入中に必要に応じてセボフルランの送達を調整して、ペダル反射の喪失と毎分100呼吸未満の呼吸数によって示される安定した麻酔深度を維持します。.角膜の乾燥を防ぐために水性潤滑剤を目に塗り、ブプレノルフィン1キログラムあたり0.05ミリグラムを皮下注射します。
プロポフォールベースの全静脈麻酔を送達するには、滅菌ポリウレタンカテーテルに取り付けられた滅菌30ゲージ皮下注射針を使用して外側尾静脈をカニューレ挿入します。カテーテルへの血液フラッシュバックによって正しい配置を確認します。2%のプロポフォールをキログラムあたり27ミリグラムの初期ボーラスとして1分間投与し、全静脈麻酔を開始します。.
セボフルラン投与を中止する。手術中に安定した麻酔深度を維持するために、毎分キログラムあたり2.2〜4.0ミリグラムの速度でプロポフォール注入を維持します。.腹部を剃り、手術部位をポビドンヨード溶液で消毒します。
左4番目の乳脂肪パッドの腫瘍より下に1センチメートルの切開を行います。鉗子とはさみを使用して、腫瘍と左鼠径リンパ節を解剖します。ルシフェラーゼタグ付き腫瘍細胞を使用する場合は、実証されているように外側尾静脈にd-ルシフェリンを注入し、60秒間画像をキャプチャして明確なマージンを取得します。
残存腫瘍が確認された場合は、乳腺脂肪パッドから追加の組織を切除します。手術部位で止血が達成されたら、5-0ナイロン縫合糸を使用して皮膚を閉じます。ポビドンヨード溶液で傷を拭きます。
手術が完了したら、麻酔を止め、マウスを加熱パッドの上の清潔なケージに入れて、麻酔から回復させます。マウスが通常の覚醒に戻るまで、15分ごとにマウスを監視します。その後、手術後48時間、12時間ごとに鎮痛を監視して提供します。
原発性腫瘍の再発または遠隔再発の評価については、生物発光イメージングシステムを使用して、手術の翌週から週に1回マウスを監視します。生物発光イメージングを用いて、原発腫瘍の切除後の肺における遠隔腫瘍再発を同定した。このモデルは、周術期に発生したイベントを評価するために使用できます。
プロポフォール下での癌手術の24時間後に、循環血漿サイトカインを評価した。外側尾静脈を迅速にカニューレし、セボフルラン曝露期間を最小限に抑えるために必要な慣行。セボフルランは、過剰鎮静を防ぐためにプロポフォールボーラスを投与するため、徐々に滴定する必要があります。.
この方法は、心臓手術または敗血症などの重篤な疾患のマウスモデルにおけるプロポフォール麻酔の影響を調査するために使用できます。
