当社のプロトコールは、当社の高度な組織工学、医薬品開発、および疾患モデリングアプリケーションにとって重要な均質組織スフェロイドの効率的な大規模生産を可能にするという点で重要です。この技術の主な利点は、大量の均一な組織スフェロイドを迅速かつコスト効率よく生産する能力であり、高い細胞生存率を確保し、患者固有のステロイドを製造することにより、この技術は生理学的に正確なモデルを提供し、正確な疾患モデリングを可能にし、分子および行動メカニズムの理解を可能にします。 癌を含む。この手法は、がん研究、神経変性疾患、組織工学などの知見を得ることができ、医薬品開発や個別化医療にも応用でき、さまざまな生体システムの理解を深めることができます。
当社のビジョンデモンストレーションは、デバイスの挿入や細胞の播種などの複雑な手順を明確に示し、一般的なエラーを防ぎ、適切な技術が一貫した結果を得るためのクッションとなるため、非常に重要です。まず、アガロース粉末を1 x PBSに加え、ガラス容器に2%アガロースゲルを調製します。サスペンションを円運動で均質化します。
ガラス容器を電子レンジに入れ、時間を30秒に設定します。電子レンジを5秒ごとに停止し、ガラス瓶を取り外し、円を描くように動かして溶液を手動で均質化します。溶液が液体の透明な状態に達するまで、加熱プロセスを実行します。
次に、6ミリリットルのアガロース溶液を6ウェルプレートの各ウェルに加え、15分間またはアガロースが固化するまで待ちます。次に、3Dプリントしたバイオデバイスを液体アガロースの上にそっと挿入し、30分間またはアガロースが固まるまで待ちます。次に、デバイスをアガロースからそっと取り外し、2ミリリットルのDMEMメディアを追加します。
10 分間待ってから、メディアを廃棄し、新しい DMEM と交換します。洗濯を3回繰り返します。完了したら、2ミリリットルのDMEMを追加し、細胞播種用の6ウェルプレートを摂氏37度で5%の二酸化炭素と80%の湿度のインキュベーターに置きます。
マウス線維芽細胞を細胞培養フラスコで増殖させ、5%の二酸化炭素を含むインキュベーターで摂氏37度に維持し、80%のコンフルエント度を達成するまで維持します。次に、1 x PBSで細胞を洗浄し、解離酵素を添加します。細胞を摂氏37度で2〜5分間、二酸化炭素5%、湿度80%でインキュベートします。
細胞が細胞培養フラスコから分離されたら、増殖培地を添加して細胞解離酵素を中和します。細胞懸濁液を室温で400 Gで5分間遠心分離し、細胞をカウントします。チューブに10の50倍を5つの細胞の乗数に、1 x PBSの5ミリリットルを追加します。
次に、細胞懸濁液を400 Gで室温で5分間遠心分離します。ピペットを使用して上清を取り除き、1ミリリットルの細胞培養培地を加えて溶液を均質化します。先に調製した6ウェルプレートから、2ミリリットルの培地を取り出し、3Dプリントバイオデバイスによって形成されたアガロース型の中心に1ミリリットルの細胞懸濁液を追加します。
細胞がマイクロ切除に沈殿するまで20〜30分待ってから、1ミリリットルの細胞培養培地をウェルに加えます。6ウェルプレートをインキュベーターに摂氏37度で約24〜48時間置き、組織スフェロイドを形成します。3Dプリントにより、円筒形のマイクロピンで構成されたスタンプ状デバイスを、光硬化性樹脂を用いた光造形法で作製することに成功しました。
このデバイスはシンプルで、滅菌が簡単で、再利用可能で、さまざまなサイズのウェルプレートやペトリ皿に合わせて調整可能でした。それは750均質なマイクロ切除井または6ウェルプレートあたり4、716を生成した。デバイスをプレートから早期に引き抜くと、非接着性の型が破壊され、マイクロ切除の形状が変形しました。
非接着性のアガロース型に播種された細胞は、約24時間後に沈殿して組織スフェロイドを形成しました。この方法論は、スフェロイドの形状、サイズ、生存率を維持することで、スフェロイドの大規模生産を成功裏に実証し、ステロイド培養を数ヶ月間サポートしました。この手順を考えるときに覚えておくべき最も重要なことは、気泡を防ぐためにデバイスを慎重に挿入し、細胞を乱さないように培地を穏やかに加えることです。
この手続きを経て、薬物検査や遺伝子発現解析を行うことができます。薬効、おいしい、治療に対する遺伝的反応に関する質問に答えます。この技術により、3Dバイオプリンティングに不可欠な大規模で高品質なスフェロイドの作製が可能になり、医薬品や化粧品の毒性試験における細胞の質と量が向上するため、組織工学や再生医療における新たな研究が可能になります。
