당사의 프로토콜은 당사의 고급 조직 공학, 약물 개발 및 질병 모델링 응용 분야에 중요한 균질 조직 스페로이드의 효율적인 대량 생산을 가능하게 한다는 점에서 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 균일한 조직 스페로이드를 대량으로 빠르고 비용 효율적으로 생산할 수 있는 능력이며, 높은 세포 생존력을 보장하고, 환자 별 스테로이드를 생산함으로써 다양한 생물 의학 응용 분야에서 중요한 스페로이드 품질을 보장합니다. 이 기술은 생리학적으로 정확한 모델을 제공하여 정확한 질병 모델링을 가능하게 하고 분자 및 행동 메커니즘에 대한 이해를 가능하게 합니다. 암을 포함하여. 이 방법은 암 연구, 신경 퇴행성 질환 및 조직 공학에 대한 통찰력을 제공할 수 있으며 약물 개발 및 개인 맞춤형 의학에 적용하여 다양한 생물학적 시스템에 대한 이해를 높일 수 있습니다.
당사의 비전 시연은 장치 삽입 및 세포 파종과 같은 복잡한 단계를 명확하게 보여주고, 일반적인 오류를 방지하고, 적절한 기술이 일관된 결과를 위한 완충 장치인지 확인하기 때문에 매우 중요합니다. 유리 용기에 2% 아가로스 겔을 준비하기 위해 아가로스 분말을 하나 x PBS에 첨가하는 것으로 시작합니다. 원형 운동으로 서스펜션을 균질화합니다.
유리 용기를 전자 레인지에 넣고 시간을 30 초로 설정합니다. 5초마다 전자레인지를 멈추고 유리병을 제거한 다음 원을 그리며 용액을 수동으로 균질화합니다. 용액이 액체 림피드 상태에 도달할 때까지 가열 과정을 수행합니다.
다음으로, 6웰 플레이트의 각 웰에 6밀리리터의 아가로스 용액을 추가하고 15분 동안 또는 아가로스가 응고될 때까지 기다립니다. 그런 다음 3D 프린팅된 바이오 장치를 액체 아가로스 위에 부드럽게 삽입하고 30분 동안 또는 아가로스가 응고될 때까지 기다립니다. 그런 다음 아가로스에서 장치를 조심스럽게 제거하고 2ml의 DMEM 매체를 추가합니다.
10분 동안 기다렸다가 미디어를 버리고 새 DMEM으로 교체합니다. 세탁을 세 번 반복하십시오. 완료되면 DMEM 2ml를 추가하고 이산화탄소가 5%, 습도가 80%인 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 세포 파종용 6웰 플레이트를 놓습니다.
세포 배양 플라스크에서 마우스 섬유아세포 세포를 성장시키고 이산화탄소가 5% 함유된 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 80%의 밀도가 달성될 때까지 유지합니다. 그런 다음 one x PBS로 세포를 세척하고 해리 효소를 첨가합니다. 섭씨 37도에서 5%의 이산화탄소와 80%의 습도에서 2-5분 동안 세포를 배양합니다.
세포가 세포 배양 플라스크에서 분리되면 세포 해리 효소를 중화하기 위해 성장 배지를 추가합니다. 셀 현탁액을 400G에서 실온에서 5분 동안 원심분리하고 셀을 계수합니다. 튜브에서 취한 5개 세포의 거듭제곱에 50 곱하기 10에 1 x PBS 5밀리리터를 추가합니다.
다음으로, 셀 현탁액을 실온에서 400G에서 5분 동안 원심분리합니다. 세포 배양 배지 1mL를 추가하고 용액을 균질화하기 전에 피펫을 사용하여 상층액을 제거합니다. 앞서 준비한 6웰 플레이트에서 2밀리리터의 배지를 제거하고 1밀리리터의 셀 현탁액을 3D 프린팅 바이오 디바이스로 형성된 아가로스 몰드의 중앙에 추가합니다.
세포 배양 배지 1m리터를 웰에 추가하기 전에 미세 절제술에서 세포가 침전될 때까지 20-30분 동안 기다립니다. 조직 스페로이드 형성을 위해 섭씨 37도의 인큐베이터에 약 24-48시간 동안 6웰 플레이트를 놓습니다. 원통형 마이크로 핀으로 구성된 3D 프린팅 스탬프와 같은 장치는 광경화 수지를 사용하여 광 조형 방식으로 성공적으로 제조되었습니다.
이 장치는 간단하고 살균하기 쉬우며 재사용이 가능하고 다양한 크기의 웰 플레이트와 페트리 접시에 맞게 조정할 수 있었습니다. 그것은 750 개의 균질한 마이크로 절제 웰 또는 6 웰 플레이트 당 4, 716 웰을 생성했습니다. 플레이트에서 장치를 조기에 빼내면 비접착식 금형이 파괴되고 미세 절제 형상이 변형되었습니다.
비부착성 아가로스 곰팡이에 파종된 세포는 침전되어 대략 24시간 후에 조직 스페로이드를 형성했습니다. 이 방법론은 스페로이드의 모양, 크기 및 생존력을 유지함으로써 스페로이드의 대규모 생산을 성공적으로 입증하고 수개월 동안 스테로이드 배양을 지원했습니다. 이 절차를 생각할 때 기억해야 할 가장 중요한 것은 기포를 방지하기 위해 장치를 조심스럽게 삽입하고 세포를 방해하지 않도록 배양 배지를 부드럽게 추가하는 것입니다.
이 절차에 따라 약물 검사 및 유전자 발현 분석을 수행할 수 있습니다. 약물 효능, 풍미 및 치료에 대한 유전자 반응에 대한 질문에 답합니다. 이 기술은 3D 바이오 프린팅에 중요한 대규모 고품질 스페로이드 생산을 가능하게 함으로써 조직 공학 및 재생 의학의 새로운 연구를 가능하게 할 것이며, 제약 및 화장품 독성 테스트를 위한 세포 품질과 수량을 향상시킬 것입니다.
